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不同浓度叠氮溴化丙啶和照射协同灭活 大肠杆菌8099 DNA效果评价
目的 评价不同浓度叠氮溴化丙啶(PMA)在不同照射时间对大肠杆菌DNA灭活的效果,确定在实际使用中的佳浓度和照射时间.方法 选择相当于107 cfu大肠杆菌(8099)的DNA作为灭活对象,加入终浓度为50μmol/ml、100μmol/ml、150μmol/ml和200μmol/ml的PMA,使用波长为460 nm的LED灯,分别照射5 min、10 min和15 min,然后进行Real Time PCR扩增.结果 当PMA的浓度达到150μmol/ml,照射5 min时,大肠杆菌Real Time PCR扩增结果为阴性.结论 在实际使用中,要完全灭活107 cfu的大肠杆菌(8099)的DNA,需要≥150μmol/ml的PMA,照射时间≥5 min较合适.
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PMA－qPCR 定量检测畜禽肉类中沙门菌活菌的研究
目的：将叠氮溴化丙锭（PMA）与实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）相结合定量检测畜禽肉类中活的沙门菌。方法通过优化光反应时间、PMA 浓度等 PMA 作用条件，建立 PMA－qPCR 方法，构建重组质粒建立标准曲线，考察该方法的灵敏性、特异性，并将该方法用于定量检测未经增菌培养的畜禽肉类样品中的沙门菌。结果在 PMA 浓度为15μg／mL、曝光5 min 的条件下可完全抑制样品中死菌 DNA 的扩增。建立的定量标准曲线循环阈值（Ct 值）与质粒标准品模板的拷贝数呈良好线性关系（r 2＝0．9979），低可检出10拷贝／反应体系。所建立的 PMA－qPCR 方法低可检出21拷贝／μL 沙门菌。采用 PMA－qPCR 检测人工染菌鸡肉样品，低可检出103 CFU／mL沙门菌。结论用 PMA－qPCR 方法可实现定量检测畜禽肉类样品中活的沙门菌，从而达到快速检测的目的。
关键词： 沙门菌 活菌 叠氮溴化丙啶 荧光定量聚合酶链反应 畜禽肉类 -
PMA-实时荧光PCR快速检测蔬果中金黄色葡萄球菌活菌
目的 将叠氮溴化丙锭(PMA)与实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术相结合,快速检测蔬果中金黄色葡萄球菌活菌.方法 通过对影响PMA作用的关键因素,包括PMA浓度、光照时间以及活、死菌比例混合等进行试验,确定PMA的作用条件.以金黄色葡萄球菌nuc基因为靶基因,建立PMA-实时荧光定量PCR方法,并构建金黄色葡萄球菌重组质粒标准品,用于检测蔬果中金黄色葡萄球菌活菌.结果 在PMA 30 μg/ml浓度下,曝光5min,可实现PMA筛选金黄色葡萄球菌活菌的作用.由构建的质粒标准品模板建立标准曲线表现出良好线性关系,相关系数r=0.9995,所建立的方法灵敏度可达到14 copies/μl,且特异性良好.经2h增菌后用PMA进行筛选,再用荧光定量PCR检测,可实现快速对蔬果样品中活的金黄色葡萄球菌的检测.结论 用PMA-实时荧光定量PCR方法可快速检测蔬果中活的金黄色葡萄球菌,可为食品安全风险监测提供可靠数据.
