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蛋白磷酸酶2A B56β全酶调控氯化镉诱导肝细胞毒性的作用研究
目的：探讨蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A, PP2A）B56β全酶调控CdCl2诱导肝细胞毒性的作用及其机制。方法采用改良四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测CdCl2对人正常肝细胞（L-02）、黄曲霉素诱导转化细胞（L-02 RT-AFB1）及肝肿瘤细胞（Bel7402）的毒性，利用病毒感染法在L-02或Bel7402上构建丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B（AKT）低表达(L-02 SHAKT)、B56β低表达(L-02 SHB56β)和B56β高表达(L-02 RT-AFB1-B56β、Bel7402-B56β)的细胞株。在浓度为0、20、40、80、160μmol/L的CdCl2处理下，检测人正常肝细胞、转化的肝细胞和肝肿瘤细胞的相对细胞活力。在2.5、5.0μmol/L的渥青霉素和40μmol/L CdCl2共同作用下检测L-02细胞中各蛋白相对表达量。采用Western blot法检测这些细胞株中B56β、金属硫蛋白（metallothionein，MT）、AKT、AKT磷酸化（P?AKT）的表达水平。结果在40μmol/L CdCl2作用下，L-02 RT-AFB1和Bel7402细胞中MT表达水平分别为0.12±0.02、0.06±0.06，低于对照组（0.92±0.14）（F=1148.16，P<0.001）。在40μmol/L CdCl2作用下，AKT干扰细胞株L-02 SHAKT-1、L-02 SHAKT-2中p-AKT水平分别为0.08±0.02、0.08±0.05，低于对照组（0.18±0.15）（F=724.70，P<0.001）；两种细胞MT的表达水平均为0.62±0.16，高于对照组（0.22±0.14）（F=94.73，P<0.001）。在2.5、5.0μmol/L渥青霉素和40μmol/L CdCl2共同作用下，L-02细胞中p-AKT的表达水平分别为0.28±0.07、0.15±0.11，低于未用渥青霉素处理组（0.52±0.11）（F=578.57，P<0.001）；MT的表达水平分别为1.62±0.80、1.08±0.15，高于未用渥青霉素处理组（0.69±0.18）（F=12.34，P<0.001）。在40μmol/L CdCl2作用下，B56β低表达细胞株L-02 SHB56β-1、L-02 SHB56β-2中p-AKT的表达水平分别为0.57±0.13、0.59±0.02，高于对照细胞L-02 SHGFP（0.32±0.02）（F=87.16，P<0.001）；MT的表达水平分别为0.35±0.07、0.20±0.03，低于对照细胞L-02 SHGFP（1.51±0.13）（F=2457.10，P<0.001）。在40μmol/L CdCl2作用下，B56β高表达细胞株L-02 RT-AFB1-B56β、Bel7402-B56β中p-AKT的表达水平分别为0.10±0.11、0.09±0.01，低于对照细胞L-02 RT-AFB1（0.36±0.01）、Bel7402（0.43±0.11）（F=877.62，P<0.001）；MT的表达水平分别为0.92±0.13、0.95±0.08，高于对照细胞L-02 RT-AFB1（0.44±0.12）、Bel7402（0.77±0.06）（F=51.97，P<0.001）。结论特异的PP2A B56β全酶介导AKT的去磷酸化调控MT的表达，终影响重金属CdCl2诱导的肝细胞毒性。本研究揭示了一条PP2A参与CdCl2诱导肝细胞毒性的关键信号通路。
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蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子在小细胞肺癌组织中的表达及临床意义
目的：探讨小细胞肺癌组织中蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子（ CIP2A）的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法选取2008年1月至2013年2月行手术切除或支气管镜活检、临床资料完整的94例小细胞肺癌组织及40例癌旁组织（距病灶≥2 cm的组织）标本，分析CIP2A在小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。结果 CIP2A mRNA在94例小细胞肺癌组织中的表达水平为7．605±1．893，与40例癌旁组织（1．041±0．786）比较，差异有统计学意义（P＜0．001）。 CIP2A蛋白在小细胞肺癌组织中的阳性表达率为82．8％，与癌旁组织（13．3％）比较，差异有统计学意义（P＜0．01）。 CIP2A高表达患者的中位无病生存时间为9．88个月，低于低表达患者（20．92个月），差异有统计学意义（P＜0．001）。 CIP2A的表达与肿瘤分期、化疗药物敏感性和生存时间均有关（均P＜0．05）。结论 CIP2A 的表达情况与小细胞肺癌的发生发展有关，CIP2A检测有望作为小细胞肺癌的预后指标。
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调控豚鼠心房肌细胞毒蕈硷能钾通道的新机制
心肌钾离子通道分两类,一类是电压依赖型,另一类是内向整流型.前者包括瞬间外向钾通道 ITO (相应与分子克隆 Kv4.2/4.3), 慢迟缓性钾通道 IKS (KvLQT1+MinK), 快迟缓性钾通道 IKR (HERG+?), 超快迟缓性钾通道 IKur (Kv1.5).去极化动作电位激活这些钾电流触发和加速细胞膜复极化.后者包括ATP-敏感性钾通道 IK, ATP(相应与分子克隆KIR6.2+SUR2A),静息内向整流钾通道 IK1 (K IR2.2?), 乙酰胆碱/腺苷激活性钾通道 IK, ACh 或IK,ADO (KIR 3.1/3.4).IK,ATP 在心肌缺氧或缺血,细胞内ATP/ADP比值降低时被激活,导致动作电位缩短,钙离子内流减少,细胞超极化,兴奋性降低,起到保护心肌的作用.IK1的主要作用是维持静息膜电位.兴奋迷走神经引起的心律减慢主要是通过激活IK, ACh,降低窦房结自律性及房室传导.限于篇幅和作者近年的研究发现,本文将重点讨论心肌乙酰胆碱或腺苷激活性钾通道 IK, ACh的信息传递.目前膜限性理论(membrane-delimited pathway)广为接受,即乙酰胆碱或腺苷刺激其相应受体(M2 或A1), 激活与其偶合的G- 蛋白,继而产生的游离βγ双体直接与KACh蛋白结合,从而激活KACh通道.然而,新近的研究发现表明由第二信使为中介的去磷酸化酶活性增加,也可以激活KACh通道.此外,作者发现细胞内加四乙铵(广为接受的钾通道阻断剂)可增强KACh通道活性.
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miR-21对口腔鳞状细胞癌恶性生物学表型的影响及其机制探讨
目的：观察微小RNA-21（miR-21）对口腔鳞状细胞癌恶性生物学表型的影响，并探讨其机制。方法口腔鳞状细胞癌UT-SCC-15细胞传代培养后随机分为3组，A、B组分别转染反义miR-21、无义序列48 h，C组不予处理。采用Real-time PCR法检测各组miR-21，四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法、Transwell 和流式细胞术检测细胞增殖率、穿过率、周期分布及凋亡率。荧光素酶活性实验鉴定磷酸酶和张力蛋白同源基因（ PTEN）是否为miR-21的靶基因，Western blot法检测PTEN、磷酸化蛋白激酶B（pAkt）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、抗凋亡基因Bcl-2、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）。结果与B组和C组比较，A组miR-21相对表达量、细胞增殖率、细胞穿过率、MMP2、Bcl-2、Cyclin D1表达均降低，G1期细胞比例、凋亡率和PTEN均升高，P均＜0．05；B组与C组比较，P均＞0．05。 A组荧光素酶活性值高于B、C组，P均＜0．05；B组与C组比较，P＞0．05。结论反义miR-21可逆转口腔鳞状细胞癌的恶性生物学表型，可能与上调其靶基因PTEN表达、抑制Akt通路有关。
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前列腺癌中CIP2A的表达及意义
目的：探讨蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子（CIP2A）在前列腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法收集2011年12月至2014年11月该院泌尿外科前列腺癌（80例）和前列腺增生（25例）组织标本进行研究。应用RT-PCR和免疫组织化学分别检测标本组织中CIP2A mRNA和蛋白表达情况。结果 CIP2A在前列腺癌组织中的阳性表达率（70%，56/80）明显高于前列腺增生组织（16%，4/25），差异有统计学意义（P＜0.01），CIP2A在前列腺癌中表达与高Gleason评分、高T分期、淋巴结转移有关，差异均有统计学意义（P＜0.05），但CIP2A表达与前列腺特异性抗原（PSA）水平无明显相关性（P>0.05）。结论 CIP2A在前列腺癌的发生发展中可能起促进作用，与前列腺癌的发生、分化和淋巴结转移有一定关系，有可能成为判断前列腺癌预后的新标志和临床治疗的新靶点。
