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聚合酶链反应技术对棘阿米巴角膜炎诊断的临床应用
目的探讨聚合酶链反应(PCR)技术临床应用于棘阿米巴角膜炎诊断的可行胜及优越性.方法以一段特异性通用引物并配合热启动聚合酶链反应技术来检测临床标本中的棘阿米巴原虫.结果在门诊初诊为棘阿米巴角膜炎的13例13只患眼中,通过PCR检测法有11眼证实为棘阿米巴原虫感染,同时角膜刮片染色后镜检有5例发现了棘阿米巴包囊.结论聚合酶链反应技术对棘阿米巴角膜炎的诊断有重要的临床应用价值.
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乙型肝炎肝硬化病人的乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异及其对e抗原系统的影响
目的 研究乙型肝炎肝硬化病人血清的乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(CP)和前C基因变异.方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测34例活动性肝硬化和75例慢性乙肝病人血清的HBVCP和前C基因序列,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量,及通过荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBV DNA.结果 (1) CP双变异(nt 1762A→T和1764G→A)在肝硬化(LC)组的发生率显著高于慢性乙型肝炎(CH)组(76.5% vs 48.0%);前C终止变异(nt1896G→A)则在LC组和CH组的发生率无显著差异(35.3% vs 26.7%).(2)CP双变异虽使HBeAg表达显著下降,但幅度较小;与对照组相比,CP双变异组的HBeAb阳性率也无明显升高;前C终止变异则大幅度影响HBeAg表达,显著增高HBeAg/HBeAb转换率;终止变异联合双变异组的HBeAg含量及HBeAb阳性率同终止变异组相似.(3)HBeAb阳性LC组的前C终止变异的发生率显著高于HBeAb阴性LC组(75.0% vs 5.6%);而CP双变异则在两组LC中无明显差异(75.0% vs 77.8%).结论 CP双变异可能与乙型肝炎肝硬化发病机制有关;前C终止变异则与肝硬化病人的HBeAg/HBeAb转换有关.
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PCR结合反向杂交与细胞培养检测沙眼衣原体感染
目的建立聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术快速检测沙眼衣原体,用于泌尿生殖道沙眼衣原体感染的诊断.方法用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术对182例泌尿生殖道炎症病人的尿道分泌物进行沙眼衣原体检测,并与传统的细胞分离培养法的敏感性进行了比较.结果采用聚合酶链反应结合反向杂交技术检测出阳性标本52份(28.57%),分离培养法测出阳性标本50份(27.47%).以细胞培养法结果为金标准,聚合酶链反应结合反向杂交技术的敏感性和特异性分别为100%和98.48%,阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别为96.15%、100%.结论与细胞培养法相比,聚合酶链反应结合反向杂交技术敏感而快速,是临床应用的选择之一.
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HBV感染者血清HBV标志物与HBVDNA相关性
目的探讨HBV感染者常见血清HBV标志物模式的临床意义及与血清HBV DNA之间的相关性.方法应用荧光-聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测了270例HBV感染者血清HBV DNA和HBV标志物.结果 270例HBV感染者中HBV标志物以HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性,HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性与HBsAg、HBcAb阳性三组为常见,其构成比分别为0.3296、0.2963、0.3444.HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性,HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性与HBsAg、HBcAb阳性,三组HBV DNA阳性率分别为86.5%、41.3%、37.6%.HBeAb和HBcAb阳性组及单一HBsAg阳性组亦可检出HBV DNA.结论临床上常规测定血清HBV DNA对深入了解HBV标志物模式的意义及病情的发展与预后具有重要的价值.
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鲍曼不动杆菌启动子突变TEM-1型β-内酰胺酶基因研究
目的分析浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶(BLA)耐药基因序列,并确定其亚型.方法采用微量稀释法对在2001年1月至2002年12月间自临床分离的39株鲍曼不动杆菌进行药敏试验、三维试验检测ESBLs,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测TEM、SHV、OXA、CTX-M、PER及VEB型BLA耐药基因,并对7株TEM基因型阳性的分离株(编号分别为HZ08、HZ09、HZ17、HZ24、HZ35、HZ37、HZ40)进行耐药基因序列分析.结果 39株鲍曼不动杆菌TEM型BLA耐药基因PCR扩增均呈阳性,其余基因PCR扩增均为阴性.7株TEM基因测序结果表明他们的基因片段全长均含1022个核苷酸,经GenBank网上同源性比较,发现这些序列与广谱酶TEM-1(GenBank注册号:AF188200)的编码区域序列相同,但在启动子区域-47位点处均有1个核苷酸发生突变(G→T).其中HZ40株的TEM-1序列已在GenBank核酸数据库中成功注册(GenBank注册号:AY263331).HZ08、HZ09、HZ24、HZ35、HZ37和HZ40株ESBLs均阳性,HZ17株ESBLs阴性.结论临床分离的鲍曼不动杆菌携带伴启动子区域核苷酸突变的TEM-1亚型BLA耐药基因,此基因可以导致ESBLs表型阳性.
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菌悬液直接进行聚合酶链反应快速检测耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的研究
目的对不提染色体DNA用菌悬液直接进行PCR扩增检测mecA基因诊断耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)方法的可靠性和临床实用性进行评估.方法对临床分离的215株葡萄球菌分别进行提取染色体DNA后PCR和不提DNA直接PCR检测mecA基因并比较其结果,同时测定其灵敏度.结果 215株葡萄球菌中mecA基因阳性为120株,占55.8%,两种方法结果一致.低检出浓度为2.5×105CFU/mL.结论不提染色体DNA直接PCR检测mecA基因是检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的可靠而实用的方法,更简单快速且成本更低.
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尿脱落细胞中端粒酶亚单位hTERT mRNA的检测及在膀胱移行细胞癌诊断中的应用
目的研究端粒酶亚单位hTERT mRNA表达在膀胱移行细胞癌(Transitional cell carcinoma,TCC)临床实验诊断中的应用,为更灵敏、更特异的分子肿瘤标志物的临床应用提供理论依据.方法应用实时荧光定量RT-PCR,定量检测26例膀胱移行细胞癌患者、18例阴性对照,其中12例为良性泌尿系统疾病患者、6例为正常人尿液中脱落细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA的表达.结果26例膀胱移行细胞癌患者中有20例hTERT mRNA呈阳性表达,12例泌尿道良性疾病患者和6例正常人都为阴性表达,实时荧光定量RT-pCR检测hTERT mRNA相对表达量用于膀胱移行细胞癌诊断的特异性、敏感度、诊断正确率分别为100%(18/18)、76.9%(20/26)、86.36%(38/44);hTERT mRNA阳性表达率与膀胱移行细胞癌不同病理分级(P＜0.01)和临床分期(P＜0.01)显著相关;hTERT mRNA的相对表达量与膀胱移行细胞癌不同病理分级(P＜0.01)和临床分期(P＜0.05)显著相关.结论实时荧光定量RT-PCR检测尿液中端粒酶亚单位hTERT mRNA的表达,可用于膀胱移行细胞癌的早期诊断;尿液脱落细胞hTERT mRNA的表达量可用于膀胱癌患者的病理分级和临床分期的判定.此诊断方法为非侵入诊断,病人无痛苦,对膀胱移行细胞癌早期诊断、预后和随访有重要的意义.
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PCR实验室的污染与对策
目的: 探讨PCR实验室防止和处理污染的办法,方法: 从PCR技术对环境的要求和污染的3个来源分析污染的原因,提出应采取的控制方法和预防措施.结果: 有效防止实验室污染,结论 ;PCR技术在不断发展,随着新技术的出现,PCR技术及其污染控制策略将会更加完善.
