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2-05 小鼠多终点试验检测美他多辛的雌激素样作用
目的美他多辛(metadoxine,MTDX)是一种治疗酒精中毒性肝病的新药,化学名为吡哆素L-2-吡咯烷酮~5-羧酸酯.在毒理学安全性评价中发现该药可引起大鼠精子减少,交配率和受孕率下降.该试验的目的是探讨其雄性生殖毒性机制是否包括雌激素样作用.方法性成熟NIH雌性小鼠,体重20~25g,卵巢摘除后观察1周,剔除去势不全的小鼠.1周后将小鼠随机分成5组,每组10只.分别灌胃给予MTDX 0、640、1 500和4 000 mg/kg及雌二醇0.2 mg/kg(阳性对照),每天1次,连续5 d.每天阴道涂片观察动情周期.第6天处死,观察子宫/体重比、子宫积液、子宫上皮细胞高度和子宫基质细胞层厚度等指标.结果 MTIDX各剂量组小鼠在5 d中均未出现明显的动情周期,未发现子宫水肿和积液,子宫/体重比、子宫上皮细胞高度和基质细胞层厚度与对照组比较,差异均无显著性.结论在本试验条件下,MTDX在小鼠体内不具有雌激素样作用.
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1-21 3-甲氧基槲皮素的致突变性
目的 3-甲氧基槲皮素是从植物中提取的药物,研究发现有很好的抗病毒作用.该文研究了3-甲氧基槲皮素致突变性效应.方法采用Ames试验,CHL细胞体外染色体畸变试验,小鼠骨髓微核试验,小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验进行检测.结果 Ames试验:在加或不加肝微粒体代谢活化酶系(S9)的条件下,各菌株对高浓度3 750μg/皿均呈现不同程度的抑菌作用,4个标准菌株各浓度组结果均阴性.CHL细胞体外染色体畸变试验:3-甲氧基槲皮素致染色体畸变类型以断片为主,未加代谢活化的24h染色体畸变率为9%,在5.0%~9.9%范围内,判定为染色体畸变试验可疑阳性(±),48 h未加代谢活化组以及加代谢活化的24h试验组,收获CHL细胞均未呈现染色体畸变作用.表明3-甲氧基槲皮素对CHL细胞体外染色体畸变试验为可疑阳性.小鼠骨髓微核试验阴性.小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验:3-甲氧基槲皮素分别腹腔注射给于小鼠1/2、1/4、1/8 LD50,每天1次,给药5 d,给药后13 d剖杀检查精母细胞染色体.各试验组与阴性对照组比较,常染色体和性染色体单价体、染色体易位和断片的出现率均无统计学意义的增加.结论本试验条件下,3-甲氧基槲皮素无诱发基因突变,对CHL细胞体外染色体畸变试验为可疑阳性,小鼠骨髓微核试验阴性,不引起生殖细胞染色体畸变.
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检测条件对血液透析用水微生物监测结果的影响
目的 探讨培养基、标本接种时间、接种方式、培养温度、培养时间等因素对透析用水微生物监测结果的影响.方法 采集某三甲医院血液透析用水标本360份,分别采用倾注法、涂布法于采样后4 h、8 h接种TGEA、R2A及普通营养琼脂,分别于20℃、30℃、35℃培养48~168 h,观察菌落生长情况并计数.结果 三种培养基之间细菌培养结果差异无统计学意义;涂布法接种后透析用水细菌总数明显高于倾注法;采样8 h后接种,普通营养琼脂细菌培养结果明显高于采样4 h后接种;随着培养时间的延长,细菌总数增加;20℃及30℃培养条件下,透析用水细菌培养结果差异无统计学意义;35℃培养后细菌总数低于20℃和30℃.结论 血液透析用水的微生物学监测宜于采样后4 h内使用涂布法接种于TGEA、R2A或普通营养琼脂,20℃或30℃培养168 h,有助于提高血液透析用水微生物学监测的准确性.
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第三讲如何确定抽样研究所需要的样本量
选择研究样本除了要遵循随机抽样和随机分组的原则外,还要保证有一定的样本数量.样本太小,不容易发现本应存在的差别;样本太大,又会造成不必要的浪费,且不容易严格控制试验条件.所以,正确估计所需要的样本量,是任何研究设计应该慎重解决的问题.
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白带检菌革兰染色方法的改良
白带革兰染色检菌是一种较为简便易行的阴道致病菌检测方法[1],广泛应用于各级医院和妇女保健门诊,尤其在无细菌培养和药敏试验条件的医疗单位,该项检查更为重要.但是,传统的染色方法[2]由于受到白带中大量上皮细胞、白细胞、红细胞等成分的影响和覆盖,视野往往杂乱无章,背景与细菌颜色反差小,使检菌难度增加,造成检出率低及假阴性.
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固定的人白细胞分化抗原45单克隆抗体在人白细胞捕获效率研究中的佳试验因素分析
固定化抗体与相应细胞表面抗原结合常用于造血干细胞分选,白血病免疫分型,及磁性微球在血液病中的应用等.但均不能满足高通量分析与研究的要求.我们已用蛋白质微阵列技术研究多克隆抗体检测RBC的价值[1],但鲜见固定单克隆抗体检测WBC的研究报道.人白细胞分化抗原(CD)45为WBC表面共同抗原,我们通过观察固定CD45单克隆抗体与WBC结合效果,找出佳试验条件,为WBC检测及分型的蛋白质微阵列芯片研制和应用奠定基础.
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甲基化特异性聚合酶链反应关键步骤的质量评价与试验技巧
随着表观遗传学研究的发展,DNA甲基化备受关注.目前研究甲基化的方法众多,Herman等[1]报道的甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)具灵敏、快速、简便等优点,应用为广泛.但该方法针对特异位点判定结果时,易受诸多因素影响,因此试验条件要求极为严格;然而试验中缺少质量评价体系.对此,本室较系统地分析了MSP关键步骤的评价方法和条件,摸索出一些方法和捷径,现介绍如下.
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核酸基础序列扩增法检测移植术后巨细胞病毒IE-mRNA的实验研究
传统检测移植术后巨细胞病毒(Human cytomegalovirus, HCMV)感染的方法很多,但各一定的局限性.我们自2004年1月建立了核酸基础序列扩增法(NASBA法)检测IE-mRNA和pp67-mRNA的试验条件,对42例器官移植受者的外周血标本进行了检测,并与pp65抗原检测结果相比较.
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如何选择合适的试验设计类型(五)
当试验中涉及两个因素时,若两因素之间不存在交互作用或交互作用对观测结果的影响无统计学意义,并且,特定试验条件(通常为各因素不同水平的一种组合)下试验数据的测定误差在专业上允许的范围之内,此时,可以选用"随机区组设计、平衡不完全随机区组设计、具有一个重复测量的单因素设计、无重复试验双因素设计和两因素嵌套设计"五种设计之一.在上一期讲座中,我们向读者重点介绍无重复试验双因素设计和两因素嵌套设计这两种设计类型,重点阐述了两设计类型的定义、形式、特点、应用场合以及具体实施,并用实例加以论证.试验中所涉及到的两个因素都是试验因素,仅当有预试验表明两个试验因素之间的交互作用无统计学意义,且相同试验条件下定量观测指标的取值离散度很小时,此时,可采用无重复试验双因素设计;试验因素对观测结果的影响有主次之分,或者试验因素之间存在自然属性上的嵌套关系,上层因素对观测结果的影响大于下层因素时,采用两因素嵌套设计较为适宜.
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如何选择合适的试验设计类型(六)
当试验中涉及一个试验因素和两个区组因素( 即重要的非试验因素) 时,若因素之间不存在交互作用或交互作用对观测结果的影响无统计学意义,并且,特定试验条件( 通常为各因素不同水平的一种组合) 下试验数据的测定误差在专业上允许的范围之内,此时,可以选用"交叉设计和拉丁方设计"两种设计之一.
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如何选择合适的试验设计类型(四)
当试验中涉及两个因素时,若两因素之间不存在交互作用或交互作用对观测结果的影响无统计学意义,并且,特定试验条件( 通常为各因素不同水平的一种组合) 下试验数据的测定误差在专业上允许的范围之内,此时,可以选用"随机区组设计、平衡不完全随机区组设计、具有一个重复测量的单因素设计、无重复试验双因素设计和两因素嵌套设计"五种设计之一.在上一期讲座中,我们向读者重点介绍了随机区组设计、具有一个重复测量的单因素设计这两种设计类型,重点阐述了两设计类型的定义、形式、特点、应用场合以及具体实施,并用实例加以论证.在单因素多水平设计的场合下,如果需要多考虑一个重要的非试验因素或多个重要非试验因素的复合结果(简称区组因素)对观测结果的影响,此时,采用随机区组设计较为适宜;如果需要在几个不同的时间点上从同一个受试对象(或样品)上重复获得指标的观察值,或者是从同一个个体的不同部位(或组织)上重复获得指标的观测值,此时,采用具有一个重复测量的单因素设计较为适宜.
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如何选择合适的试验设计类型(七)
当试验中涉及一个试验因素和两个区组因素时,若因素之间不存在交互作用或交互作用对观测结果的影响无统计学意义,并且,特定试验条件(通常为各因素不同水平的一种组合)下试验数据的测定误差在专业上允许的范围之内,此时,根据试验因素的水平数目多少,可以考虑选用"交叉设计或拉丁方设计"两种设计之一.在上一期讲座中,我们向读者介绍了三阶段交叉设计和3×3交叉设计这两种设计类型,重点阐述了两种设计类型的定义、形式、特点、应用场合以及具体实施,并用实例加以论证.
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儿童药物不良反应监测系统的实践探索
在发达国家,ADR是导致疾病和死亡的第五大原因,每年发生ADR人数达10.0万~21.8万[1]。据统计,拉丁美洲住院患者ADR发生率约为10.5%,其中约6%的患者死于严重ADR[2]。因特殊的生理状态,儿童较成人更易发生ADR[3-4]。Thiesen等[5]2013年的研究显示,英国儿童住院患者ADR 发生率为15.9%~17.7%。据报道,我国儿童ADR发生率2倍于成人,为12.9%[6]。受样本量、试验条件及随访时间等限制,上市前药物临床试验对ADR的研究存在局限性,需进行上市后药物监测。研究显示,超过50%的ADR是在药物上市后发现的[1]。ADR监测系统是上市后药物监测关键措施之一,可发现新的、严重的、罕见的ADR[7]。
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抗生素类滴眼液微生物限度检查法的探讨
在<中国药典>2000版二部附录微生物限度检查法中,只对具有抑菌成份的供试品的控制菌检查提供了常用方法,但对含有抗生素类滴眼液的细菌计数测定方法没做具体规定(<中国药典>2000版二部附录微生物限度标准规定一般滴眼剂细菌数不得过100个/ml).虽然,抗生素是一种抗菌作用较强的药物,但不可能杀灭和抑制所有种类的微生物.因此,含抗生素类药物也可能被微生物所污染,此类药物微生物限度检查结果的准确性,主要决定于此类药物本身在试验条件下是否抑制被检微生物的生长和繁殖.所以,只有在检验过程中去除其抗菌作用,使之不干扰微生物检查,结果才能有效.笔者在试验当中采用了两种方法即培养基稀释法和薄膜过滤法对抗生素类滴眼液的细菌数测定进行了对比试验,结果表明薄膜过滤法用于抗生素类滴眼液的细菌数测定是行之有效的.现将结果总结如下:
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西地碘片鉴别方法的改进
西地碘片用于治疗慢性咽炎、口腔炎、口腔溃疡、牙周炎及糜烂型扁平苔癣等,临床效果良好.在实际工作中发现,西地碘片鉴别试验与结果与《卫生部药品标准》新药转正标准第七册58页所载方法有很大偏差,易导致错误结论,为此我们改进鉴别试验条件,使实验结果较为满意.
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抗生素无菌试验冲洗速度的探讨
无菌试验中阳性对照试验的目的,就是验证供试品有无抑菌作用活性和试验条件是否符合要求.阳性对照菌生长表明使用的无菌检查方法适宜,反之,试验无效[1].由于抗生素制剂的特殊性,2000年版药典规定抗生素制剂的无菌检查法应采用薄膜过滤过,并且不同品种的抗生素需用不同的冲洗液量对滤膜进行冲洗,使残留在滤膜上的抗生素尽可能减少至不足以抑制阳性菌的生长.试验过程中,抗生素的抑菌作用去除效果的影响因素很多,如抗生素的品种、溶解度及滤膜对抗生素的吸附力、冲洗方式等等.本实验通过用不同冲洗量和不同冲洗速度冲洗滤膜,对不同抗生素无菌试验的阳性对照菌检出的影响情况进行了比较,为抗生素无菌试验中冲洗的规范化(包括冲洗量和冲洗速度)提供有效的实验依据.
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四环素软膏剂和眼膏剂的薄层色谱鉴别
四环素是由链霉菌产生或经半合成制取的广谱抗生素,临床一般用其盐酸盐.四环素的水溶液随pH的不同会发生差向异构化、降解等反应[1].特别是在加热情况下,四环素A环上手性碳原子C4发生差向异构化,生成差向四环素(4-ETC);而C6上的醇羟基和C5a上的氢则易发生反式消去反应生成脱水四环素(ATC),脱水四环素亦可形成差向异构体,即差向脱水四环素(EATC).按现行标准[2]软膏剂和眼膏剂的鉴别方法在标准品斑点的相应位置常常看不到供试品的斑点(见图A).作者通过反复试验比较,采取用乙醚溶解基质,盐酸提取的方法处理样品,并对试验条件做了进一步的改进,得到的结果满意.
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复方磺胺甲恶唑片微生物限度检查方法的探讨
药物的抑菌作用是相对的,而污染菌的种类却是多样的.一种抑菌药物不可能抑制所有种类的污染菌,因此抑菌药物也可能被污染菌污染.而且细菌和抑菌药物接触后,可显示出抗药性的突变体[1].因此,抑菌药物染菌限度检验结果的准确性,主要取决于供试品本身在试验条件下是否抑制被检微生物的生长繁殖.
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加强药品注册现场核查打击虚假药品研制行为
药品注册现场核查和抽样是省级食品药品监督管理局受国家食品药品监督管理局委托,在药品注册审批监管过程中进行的一项工作,是对药品研制和生产现场的生产条件、检验条件、留样仓储条件、研制人员、标准品、对照品、对照药材、原料药(药材)的来源、临床试验条件和批量加工的样品数量进行现场核实的过程,这项工作是国家对申请注册药品进行技术审评和行政审批的基础.只有真实规范的药品研究工作,才能取得科学严谨的实验数据,才能保证药品上市后安全有效、质量可控.
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仿制药品的生物豁免
目前在我国上市销售的药品中,大多数为仿制药品,国外除了大公司原创药物较多外,仿制药品也占了相当的比例.仿制药品在促进市场竞争,降低药品价格,造福人民健康方面做出了重大贡献.根据我国现行的<药品注册管理办法>,仿制药品的申报需要向药事管理部门提供生物等效性研究资料[1].生物等效性是指两种制剂在相同试验条件下,服用相同剂量,其活性成分在吸收程度和速度上无显著性差异[2].目前国际通用方法一般采用生物利用度比较研究,即对不同时间点生物样本(如血浆、血清、尿液)中的药物含量进行测定,获得相应的AUC(曲线下面积)、Cmax(达峰浓度)、Tmax(达峰时间)等指标,根据临床经验预先制订的等效标准和限度评价拟上市药品和被仿制药品是否为等效制剂.