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利用慢病毒表达的RPS19-shRNA在HEL细胞中构建不依赖p53通路的DBA细胞模型
目的 约25％的先天性纯红细胞再生障碍性贫血(Diamond-Blackfan anemia,DBA)病人携带核糖体蛋白基因RPS19突变,RPS19对红系分化的分子调控机制尚不明晰.本研究采用RPS19-shRNA慢病毒构建RPS19表达敲降的HEL细胞株作为新的DBA细胞模型.实验结果表明:构建的HEL细胞株在细胞凋亡及红细胞分化基因表达方面的表型和已报道的DBA细胞和动物模型类似.结论:由于HEL细胞中TP53基因突变失活,因此构建的RPS19-shRNA HEL细胞株可作为新的的细胞模型,用于探索RPS19基因不依赖于p53通路的红细胞特异的分子调控机制.
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Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562的抗肿瘤作用及机制研究
目的:探讨Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562细胞的凋亡、增殖和细胞周期的影响及其作用机制.方法:Rigosertib梯度浓度作用于HEL和K562细胞,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,WST-1法绘制细胞增殖曲线,PI染色流式细胞术检测细胞周期,流式细胞术胞内染色检测胞内信号通路蛋白表达.结果:Rigosertib明显诱导HEL和K562细胞凋亡且呈现时间依赖性(r =0.997)和剂量依赖性(r =0.987);以低剂量Rigosertib浓度(0.5μnol/L)分别作用于HEL和K562细胞6-54 h,明显抑制HEL和K562细胞增殖,诱导HEL和K562细胞阻滞于G0/M期,G1期细胞比例明显降低.流式细胞术分析显示,Rigosertib激活胞内凋亡蛋白cleaved caspase 3和cleaved PARP蛋白的表达,同时抑制增殖蛋白BCL-2和Cyclin D1蛋白的表达.此外Rigosertib明显抑制AKT、磷酸化AKT(S473)和磷酸化GSK-3α/β(S21/9)的表达.结论:Rigosertib诱导白血病细胞系HEL和K562细胞凋亡,增殖抑制和细胞周期阻滞,其抗肿瘤作用可能通过抑制AKT-GSK信号通路而实现的.本研究为rigosertib进一步应用于临床前研究提供了实验依据.
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吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞增殖的抑制作用
本研究探讨两种分子靶向治疗药物酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼和拉帕替尼对JAK2 V617F阳性的骨髓增殖性疾病(MPD)的潜在治疗作用.吉非替尼(0.5、1、5、10、25 μmol/L)和拉帕替尼(0.5、1、2、4、8、16μmol/L)分别作用于携带JAK2 V617F突变的人红白血病细胞株(HEL细胞系).用MTT法检测2种药物对HEL细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果表明,吉非替尼可明显抑制HEL细胞的增殖,呈浓度依赖性(24和48h的相关系数为0.991和0.895),48 h的IC50为5.4 μmol/L.拉帕替尼作用48 h抑制细胞增殖的IC50为19.6 μmol/L.吉非替尼对HEL细胞有显著的诱导凋亡作用,呈浓度依赖性(相关系数为0.896),随药物浓度的增加,凋亡细胞比例的增加.此外,吉非替尼明显地影响细胞周期,将细胞周期阻滞于G0/G1期.结论:吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞有显著的抑制增殖作用,可进一步用于JAK2 V617F阳性的MPD靶向治疗的研究.
关键词： 骨髓增殖性疾病 JAK2 V617F HEL细胞系 吉非替尼 拉帕替尼 -
COX-2抑制剂对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡及迁移的影响
目的:探讨环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其作用机制.方法:不同浓度的塞来昔布处理HEL细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡;Transwell小室检测细胞迁移率;RT-PCR检测COX-2及JAK2 mRNA水平;Western blot检测COX-2及p-JAK2蛋白表达.结果:塞来昔布能够时间和剂量依赖性抑制HEL细胞增殖,不同浓度(25、75、125 μmol/L)的塞来昔布在48 h时对细胞生长抑制率分别为(9.96 ± 0.82)％、(18.46±2.01)％、(21.36±2.48)％(P＜ 0.05);Hoechst33342凋亡细胞染色显示125 μmol/L塞来昔布处理HEL细胞后,凋亡细胞明显增多;细胞迁移实验结果显示75 μmol/L塞来昔布处理细胞24h后漏出细胞为(22.13±7.51)个,明显低于对照组(77.89±6.94)个,P＜0.05;RT-PCR结果显示不同浓度塞来昔布处理HEL细胞48 h后COX-2 mRNA呈剂量依赖性减低,而对JAK2 mRNA无明显影响;Western blot结果显示塞来昔布处理HEL细胞COX-2蛋白表达明显减低(P＜0.05),而对p-JAK2无明显影响.结论:塞来昔布能够抑制HEL细胞增殖,可能与抑制COX-2表达有关,而对JAK2信号通路无明显影响.
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IFN-α2b对JAK2V617F突变的骨髓增殖性肿瘤COX-2表达及血管新生的影响
目的 研究干扰素-alpha-2b (IFN-α2b)对骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者JAK2激酶、环氧化酶-2(COX-2)及微血管密度的影响及人红白血病HEL细胞系中JAK2V617F与COX-2之间的关系.方法 收集在保定市第一医院接受初次治疗的42例有JAK2V617F突变的MPN患者,其中17例患者为IFN-α2b治疗组(给予IFN-α2b肌肉注射治疗),25例为初治组(未行治疗).另取同期10例特发性免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者作为对照.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测MPN患者JAK2V617F/JAK2突变量,免疫组化检测MPN患者和ITP患者骨髓病理组织p-JAK2、COX-2及CD105标记的微血管密度(MVD).用不同浓度IFN-α2b作用于HEL细胞系,CCK-8检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,Transwell小室检测细胞迁移能力,半定量PCR检测HEL细胞中JAK2、COX-2 mRNA表达水平,Western blot检测p-JAK2、COX-2蛋白表达水平.结果 初治组患者pJAK2、COX-2表达水平及MVD高于对照组,IFN-α2b治疗后患者p-JAK2、COX-2及MVD表达水平减低.不同剂量IFN-α2b作用HEL细胞48 h,细胞增殖抑制率和细胞凋亡率随其剂量增加逐渐上升,JAK2及COX-2 mRNA及p-JAK2、COX-2蛋白表达随其剂量增加逐渐降低.细胞迁移实验结果发现加入0.5×104 U/L IFN-α2b处理HEL细胞24 h,迁移至下室的细胞数低于对照组(P＜0.05).结论 IFN-α2b通过调控JAK2信号通路抑制COX-2及MPN患者血管新生.
