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聚合酶链反应和地高辛标记的核酸杂交技术用于钩端螺旋体的检测
目的为钩端螺旋体快速诊断和流行病学调查建立一种比较理想的方法.方法根据钩端螺旋体赖株DNA合成一对flaB引物,用PCR技术对钩端螺旋体菌株、疫区现场动物标本等进行flaB基因扩增,用地高辛(DIG)标记flaB基因探针,用琼脂糖凝胶电泳和斑点杂交技术进行检测.结果纯化钩端螺旋体DNA 5pg经flaB-PCR扩增后,琼脂糖凝胶电泳可以目测.用DIG标记的flaB探针可以检测到5fg及以下的DNA扩增产物.疫区70份蛙肾标本,分离细菌8株,阳性率11.43%.flaB扩增阳性14份,阳性率20%;DIG标记探针斑点杂交检测,阳性19份,阳性率为27.14%.结论PCR-斑点杂交是一种灵敏、特异、快速的钩端螺旋体检测方法,既可用于快速检测和早期诊断,也可用于疫情监测和流行病学调查.
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地高辛标记探针检测Vero细胞残余DNA试验条件的改进
目前,应用地高辛标记探针检测Veto细胞残余DNA含量仍是常用的检测方法,该方法具有特异性强、无放射污染、操作简便等特点.在实际操作中,地高辛探针的灵敏度及杂交的条件对检测结果均有很大的影响.为此,我们就提高探针灵敏度及优化杂交条件进行了摸索.
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核酸杂交法检测分娩期妇女血及新生儿尿中HCMV DNA
以地高辛标记人巨细胞病毒(HCMV)DNA J片段为探针,用核酸杂交法检测南通地区783例分娩期妇女血标本,HCMV DNA阳性者618例,感染率为78.93%;检测691例出生后1周内新生儿尿标本,HCMV DNA阳性者45例,排毒率为6.51%;其中335对母婴中HCMV DNA同时阳性者39例,垂直传播率为10.99%.本文结果证明了HCMV感染的普遍性和严重性,垂直传播是新生儿先天性HCMV感染的重要途径.
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地高辛标记的DNA探针用于嗜肺军团菌病的检测
本文利用嗜肺军团菌的种特异性扩增产物制成地高辛标记的探针.对L1-L 14的标准菌株和临床及环境分离的菌株进行检测,与血清学检查结果相符,灵敏度达到1pgDNA,对临床儿童肺炎患者的痰液进行检测,阳性率为25%(10/40),95%可信限为13-41%.基本可以认为该探针具有灵敏、特异、快速的特点.
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血链球菌特异DNA片段探针制备及临床应用
目的:探讨血链球菌特异DNA片段探针制备及临床应用.方法:采用特异引物的PCR扩增及运用探针进行Southern杂交,斑点杂交来检测口腔链球菌同源序列.结果:S34sr,S34非1和ATCC10556的DNA含有同源序列,另有两株血链球菌临床分离株斑点杂交结果为弱阳性,其它30余株细胞杂交结果阳性.结论:血链球菌ATCC10556菌株中的nif基因为血链球菌的特异基因,该基因在血链球菌蛋白的表达及功能尚待深入探讨.
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地高辛标记探针检测生物制品中残余DNA含量
用地高辛标记探针检测由传代细胞系生产的人用精制狂犬病疫苗、重组(CHO细胞)乙肝疫苗、出血热疫苗及痢疾多糖结合疫苗原液中残余DNA含量.结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,可用于上述生物制品中残余DNA含量的检测.
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地高辛标记探针检测Vero细胞狂犬病疫苗残余Vero细胞DNA含量
地高辛标记Vero细胞DNA,并制备成DNA探针.以此探针进行点杂交,确定探针的工作浓度、特异性及灵敏度.并用此法监测Vero细胞狂犬病疫苗浓缩原液纯化工艺的Vero细胞DNA去除率,测定精制Vero细胞狂犬病疫苗半成品中残余Vero细胞DNA含量.结果表明,该法特异性强,重复性好,快速简便,灵敏度高,检测值可达5pg/剂量,可用于精制Vero细胞狂犬病疫苗纯化工艺的质量控制和半成品检定.
关键词： 地高辛探针 点杂交法 狂犬病疫苗 Vero细胞DNA含量
