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马来酸曲美布汀对寒冷束缚应激大鼠结肠平滑肌细胞离子通道的作用
目的 探讨马来酸曲美布汀(TM)对寒冷束缚应激(CRS)大鼠结肠平滑肌细胞大电导钙激活的钾通道(BKCa)及雷诺定受体(RyR) mRNA和蛋白表达的影响.方法 24只Wistar大鼠均分为CRS组、CRS+TM组和对照组,CRS组大鼠每日按6 ml/kg予0.9％ NaCl溶液灌胃,CRS+TM组大鼠每日按6 ml/kg予15 g/L TM灌胃,置铁丝笼中,在4℃环境限制活动2h,连续5d.对照组大鼠按6 ml/kg予0.9％NaCl溶液灌胃1次,不予应激.观察各组大鼠排便量和粪便性状改变,分离结肠平滑肌组织进行RT-PCR和Western印迹分析测定BKCa以及RyR2通道mRNA和蛋白的表达.结果 CRS组大鼠排便颗粒中位数为6,对照组为1,CRS+ TM组为5,肉眼观察CRS组及CRS+ TM组大鼠粪便外观较对照组稀,含水量多.与对照组比较,CRS组及CRS+ TM组大鼠结肠组织无明显病理学改变.对照组与CRS组大鼠结肠平滑肌细胞BKCa和RyR2 mRNA表达无明显差异,CRS+TM组BKCa mRNA表达较对照组上调1.45倍,CRS+ TM组RyR2 mRNA较对照组上调1.32倍.与对照组相比,CRS组大鼠结肠平滑肌细胞BKCa和RyR2蛋白表达无明显差异,CRS+TM组BKCa蛋白较对照组表达上调1.39倍,未见RyR2蛋白表达条带.结论 TM对CRS大鼠结肠平滑肌收缩的影响可能是通过大鼠结肠平滑肌细胞BKCa通道mRNA、蛋白表达上调和RyR mRNA表达上调而起作用.
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8 Hz 90 dB次声对大鼠海马细胞内钙离子及内质网钙通道蛋白RyRs表达的影响
目的: 实验观察8 Hz,90 dB次声作用对大鼠海马细胞内钙离子浓度( [Ca2+]i)及内质网钙通道蛋白(Ryanodine receptors, RyRs)的影响,为进一步研究次声作用机制及为次声卫生防护提供理论依据.方法: 将SD大鼠60只随机分为5个组,即对照组、次声作用1,7,14和21 d组,每组再随机分为Ca2+测定组和RyRs检测组.通过急性细胞分离、Ca2+荧光探针及激光共聚焦显微镜观察大鼠脑海马细胞[Ca2+]i变化;采用免疫组织化学方法观察其海马CA1及CA3区锥体细胞RyRs表达状态.结果: 频率8 Hz,90 dB次声分别作用2 h/d,1 d、7 d组于作用后海马细胞[Ca2+]i与对照组相比均无显著性差异(均P>0.05),14 d组海马细胞[Ca2+]i显著增高(P<0.01 vs all of others),21 d组明显回落,但较对照组仍然增高(P<0.05);海马CA1及CA3区锥体细胞RyRs阳性表达细胞数,1,7 d组与对照组相比均无显著性差异(均P>0.05),14 d组RyRs阳性表达细胞数显著降低(P<0.01 vs control),21 d组RyRs阳性表达细胞数有所回升,但较对照组仍然降低(P<0.05).结论: 8 Hz,90 dB次声作用一定时间可引起海马细胞内[Ca2+]i显著增高和海马CA1及CA3区锥体细胞RyRs表达下调.海马细胞内[Ca2+]i异常及RyRs表达下调可能是次声引起学习记忆功能损害机制中的重要环节.
关键词： 次声 钙/分析 兰尼碱受体钙释放通道 海马 大鼠 -
大鼠股薄肌早期压疮局部腺苷三磷酸酶活性与兰尼碱受体1mRNA表达
目的 了解ATP酶活性与兰尼碱受体1(RyR1)mRNA表达变化在早期压疮形成过程中的作用机制.方法 将36只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为3组,每组12只:(1)未施压组,大鼠股薄肌部位未施予压强.(2)3次缺血再灌注(IR)组,用特制压力装置对大鼠一侧大腿股薄肌持续施压(22.47 kPa)2.0 h模拟缺血状态,继而停止施压0.5 h模拟再灌注变化,如此进行3次即完成3个IR循环.(3)5次IR组,处理条件同3次IR组但重复操作5次.处理结束后处死各组大鼠,取受压中心(未施压组取相同解剖部位)肌肉组织标本,用比色法检测总ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶活性,用ELISA法检测丙二醛含量,实时荧光定量RT-PCR法测定RyR1 mRNA表达水平.对实验数据行单因素方差分析,用Pearson相关分析法分析总ATP酶活性分别与丙二醛含量、RyR1 mRNA表达水平的相关性,RyR1 mRNA表达水平与丙二醛含量的相关性.结果 未施压组总ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、Na+-K+-ATP酶活性分别为(1.629±0.004)、(0.907±0.061)、(0.697±0.083)U/mg,均高于3次IR组[(1.365±0.004)、(0.784±0.020)、(0.581±0.017)U/mg,F值分别为1707.0、29.8、15.2,P<0.05或P<0.01]以及5次IR组[(1.055±0.049)、(0.619±0.016)、(0.436±0.039)U/mg,F值分别为1107.0、169.9、65.7,P值均小于0.01];5次IR组此3项指标明显低于3次IR组(F值分别为322.8、341.7、94.0,P值均小于0.01).未施压组丙二醛含量为(7.5±0.6)nmol/L,明显低于3次IR组[(9.9±0.6)nmol/L,F=53.2,P<0.01]和5次IR组[(13.7±1.3)nmol/L,F=76.9,P<0.01];后2组比较,差异有统计学意义(F=82.9,P<0.01).实时荧光定量RT-PCR 结果表明,未施压组RyR1 mRNA表达水平为8.5±4.2,与3次IR组(3.3±2.1)接近(F=0.9,P>0.05),但明显高于5次IR组(0.6±0.5,F=23.6,P<0.05);5次IR组明显低于3次IR组(F=39.3,P<0.05).总ATP酶活性与丙二醛含量呈显著负相关,r=-0.918,P<0.01;总ATP酶活性与RyR1 mRNA表达水平呈显著正相关,r=0.713,P<0.01;RyR1 mRNA表达水平与丙二醛含量呈显著负相关,r=-0.702,P<0.01.结论 能量代谢障碍可能是早期压疮发生的始动因素;RyR1 mRNA表达降低初步反映局部组织受压一定时间后存在钙超载损伤.
关键词： 腺苷三磷酸酶类 兰尼碱受体钙释放通道 能量代谢 股薄肌 压疮 -
大鼠急性心肌缺血后肌浆网RyR2 mRNA表达变化
目的 研究大鼠急性心肌缺血后心肌肌浆网兰尼碱受体蛋白2(ryanodine receptor 2,RyR2)mRNA表达的变化.方法 将SD大鼠分为正常对照组、心肌缺血组和缺血性猝死组.采用腹腔注射垂体后叶素的方法复制大鼠急性心肌缺血和猝死模型,对心肌进行半定量荧光RT-PCR检测,观察RyR2 mRNA表达水平的变化.结果 与正常对照组相比,不同时间和不同程度的急性心肌缺血后心肌肌浆网RyR2 mRNA表达均显著降低(P<0.05).结论 心肌缺血性损伤可诱导心肌钙调控蛋白RyR2 mRNA表达下调.
关键词： 法医病理学 心肌缺血 兰尼碱受体钙释放通道 逆转录聚合酶链反应
