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胎猪皮肤前体组织异种移植研究
目的 系统筛选猪胚胎皮肤前体组织异种移植的佳妊娠时间窗,了解其创面修复能力. 方法 取胎龄35、42、56、70 d的胎猪皮肤前体组织,制成微粒后移植于BABL/c裸鼠背部创面,以整形患者术后剩余皮肤或者成年猪皮覆盖.观察术后移植物生长发育特性,并于移植后6、12周取材,用组织学方法观察其形态结构及成瘤性. 结果 胎猪皮肤前体组织移植后具有如下特点:(1)能成活并继续生长发育,微粒可融合成片;胎龄35、42、56、70 d的前体组织移植后12周,新生组织面积分别为(18±8)、(47±6)、(31±12)、(20±8)mm2,其中胎龄42 d的组织与其余三者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)新生(猪)皮肤组织具有表皮层和真皮层,真皮乳头明显.(3)能生长成为具有毛发、皮脂腺及汗腺等皮肤附属器的"完整"皮肤,且表皮层有黑索细胞.(4)胎龄56、70 d的胎猪皮肤前体组织移植后未出现畸胎瘤. 结论 胎龄56 d的胎猪皮肤前体组织可用于异种移植修复皮肤创面.
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嵌合体大鼠诱导异种皮肤移植免疫耐受的初步研究
目的 探讨嵌合体大鼠诱导异种皮肤移植免疫耐受的可行性.方法 采集兔骨髓干细胞,经行宫内胎鼠移植以及对新生子鼠行肝内注射,制作兔骨髓干细胞嵌合体大鼠模型.6周后将15只嵌合体大鼠分为A组(8只)、B组(7只).将A组大鼠皮肤移植给供髓兔,将7只非嵌合体大鼠皮肤移植给非供髓兔作A组对照;将B组大鼠、7只非嵌合体大鼠(B组对照)皮肤同时移植给供髓兔.记录移植后皮片成活时间、创面愈合时间.结果 A组对照移植皮片成活(9.3±1.8)d,创面于(20.9±2.1)d愈合;A组移植皮片成活(15.1±2.6)d,创面于(18.5±1.3)d愈合.B组及其对照移植皮片的成活时间、创面愈合时间与A组相似.与各自对照皮肤移植相比,A、B组皮片成活时间延长(P＜0.01),创面愈合时间缩短(P＜0.05或P＜0.01).结论 嵌合体大鼠行异种皮肤移植后能诱导移植皮片免疫耐受,使其成活时间明显延长,创面愈合时间缩短.
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真皮模板对深度烧伤患者创面愈合过程中转化生长因子β1及其受体和信号转导蛋白Smad 3表达的影响
目的观察真皮模板对深度烧伤创面愈合过程中转化生长因子(TGF)β1及其受体和信号转导蛋白Smad 3表达的影响. 方法 20例烧伤患者四肢Ⅲ度创面切痂后分为两部分,进行同体对照试验:其一移植真皮模板(异体脱细胞真皮基质)+自体刃厚皮片,设为模板干预组;另一部分单纯移植自体刃厚皮片,为对照组.分别在术后1、2、3、4周取患者移植创面组织标本进行免疫组织化学染色,采用图像分析系统测定标本中 TGF-β1、TGF-β1受体(TβR)Ⅰ、TβRⅡ及Smad 3蛋白的阳性表达率. 结果移植术后1-4周两组创面组织切片中均可见TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad 3蛋白呈阳性表达.随着创面逐渐愈合,四者的阳性表达率均逐渐减少,术后1周模板干预组TGF-β1的表达率为(13.08±4.65)%,4周时为(9.03±1.89)%.相同时相点下模板干预组各项指标的阳性表达率均低于对照组(P<0.05). 结论真皮模板与自体刃厚皮复合移植可降低深度烧伤创面TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad 3蛋白的表达水平,这可能是真皮模板减轻创面瘢痕增生的机制之一.
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复合皮移植的实验研究与临床应用
目的寻求一种较理想的真皮替代物,用以修复全厚皮肤缺损创面.方法(1)将异体/异种脱细胞真皮基质(allo/xeno-ADM)+自体刃厚皮组成复合皮(CS),以自体刃厚皮作对照,采用一步移植法进行实验研究和临床研究.移植术后应用生物化学及免疫学方法观察移植物抗原性的改变、表皮-真皮连接区(DEJ)基底膜带结构的再形成情况.(2)在此基础上,应用前述CS移植技术治疗53例全厚皮缺损或瘢痕切除患者,观察术后皮片成活情况并作随访.结果CS一步法移植后的成活情况良好.(1)移植后28周可见DEJ基底膜带重新形成,基底膜细胞呈极性生长并呈波浪形排列,真皮乳头与皮钉再生.allo-ADM的抗原性明显低于xeno-ADM,仅在术后早期有少数炎性细胞浸润,未见明显的免疫排斥反应.(2)移植于53例患者的70块CS中,65块完全存活占92.9%,2块因更换敷料不当部分存活,3块因创面感染移植失败.患者长随访时间为8.5年,所移植的CS质地和色泽接近正常皮肤.结论allo/xeno-ADM的抗原性很低,移植后能发挥长期的真皮支架或诱导组织再生的真皮"模板"作用.
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细胞因子对异种脱细胞真皮基质免疫调节作用的临床研究
目的探讨烧伤患者接受异种/异体脱细胞真皮基质(xeno-/allo-ADM)移植后全身和局部多种细胞因子与移植物近期转归的关系. 方法在大面积烧伤患者的四肢切痂创面上,移植xeno-ADM(12例,19块)或allo-ADM(15例,18块),其上覆盖自体超薄断层皮片,并以6例单纯移植自体中厚断层皮片(auto-TTS)的烧伤患者为对照.移植物成活后4～8周,收集局部组织标本、血清和xeno-ADM排斥后的创面渗出液,采用免疫组织化学染色与酶联免疫吸附法(ELISA),检测白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ型干扰素(IFN-γ)的含量. 结果免疫组织化学染色结果显示,移植物内IL-1β、IL-4、IL-6、TNF-α和IFN-γ的阳性细胞密度或着色强度相比较,xeno-ADM > allo-ADM > auto-TTS (P<0.05).ELISA检测结果显示,xeno-ADM被排斥后创面渗出液中IL-4、IL-6、TNF-α和IFN-γ水平明显高于自体血清,但其血清IL-4与IFN-γ水平分别低于和高于未排斥时.xeno-ADM移植后血清中IL-4、IFN-γ水平明显高于allo-ADM和auto-TTS(P<0.05～0.01). 结论 xeno-ADM移植后可在局部检测到高水平的IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ,可能与细胞杀伤和细胞因子介导的免疫放大作用有关.这些细胞因子的动态变化,将有助于解释xeno-ADM移植的不良转归.
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用含活性细胞的胶原支架复合皮修复小鼠全层皮肤缺损的研究
目的构建具有活性细胞成分的复合皮,观察其在修复小鼠全层皮肤缺损中的作用.方法将异种成纤维细胞种植于脱软骨细胞胶原支架上培养3 d,形成真皮替代物.再将其放置于培养的上皮细胞膜上共同培养10 d,组成含活性细胞成分的复合皮.将复合皮移植于小鼠的全层皮肤缺损处,记录其生长情况并于术后定期活检,进行组织学观察. 结果胶原支架中可见生长良好的成纤维细胞和复层表皮细胞.移植术后1周,复合皮与小鼠缺损创面粘连紧密,可见明显的血管化.术后6周,创面愈合良好,移植物与创缘融合,未见明显排斥反应. 结论以脱软骨细胞胶原为支架构建的复合皮,可作为皮肤替代物修复全层皮肤组织缺损.
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异种脱细胞真皮基质抗原性的实验研究
目的观察不同方法制备的异种脱细胞真皮基质(Xeno-ADM)埋植物的抗原性差异. 方法将猪断层中厚皮片采用胰蛋白酶+triton X-100等处理,制成Xeno-ADM,分为戊二醛交联的Xeno-ADM1组、网状交联的Xeno-ADM2组、未交联的Xeno-ADM3组、动物先用Xeno-ADM蛋白致敏后再移植交联的Xeno-ADM4组和未交联的异体兔Allo-ADM对照组.分别将移植物埋植于5组共计25只日本白兔的耳部和背部皮下,术后2～32周检测兔血清抗ADMs抗体效价,并观察移植物大体和组织学变化. 结果 Xeno-ADM4埋植物组血清抗Xeno-ADM蛋白抗体效价高;排除致敏因素的影响,Xeno-ADM各组血清抗体滴度依次为:Xeno-ADM3组>Xeno-ADM2组>Xeno-ADM1组(P<0.05～0.001);在Allo-ADM组中,有40%的血清样本呈现出抗Allo-ADM蛋白抗体阳性.组织学上,Xeno-ADM移植部位有激烈而持久的炎症反应,明显强于Allo-ADM异体埋植对照组;ADM被降解吸收的程度依次为:Xeno-ADM3>Xeno-ADM2>Xeno-ADM4>Xeno-ADM1>Allo-ADM(P<0.05～0.001),在交联型ADM组易产生异物巨细胞反应. 结论 Xeno-ADM的免疫原性强于Allo-ADM,诱导宿主产生IgG限制的免疫反应;大张变性的ADM埋植物能降低抗原-抗体反应,减缓炎症免疫反应导致的ADM结构破坏和降解吸收.
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异种或同种异体脱细胞真皮基质移植后免疫细胞分型的研究
目的比较异种脱细胞真皮基质(Xeno-ADM)与同种异体脱细胞真皮基质(Allo-ADM)移植物免疫学反应的差异.方法选用健康小猪和健康自愿者的中厚皮,分别制成Xeno-ADM和Aoll-ADM后,与深度烧伤患者的断层超薄自体皮(UTS)重叠,即时覆盖其切痂创面,相应设为Xeno组(26例)和Aoll组(10例).于另8例深度烧伤患者切痂创面上移植单纯断层自体中厚皮(TTS),设为对照组.采用免疫组化方法,于移植术后进行组织学观察,并检测外周血和移植物内免疫细胞分型情况.结果与对照组比较:(1)移植术后,Xeno组和Allo组外周血免疫细胞分型情况无明显改变(P＞0.05).(2)Xeno组移植物局部长期存在炎症/免疫反应,其中80%以上为CD3+/CD4+和CD45RO+细胞,CD8+细胞、Vs8C+-浆细胞、CD57+的自然杀伤细胞(NK)相对较少;另可见嗜酸性粒细胞和CD68+/CD4+异物巨细胞反应,在发生排异反应前的Xeno-ADM中尤为明显(P＜0.05～0.01).Allo组仅在移植早期(术后8周以内)有中度炎症/免疫反应.结论人体对脱细胞真皮基质的特异性免疫反应,可能是在单核-巨噬细胞参与下、以CD4+T淋巴细胞介导的细胞免疫为主要表现;辅助性T细胞和巨噬细胞构成的异物巨细胞可能在其中起重要作用.
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异种脱细胞真皮基质与自体皮复合移植后基底膜重塑的实验观察
目的观察异种(猪)脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植模型中基底膜重塑的变化规律. 方法将异种(猪)脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植于大鼠创面,分别于移植后1、2、3、4、8、12、16周留取标本,采用免疫组化、透射电镜等方法,观察基底膜中层粘连蛋白的变化规律及12周时基底膜的超微结构,同时以单纯薄自体皮移植进行对照. 结果异种脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后,层粘连蛋白的表达高于单纯薄自体皮移植.12周时复合移植组基底膜清晰连续,半桥粒较多且分布均匀;薄自体皮组基底膜致密板模糊、不连续,半桥粒减少且分布不均. [ CX2 结论异种脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后,基底膜中层粘连蛋白表达增高,可能有利于复合皮移植后基底膜的重塑,增强表皮和真皮之间的连接,进而改善创面愈合质量.
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猪脱细胞真皮与自体皮复合移植的临床应用及远期疗效
目的 了解异种脱细胞真皮基质与自体皮复合移植修复深度创面的临床效果,并进行不同时期随访及组织学观察. 方法 2000年2月-2003年7月,采用猪脱细胞真皮基质与自体刃厚皮二步复合移植法修复深度创面152例.观察移植后1周的皮片成活率及移植后1、3、6、12个月瘢痕增生情况;5例患者在移植72个月后取该部位样本进行组织学检查,其中2例进行透射电镜观察.对本组患者进行不同时期随访并与自身其他部位其他移植方式比较. 结果 创面植皮完全成活者116例占76.3%,95%以上成活者36例占23.7%,无一例补充植皮.1个月后随访到127例患者,可见移植局部有轻度挛缩,皮片连接处有条索状瘢痕,质地比较柔软,无明显瘙痒或起疱.3个月随访到101例,见复合移植物有轻度挛缩,但与刃厚皮移植部位比较明显减轻,关节功能良好.6个月随访到82例,复合移植皮肤颜色、质地接近正常,瘢痕增生不明显.12个月随访到58例,移植皮肤接近正常,未见明显排异现象.72个月以上随访到16例,移植局部稍显干燥,无其他异常.组织学观察结果提示:移植部位组织结构与正常皮肤基本一致,真皮支架中可见不完整的小汗腺及参与汗腺组成的细胞. 结论异种脱细胞真皮基质与自体刃厚皮复合移植,可以与人体局部组织长期共存,无明显排异反应.不完整小汗腺及汗腺细胞的出现,可能成为皮肤功能重建中新的关注点.
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异种角膜在眼烧伤中的应用
目的:探索一种理想的眼烧伤治疗方法.方法 将55例(88眼)眼烧伤随机分成治疗组和对照组两组.治疗组30例(49眼),应用含药辐照异种角膜治疗;对照组25例(39眼)按常规治疗.结果 治疗组治愈32眼,治愈率65.31%;对照组治愈17眼,治愈率为43.59%.两组比较有显著性差异(P《0.05).结论 含药辐照异种角膜对眼烧伤具有良好的治疗效果.
