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北京市西城区食源性与临床感染性单核细胞增生李斯特菌PFGE和MLST分型研究
目的 研究北京市西城区食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,Lm)的脉冲场凝胶电泳(plused-field gel electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分型特征,分析两种分型方法的应用价值.方法 采用PFGE和MLST两种方法对2012-2015年50株食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌进行分型研究.结果50株单核细胞增生李斯特菌PFGE分型得到23种型别,GX6A16.CN0004为优势带型.MLST分析获得12个型别,ST9为优势型别.其中5组数据是ST型别只对应一种PFGE型别,3种PFGE型别同时存在食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌,并且其ST型别进化关系比较远.结论 北京市西城区不同来源单核细胞增生李斯特菌污染长期存在,出现致病型别,并且致病性单核细胞增生李斯特菌的遗传关系呈多元化.两种分子分型方法的结合,从基因水平上解释了单核细胞增生李斯特菌的变化趋势及流行特征.
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耐万古霉素屎肠球菌基因检测与多位点序列分析分型研究
目的：了解医院分离的屎肠球菌耐药基因分布及MLST分型特点，为医院合理应用抗菌药物和医院感染控制提供理论依据。方法收集医院2013年1月－2014年12月分离的肠球菌112株，采用 Phoenix微生物全自动鉴定系统进行菌株鉴定；采用 PCR方法检测 V an A 、V an B、V an C1、V an C2／3、V an D、V an E、V an G、VanM、TetM、ermB、TEM、aac（6′）‐aph（2＂）、aph（3′）‐Ⅲ、ant（6′）‐Ⅰ等耐药基因；扩增7个管家基因 adk、atpA、ddl、gdh、purK、gyd、pstS确定屎肠球菌的序列型。结果3株耐万古霉素屎肠球菌2株Van A 、1株Van B、3株ermB、3株 aac （6′）‐aph（2＂）、3株 aph （3′）‐Ⅲ基因阳性；MLST分型为3个ST型，1号菌株为ST78型，2号菌株、3号菌株为新的ST型分别是 ST1014、ST1015；药敏试验显示，万古霉素 MIC≥256μg／ml、替考拉宁的M IC≥256μg／m l或M IC 16μg／m l、对利奈唑胺M IC 2μg／m l。结论耐万古霉素屎肠球菌不断增多，医护人员应加强手卫生、接触隔离、环境消毒、合理使用抗菌药物等措施，以控制VRE的感染发生。
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乡村医疗机构与城市医院来源的艰难梭菌MLST分型对比研究
目的 初步了解农村社区艰难梭菌流行状况及分子生物学特征.方法 对河南省济源市某乡村医疗机构送检的7株艰难梭菌进行生化鉴定和分子生物学方法鉴定,并进行MLST分型分析,同时与北京某三甲医院的84株艰难梭菌进行对比,用eBURST软件聚类分析,寻找其中可能的关联.结果 源自河南济源市某乡村医院的7株菌均属艰难棱菌,PCR毒素基因鉴定结果显示,其中两株为A-B+菌株,其MLST分型结果是ST37;5株为A+B+菌株,其中4株对应ST35,1株对应ST3；两重来源的菌株中均是毒素基因A+B+菌株占优势；乡村医疗机构的7株艰难棱菌中未发现新的与David MLST数据库中不同的ST型别,未发现不同于北京城市医院的ST型别.结论 David方案适合种群结构和全球流行病学研究,且其数据库全球共享,便于数据交换；该次研究中未发现新的ST型别,所有菌株ST呈散在分布.
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四川部分地区禽源空肠弯曲菌MLST分型及遗传进化分析
目的 为了解四川部分地区分离到的48株禽源空肠弯曲菌间的分子特征,以对来源不同的空肠弯曲菌进行分子分型及遗传进化分析.方法 本研究参照MLST数据库,选取了空肠弯曲菌MLST分型7个管家基因aspA,glnA,glyA,gltA,tkt,pgm和uncA作为目的基因分别扩增及测序,并将所得序列经比对后进行遗传进化分析.结果 48株分离株中共含24种不同的序列型分属于9种不同的克隆系及11种独特型,其中22株分离株含有新序列型,占分离株的45.83％(22/48);9种不同的克隆系中以CC-21、CC-353、CC-464克隆系所含菌株相对较多,而克隆系CC-45、CC-48少,均为1株分离株;11种独特型共存于21株分离株中,其中以ST-8675序列型多,为8株.遗传进化树显示,属同一克隆系的不同型别间的分离株亲缘关系较近,如同属于CC-21克隆系的ST-298与ST-760型别分离株处于同一小分支、亲缘关系较近,但不同克隆系的分离株间遗传进化关系较远,鹌鹑源分离株(V13-20)单独处于一大分支与其余禽源分离株间的亲缘关系远.总体而言,不同地区、宿主来源的分离株呈现遗传多样性.结论 本研究中分离株间具有基因多样性,MLST分型为了解该地区空肠弯曲菌的遗传特性和分布特点提供了参考依据.
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2013-2015年北京市丰台区腹泻患者肠产毒性大肠埃希菌的MLST分型
目的 了解2013-2015年北京市丰台区腹泻患者肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)分布与分子分型特征,为ETEC的分子流行病学研究提供参考依据.方法 对2013-2015年北京市丰台区腹泻病例的粪便标本进行致病菌分离培养,采用MLST法,用eBURST V 3软件和MEGA 5.0对分离株进行分子分型及进化树分析.结果 从1599例腹泻病患者粪便标本中检出ETEC 58株,分离率为3.6％(58/1599).58株ETEC分离株MLST分型结果为共分成19个型别,部分试验菌株形成2个ST克隆群,分别为STC-6007、STC-3103,分别同属于一个进化分支,多数菌株的遗传关系较远,可能与菌株来源多样有关.结论 ETEC感染2013-2015年在丰台区腹泻疾患中占较高比例,ST-6010与ST-69是主要的ST型别.
