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雷公藤多甙对哮喘患者外周血单个核细胞白介素5、白介素3 mRNA表达的影响
目的:研究雷公藤多甙在哮喘治疗中的作用机理.方法:中度哮喘患者13例,经雷公藤多甙(1mg/kg/日)治疗6周,斑点杂交法检测治疗前、后外周血单个核细胞(PBMC)IL-5Mrna、IL-3mRNA相对含量的变化.结果:哮喘患者PBMC IL-5mRNA、IL-3mRNA表达显著高于正常对照组.雷公藤多甙治疗后PBMC、IL-5mRNA表达较治疗前显著降低(P＜0.01),IL-3mRNA虽有下降但无统计学意义.结论:雷公藤多甙通过抑制PBMC、IL-mRNA表达在哮喘治疗中起作用.
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川崎病血小板升高与血清血小板生成素、白介素3、白介素6的关系研究
目的 分析川崎病(KD)患儿血小板数量与血小板生成素(TPO)、白介素3(IL-3)、白介素6(IL-6)的水平变化,探讨KD血小板升高的机制.方法 川崎病患儿35例,正常对照儿童25例.全自动血细胞分析仪检测两组外周血血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW),双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TPO、IL-3和IL-6水平.结果 KD患儿急性期PLT数量有所增高,但与对照组比较,差异尚无统计学意义;恢复期PLT增高明显(P<0.001).KD患儿急性期血清TPO、IL-3和IL-6水平明显增高,与对照组及恢复期比较,差异有统计学意义(P<0.001).MPV在急性期也较恢复期及对照组明显增高(P<0.001).相关分析显示,KD息儿血小板计数与TPO、IL-3、IL-6水平呈负相关,MPV与TPO和IL-6水平呈正相关.结论 KD急性期血清细胞因子TPO、IL-3、IL-6等水平的升高可能是恢复期血小板数量增多的主要原因.
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免疫毒素IL-3-PE38KDEL的表达及活性测定
目的:制备具有杀伤活性的新型抗白血病免疫毒素.方法:在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopmpyl-beta-D-thmgalac-top yranoside,IPTG)的诱导下,高效表达免疫毒素IL3-PE38KDEL,采用细胞毒性实验.对毒素活性进行检测.结果:免疫毒素IL3-PE38KDEL以包涵体形式为主高效表达,该蛋白具有较好的毒素活性.结论:免疫毒素IL3-PE38KDEL具有良好的生物学活性,为其作为抗白血病药物的进一步研究打下了基础.
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IL3-PE38KDEL融合基因的构建及原核表达
目的:构建原核表达载体PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL,并诱导和鉴定其蛋白表达.方法:用PCR方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体PQE30-Linker中得到融合基因PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL.重组载体经酶切,菌落PCR鉴定,DNA序列分析插入片段完全正确,转化感受态大肠杆菌SG13009,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析分子量大小,Western blot鉴定.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,菌落PCR及DNA序列分析表明重组表达载体PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL构建成功,IPTG诱导后得到了与预计分子量相符的目的蛋白.经Western blot鉴定在分子量57 kD处有明显特异性条带,说明目的蛋白正确表达.结论:成功构建融合蛋白IL3-PE38KDEL,为后续的蛋白质纯化及功能研究奠定基础.
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pIRES2-FL-IL-3转染协同促进脐血干细胞增殖的研究
目的 观察真核共表达质粒载体pIRES2-FL-IL-3转染对脐血干细胞增殖的影响及目的蛋白IL-3和FL(Flt3 ligand)的表达变化.方法 分为4组:空白对照组(对照组)、pIRES2-IL-3组(IL-3组)、pIRES2-FL组(FL组)和pIRES2-FL-IL-3组(共表达组).通过台盼蓝染色及MTT法检测pIRES2-FL-IL-3转染(共表达组)对脐血干细胞细胞存活率及增殖的影响,RT-PCR技术、Western blot技术检测脐血干细胞FL和IL-3的mRNA水平和蛋白表达.结果 共表达组细胞存活率无显著变化(P＞0.05),MTT法检测细胞增殖显著高于对照组,共表达组IL-3及FL mRNA水平和蛋白均显著高于对照组,并且高于IL-3组和FL组.真核共表达质粒载体pIRES2-FL-IL-3转染脐血干细胞后细胞存活率无显著变化(P＞0.05),结论脐血干细胞增殖显著增强,目的蛋白能得到有效表达.
