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蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇咬伤270例
我国每年毒蛇咬伤患者达10余万人次,其中致死率5～10%,致残率25～30%[1].我院为福建省蛇伤救治中心,每年诊治大量蛇伤患者,其中竹叶青蛇咬伤占首位[2].2007年1月～2010年12月,我科采用中西医结合方法治疗竹叶青蛇咬伤270例,报告如下……
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤兔血小板功能的影响及其作用机制研究
目的 探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤兔凝血功能的影响及机制.方法 通过0.75、1.50、2.25、3.00 mL/kg竹叶青蛇毒液染毒72 h兔实验,观察竹叶青蛇伤兔血小板聚集率的变化.将50只新西兰大白兔按照随机数字表法分为5组,每组10只.采用皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液制备兔中毒模型;假伤组注射0.75 mL/kg生理盐水;6h后蛇伤胶囊低、中、高剂量组分别灌胃5、10、15 mL· kg-1·d-1蛇伤胶囊药液,假伤组和模型组灌胃10 mL·kg-1·d-1生理盐水.连续灌胃1周后取血,测定血小板聚集率、血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW)和血清环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)含量.结果 ①随着蛇毒浓度增加,1、3、5 min及大血小板聚集率均呈逐渐下降趋势.②模型组5 min血小板聚集率和大血小板聚集率均较假伤组明显下降[35.5(24.2,42.5)％比43.0(38.2,58.5)％,39.5(29.0,45.0)％比46.5(39.2,60.2)％,均P＜ 0.05];与模型组比较,蛇伤胶囊中剂量组5 min血小板聚集率和大血小板聚集率明显升高[44.0(39.8,45.0)％比35.5(24.2,42.5)％,45.5(43.5,46.2)％比39.5(29.0,45.0)％,均P＜0.05],其余各组间比较差异均无统计学意义.与假伤组比较,模型组PLT明显减少(×109/L:410.3±155.3比724.5±220.7,P＜0.01),MPV、PCT明显缩小[MPV(fl):5.11±1.09比6.34±1.16,P＜0.01;PCT:21.9(18.6,26.8)％比34.8(24.8,45.4)％,P＜ 0.05].与模型组比较,蛇伤胶囊低、中、高剂量组PLT、PCT均明显增加[PLT(×109/L):702.4±166.3、648.5±160.2、789.3±86.2比410.3±155.3,PCT:38.8(35.7,42.9)％、36.0(29.8,44.4)％、43.1(40.5,48.8)％比21.9(18.6,26.8)％,均P＜0.01];蛇伤胶囊中剂量组MPV明显增大(fl:6.26±1.05比5.11±1.09,P＜0.01).各组PDW比较差异均无统计学意义(P＞0.05).与假伤组比较,模型组血清cAMP(nmol/L:47.57±12.76比36.67±10.54)、PKA(μg/L:14.68±5.80比9.23±4.05)均明显升高(均P＜0.05);与模型组比较,蛇伤胶囊各剂量组cAMP、PKA均有所降低,其中蛇伤胶囊低剂量组cAMP[(36.33±11.08) nmol/L]、中剂量组PKA[(10.21±5.31) μg/L]下降差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 在竹叶青蛇毒液0～3 mL/kg浓度范围内,其浓度越大,抑制血小板聚集的作用越强.蛇伤胶囊可以升高血小板聚集率、PLT,并增加MPV和PCT,从而对抗竹叶青蛇毒对血小板聚集的抑制作用,改善血小板止血功能.蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍可能是通过调控cAMP/PKA通路实现的.
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤患者凝血功能的影响
目的：研究中药蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤患者凝血功能障碍的机制。方法采用前瞻性研究方法，将70例竹叶青蛇伤且符合火毒证诊断标准的患者按随机数字表法分为治疗组和对照组，每组35例。对照组在基础治疗（包括伤口消毒，肌注破伤风抗毒素1500 U，使用常规剂量抗菌药物、地塞米松10 mg、奥美拉唑40 mg）的同时口服季德胜蛇药片10片，每天3次；治疗组在基础治疗的同时口服蛇伤胶囊（院内制剂，由大黄、黄连、山慈菇、土木香、杨梅皮、冰片等组成）5粒，每天3次；两组疗程均为1周。用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定两组患者治疗前后血清血小板α-颗粒膜糖蛋白（CD62p）、血栓素B2（TXB2）、血小板第3因子（PF3）和血管性血友病因子（vWF）的含量。结果治疗组和对照组治疗前CD62p、TXB2、PF3、vWF含量比较差异均无统计学意义〔CD62p（μg/L）：3.81±1.64比3.52±1.43，TXB2（μg/L）：13.04±1.67比13.31±1.14，PF3（μg/L）：2.84±1.08比2.88±1.23，vWF（μg/L）：12.36±2.42比11.89±2.08，均P＞0.05〕；两组治疗后CD62p、TXB2、PF3含量均较治疗前升高，vWF较治疗前降低，且以治疗组的变化更显著〔CD62p（μg/L）：6.73±1.77比5.81±1.62，TXB2（μg/L）：18.65±1.77比17.90±1.68，PF3（μg/L）：5.61±1.48比4.77±1.24，vWF（μg/L）：3.87±1.01比4.58±1.09，P＜0.05或P＜0.01〕。结论蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤后的凝血功能障碍可能是通过改善血小板活化功能、减轻血管内皮细胞损伤来实现的。
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泻火解毒法对竹叶青蛇伤血管内皮细胞炎性因子的影响
目的 研究泻火解毒法对竹叶青蛇伤血管内皮细胞炎性因子的影响.方法 ①动物实验:选择50只健康新西兰大白兔,根据计算机统计软件产生的随机数分为5组,每组10只.采用经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液的方法复制竹叶青蛇伤动物模型;对照组经兔右后腿皮下注射等量生理盐水.制模后6h,低、中、高剂量蛇伤胶囊组给予蛇伤胶囊,剂量分别为174、348和522 mg· kg-1·d-1,使用时以生理盐水稀释为17.4、34.8和52.2 g/L的药液,灌胃量则均为10 mL· kg-1·d-1;对照组和模型组灌胃等量生理盐水;各组均每日灌胃1次,连续1周.于末次灌胃后24 h经耳缘静脉取血,分离血清,用五分类血细胞计数仪检测血中白细胞计数(WBC)和单核细胞(MO)数;用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL-1、IL-2、IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.②细胞实验:用MEM培养液培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 24 h后更换培养液并按随机数字表法分为5组,每组10个样本.采用细胞中加入5 mg/L竹叶青蛇毒液的方法复制竹叶青蛇毒细胞模型.培养6h后,空白对照组和模型组给予10％正常兔血清培养液,低、中、高剂量蛇伤胶囊组分别加5％、10％和15％含中药兔血清继续培养.培养72 h后,收集细胞培养液,用ELISA试验检测HUVEC培养液中IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α水平.结果 模型组血WBC、MO、IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α和HUVEC培养液中IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α水平均较对照组明显升高,随着药物剂量增加,低、中、高剂量蛇伤胶囊组上述指标均较模型组下降,以中剂量蛇伤胶囊组降低更显著[血清:WBC(×109/L)为9.03±2.16比12.11±4.38,MO(×109/L)为0.44±0.18比0.63±0.16,IL-1 (ng/L)为92.46±9.46比110.80±29.78,IL-2(ng/L)为92.11±17.55比112.0±18.83,IL-6 (ng/L)为481.73±147.12比667.26±226.41,TNF-α(ng/L)为7.12±2.96比9.41±1.76;HUVEC培养液:IL-1 (ng/L)为56.76±10.37比75.80±22.49,IL-2 (ng/L)为76.77±13.73比92.80±17.82,IL-6(ng/L)为231.70±107.91比413.25±178.65,TNF-α(ng/L)为223.98±30.31比252.86±30.75,均P＜ 0.05].结论 竹叶青蛇毒可造成血管内皮细胞炎性损伤;泻火解毒法可治疗竹叶青蛇伤血管内皮炎性损伤.
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泻火解毒法对竹叶青蛇伤致炎相关趋化因子及黏附分子的影响
目的 观察泻火解毒法对竹叶青蛇毒导致血管内皮炎症损伤相关趋化因子及黏附分子的影响.方法 ①动物实验:取健康新西兰大白兔50只,按计算机产生的随机数字分为正常对照组、模型组,以及蛇伤胶囊低、中、高剂量组,每组10只.采用经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液的方法复制竹叶青蛇伤动物模型;对照组给予等量生理盐水.制模后6h,蛇伤胶囊低、中、高剂量组分别给予蛇伤胶囊溶液174、348、522 mg· kg-1·d-1(用生理盐水稀释为17.4、34.8和52.2 g/L的药液,灌胃量均为10 mL· kg-1·d-1);模型组和正常对照组灌胃等量生理盐水;均每日灌胃1次,连续灌胃1周.于末次灌胃后24 h经耳缘静脉采血,离心取血清备用.同时取兔腹主动脉全段,保存于液氮中备用.②细胞实验:以改进的Eagle培养液(MEM)培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24h,按计算机产生的随机数字分为空白对照组、模型组和蛇伤胶囊药物血清低、中、高剂量组,每组10孔.于细胞培养液中加入5 mg/L竹叶青蛇毒液复制竹叶青蛇毒中毒细胞模型.培养6h后,模型组和空白对照组给予10％正常兔血清,药物组给予5％、10％和15％含药血清.培养72 h后,收集细胞提取总RNA.用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测兔腹主动脉及HUVEC白细胞介素-8(IL-8)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)的mRNA表达水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测兔血清E-选择素(CD62E)含量.结果 模型组腹主动脉和细胞IL-8、MCP-1、ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平及CD62E含量均较对照组显著升高[以正常对照组和空白对照组IL-8、MCP-1、ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平均为1,动物模型组上述指标的mRNA表达水平(2-△△Ct)分别为3.96±0.39、3.07±0.27、3.71±0.26、3.94±0.26,细胞模型组上述指标的mRNA表达水平(2-△△Ct)分别为3.53±0.70、2.24±0.48、3.13±0.44、2.80±0.13,均P＜0.01],模型组血清CD62E含量亦较正常对照组显著升高(μg/L:1.31±0.22比0.82±0.13,P＜0.01),蛇伤胶囊低、中、高剂量组腹主动脉和细胞IL-8、MCP-1、ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平均较模型组明显降低[腹主动脉:IL-8 mRNA(2-△△Ct)为1.13±0.19、1.26±0.16、1.27±0.17比3.96±0.39,MCP-1 mRNA(2-△△Ct)为1.79±0.24、2.22±0.38、1.76±0.19比3.07±0.27,ICAM-1 mRNA (2-△ △Ct)为2.05±0.11、1.68±0.09、2.37±0.48比3.71±0.26,VCAM-1 mRNA (2-△△Ct)为1.59±0.08、1.40±0.11、1.84±0.11比3.94±0.26;细胞:IL-8 mRNA(2-△△Ct)为2.33±0.59、2.82±0.82、2.51±0.77比3.53±0.70,MCP-1 mRNA (2-△ △Ct)为1.59±0.35、1.48±0.36、1.54±0.29比2.24±0.48,ICAM-1 mRNA (2-△ △Ct)为1.46±0.38、1.77±0.65、1.73±0.50比3.13±0.44,VCAM-1mRNA (2-△△Ct)为2.49±0.24、2.18±0.19、2.45±0.24比2.80±0.13,均P＜0.05],蛇伤胶囊中、高剂量组血清CD62E含量均较模型组明显降低(μg/L:1.01±0.14、1.04±0.13比1.31±0.22,均P＜0.01),但3个剂量组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 泻火解毒法能通过抑制竹叶青蛇伤引起的炎症反应治疗竹叶青蛇伤血管内皮损伤.
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HPLC法测定蛇伤胶囊中盐酸小檗碱含量
目的:建立蛇伤胶囊中盐酸小檗碱含量的测定方法.方法:色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μ.m);流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈(75∶25);柱温:35℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:346 nm;选样量:10 μL.结果:盐酸小檗碱含量在0.101 μg ～1.008 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率为97.36％,RSD=1.23％(n=6).结论:该方法简便快速,重复性好,可为蛇伤胶囊的质量控制提供依据.
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泻火解毒法对竹叶青蛇伤血管内皮细胞NF-kB信号通路相关因子的影响
目的:观察泻火解毒法对竹叶青蛇伤血管内皮细胞核转录因子-kB(NF-kB)信号通路相关因子的影响.方法:根据前期研究复制竹叶青蛇伤动物及细胞模型.均设置空白组(KB)、模型组(MX)和低、中、高剂量蛇伤胶囊药液组(DY、ZY、GY)5组,每组10样本.在动物实验中,KB经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg生理盐水,6h后灌胃10 mL/kg生理盐水.MX、DY、ZY和GY经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液,6h后分别灌胃10 mL/kg生理盐水及低、中、高剂量药液.各组每日灌胃1次,连续灌胃1周后采血并分离出血清待测.细胞实验中,KB加入10％正常兔血清培养,MX在KB的基础上加入5μg/mL竹叶青蛇毒液培养,DY、ZY和GY在MX基础上培养6h后分别加入5％、10％和15％的含中药兔血清继续培养.各组培养72 h后,收集人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)及培养液检测.酶联免疫吸附法检测兔血清中NF-kB、IkBs激酶(IKK)、NF-kB诱导激酶(NIK)的含量.蛋白免疫印迹法测定各组细胞IKK、NIK、NF-kB p65的蛋白表达,激光共聚焦显微镜检测NF-kB p65在各组细胞的表达.结果:动物实验中,MX组IKK、NIK和NF-kB p65含量较KB组均出现了显著升高(P＜0.01);ZY组和GY组的IKK、NIK和NF-kB p65含量较MX组均出现显著降低(P＜0.05或P＜0.01).细胞实验中,MX组HUVEC中IKK、NIK和NF-kB 165的蛋白表达较空白组显著升高(P＜0.05或P＜0.01),DY组和ZY组HUVEC中IKK、NIK和NF-kB p65蛋白表达较MX组显著减少(P＜0.05或P＜0.01);激光共聚焦显微镜下MX组HUVEC中NF-kB p65的表达显著高于KB组(P＜0.01),而DY组和ZY组HUVEC中NF-kB p65的表达较MX组显著下降(P＜0.01).结论:NF-kB信号通路是竹叶青蛇伤血管内皮细胞炎症损伤的关键,泻火解毒法可通过调控该信号通路来治疗竹叶青蛇伤血管内皮细胞炎症损伤.
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮功能影响
目的:研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制.方法:根据前期实验复制竹叶青蛇伤的动物及细胞模型.均设置空白组(KB)、模型组(MX)和低、中、高剂量蛇伤胶囊药液组(DY、ZY、GY)5组,每组10个样本.在动物实验中,KB经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg生理盐水,6h后灌胃10 mL/kg生理盐水.MX、DY、ZY和GY经兔右后腿皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液,6h后分别灌胃10mL/kg生理盐水和10mL/kg低、中、高剂量蛇伤胶囊药液.各组均每日灌胃1次,连续灌胃1周.于末次灌胃后24 h经耳缘静脉采血,分离出血清.在细胞实验中,KB加入10％正常兔血清培养,MX在KB的基础上加入5μg/mL竹叶青蛇毒液培养,DY、ZY和GY在MX基础上培养6h后分别加入5％、10％和15％的含中药兔血清继续培养.各组分别培养72 h后,收集细胞培养液及细胞.以酶联免疫吸附法检测兔血清及细胞培养液中的内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(Nitric Oxide,NO)和血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)水平.流式细胞术检测细胞中NO含量.结果:MX的ET-1和vWF水平相对KB均出现了显著的升高(P＜0.01,P＜0.05),NO水平显著降低(P＜0.01);DY、ZY和GY的ET-1及vWF水平相对MX均出现不同程度降低,NO水平出现不同程度的升高,其中ZY组变化有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论:蛇伤胶囊可通过抗血管内皮细胞损伤途径治疗竹叶青蛇伤凝血障碍.
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤兔CD62p、CD63、GP Ⅱ b/Ⅲ a的影响
目的 研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤兔凝血障碍的机制. 方法 将50只新西兰大白兔按随机数字表法分为5组,每组10只.正常对照组经右后腿皮下注射0.75 mL/kg生理盐水,6h后灌胃10 mL/kg生理盐水.模型组和蛇伤胶囊低、中、高剂量组均右后腿皮下注射0.75 mL/kg竹叶青蛇毒液,6h后分别予10 mL/kg生理盐水和低、中、高剂量蛇伤胶囊药液灌胃,均每日灌胃1次,连续灌胃1周后测定p-选择素(CD62p)、溶酶体颗粒膜糖蛋白(CD63)、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲ a)的含量. 结果 与正常对照组比较,模型组CD62p、CD63、GPⅡb/Ⅲa含量均降低(P＜0.05);与模型组比较,蛇伤胶囊中剂量组CD62p、CD63、GPⅡb/Ⅲa含量均升高(P＜0.05). 结论 蛇伤胶囊可以通过促进血小板活化治疗竹叶青蛇伤的凝血障碍.
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤患者血小板及凝血时间的影响
目的：研究中药蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤患者凝血障碍的机制。方法将70例竹叶青蛇伤（均符合火毒证诊断标准）患者按SPSS统计软件产生随机数分为治疗组和对照组各35例。两组基础治疗方法均为伤口消毒处理，肌注破伤风抗毒素1500 u ，使用常规量抗生素，给予地塞米松10 mg、奥美拉唑40 mg等。对照组在基础治疗上口服季德胜蛇药片10片，每天3次；治疗组在基础治疗上口服蛇伤胶囊5粒，每天3次。两组疗程均为1周。观察两组治疗前后血小板计数（PL T ）、平均血小板体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）水平。结果治疗前，两组 TT 、PT 、APTT 、FIB、PLT 、MPV、PDW 比较，差异无统计学意义（均 P＞0.05）；治疗后，治疗组FIB、PLT 、MPV、PDW升高值（差值）高于对照组（P＜0.05或 P＜0.01），而且治疗组 TT 、PT 、APTT 下降值（差值）高于对照组（P＜0.01）。结论蛇伤胶囊具有减少凝血因子消耗、抗纤溶、改善血小板及其止血功能而治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的作用。
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤患者 t-PA 、PAI-1、TAT 及 SFMC 的影响
目的：研究中药蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤患者凝血障碍的机制。方法将40例竹叶青蛇咬伤患者随机分为两组，均给予常规治疗，如伤口消毒清创处理，肌注破伤风抗毒素1500u，常规使用抗生素，给予地塞米松10mg、奥美拉唑40mg。对照组在常规治疗的基础上给予口服季德胜蛇药10片，每天3次；治疗组在常规治疗的基础上给予口服蛇伤胶囊5片，每天3次。检测治疗前及治疗后1周各组患者血浆中t‐PA、PAI‐1、TAT及SFMC水平。结果两组患者治疗前t‐PA、PAI‐1、SFMC、TAT值无明显差异（P＞0.05）。治疗后两组患者t‐PA、SFMC值均降低，差异均无统计学意义（P＞0.05）；PAI、TAT值均升高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。治疗前后两组患者的t‐PA、PAI、SFMC、TAT差值比较无统计学意义（P＞0.05）。结论蛇伤胶囊和季德胜蛇药对竹叶青蛇咬伤均有显著疗效，两种蛇药可能通过促进凝血酶的生成、增强凝血酶的活性，同时抑制纤溶系统而发挥止血作用。
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蛇伤胶囊治疗黄蜂蜇伤临床疗效观察
目的 观察蛇伤胶囊治疗黄蜂蜇伤的临床疗效.方法 将321例黄蜂蜇伤患者随机分为两组,对照组158例采用局部处理、抗感染、注射破伤风抗毒素、应用糖皮质激素、保护胃黏膜、改善细胞代谢及对症处理等治疗;治疗组163例在对照组治疗的基础上加用蛇伤胶囊治疗.比较两组患者治疗前、后的中医证候积分,并进行临床疗效评价.结果 治疗前两组患者的中医证候积分无显著差异(P>0.05),治疗后两组患者中医证候积分差值比较有显著性差异(P＜0.01);两组的临床疗效比较差异显著(P＜0.05).结论 蛇伤胶囊可以改善黄蜂蜇伤患者的临床症状,提高临床疗效.
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮细胞IL-8、VCAM-1、MIP-1α表达的影响
目的 观察蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮细胞IL-8、VCAM-1、MIP-1α表达的影响.方法 根据课题组前期实验方法制备蛇伤胶囊兔含药血清及复制竹叶青蛇伤细胞模型,设空白组(K B组)、模型组(M X组)和低、中、高浓度蛇伤胶囊药液治疗组(DY组、ZY组、GY组)5组,每组10个样本.在细胞实验中,KB组加入10%正常兔血清培养,MX组在KB组的基础上加入5μg/ml竹叶青蛇毒液培养,DY组、ZY组和GY组在MX组基础上培养6 h后分别加入5%、10%和15%的含中药兔血清继续培养.各组分别培养72 h后,收集细胞培养液,以酶联免疫吸附法检测细胞培养液中的IL-8、VCAM-1、MIP-1α含量.结果 MX组的IL-8、VCAM-1及MIP-1α水平相对KB组均显著升高(均P<0.01),蛇伤胶囊药液治疗组IL-8、VCAM-1及MIP-1α水平相对MX组均不同程度降低,其中ZY组变化有统计学意义(P<0.01或P<0.05).结论 蛇伤胶囊可通过降低 IL-8、VCAM-1及 MIP-1α表达治疗竹叶青蛇伤所致血管内皮炎症反应.
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤t-PA、PAI-1和AT-Ⅲ的影响
目的 研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制.方法 根据前期实验复制竹叶青蛇伤的动物及细胞模型,均设置空白组(KB),模型组(MX),低、中、高剂量蛇伤胶囊药液组(DY、ZY、GY),共5组,每组10个样本.在动物实验中,KB组经兔右后腿皮下注射0.75 ml/kg生理盐水,6 h后灌胃10 ml/kg生理盐水.MX、DY、ZY和GY组经兔右后腿皮下注射0.75 ml/kg竹叶青蛇毒液,6 h后分别灌胃10 ml/kg生理盐水和10 ml/kg低、中、高剂量蛇伤胶囊药液.各组均每日灌胃1次,连续灌胃1周.于末次灌胃后24 h经耳缘静脉采血,分离血清.在细胞实验中,KB组加入10%正常兔血清培养,MX组在KB组的基础上加入5μg/ml竹叶青蛇毒液培养,DY、ZY、GY组在MX组基础上培养6 h后分别加入5%、10%、15%的含中药兔血清继续培养,各组分别培养72 h后,收集细胞培养液.以酶联免疫吸附法检测兔血清及细胞培养液中组织型纤溶酶原激活剂(tissue plas-minogen activator,t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和抗凝血酶-Ⅲ(Antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)水平.结果 MX组的AT-Ⅲ和t-PA水平相对KB组均显著升高(P<0.01),PAI-1水平较KB组显著降低(细胞实验中,P<0.05;动物实验中,P<0.01);DY、ZY和GY组的AT-Ⅲ 及t-PA水平相对MX组均明显降低(动物实验:ZY组t-PA和DY组AT-Ⅲ,均P<0.05;细胞实验:ZY组AT-Ⅲ,P<0.05;其余均P<0.01),DY、ZY和GY组的PAI-1水平较MX组明显升高(P<0.01).结论 蛇伤胶囊具有促凝和抗纤溶、改善机体凝血功能的作用,是蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的部分机制.
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤凝血因子FVa、FⅧa、FIXa、FXa的影响
目的：研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制。方法选取新西兰大白兔20只，随机分为中药组和空白组各10只，分别以696 mg? kg －1?d －1蛇伤胶囊药液和生理盐水灌胃，每天2次，连续5天，末次灌胃2 h后心脏采血，常规方法制备含药血清和空白血清。采用噻唑蓝法对竹叶青蛇毒进行细胞毒性试验，确定蛇毒干预浓度为5μg／ml。人脐静脉血管内皮细胞常规培养、传代后，随机分为空白组（KB组），模型组（MX组），低、中、高剂量含药血清组（DY 组、ZY 组、GY 组），每组10个样本。KB组加入10％正常兔血清培养，MX组在KB组的基础上加入5μg／ml竹叶青蛇毒液培养，DY 组、ZY 组、GY 组在 MX 组基础上培养6 h后分别加入5％、10％、15％的含中药兔血清继续培养。各组分别培养72 h后，收集细胞培养液，以酶联免疫吸附法检测 FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平。结果 MX 组的 FVa、FⅧ a、FIXa、FXa 水平相对 KB 组显著下降（均 P＜0.05，其中FVa和 FXa的 P值＜0.01）；DY组、ZY组、GY 组的 FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平相对 MX组均出现不同程度的升高，其中ZY 组升高效果显著（均 P＜0.05，其中 FVa和 FXa的 P值＜0.01）。结论竹叶青蛇毒损伤血管内皮细胞导致凝血因子 FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平下降，蛇伤胶囊可以升高血管内皮细胞凝血因子 FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平，对竹叶青蛇伤引起的凝血障碍有显著治疗作用。
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蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮细胞TM／PC系统的影响
目的：研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制。方法选取新西兰大白兔20只，随机分为中药组和空白组，每组10只，分别以696 mg? kg －1?d －1蛇伤胶囊药液和生理盐水灌胃，每天2次，连续5天，末次灌胃2 h后心脏采血，常规方法制备含药血清和空白血清。采用噻唑蓝法对竹叶青蛇毒进行细胞毒性试验，确定蛇毒干预浓度为5μg／ml。人脐静脉血管内皮细胞常规培养、传代后，随机分为空白组（KB组），模型组（MX组），低、中、高剂量含药血清组（DY 组、ZY 组、GY 组）5组，每组10个样本。KB组加入10％正常兔血清培养，MX组在KB组的基础上加入5μg／ml竹叶青蛇毒液培养，DY组、ZY组、GY组在M X基础上培养6 h后分别加入5％、10％、15％的含中药兔血清继续培养。各组分别培养72 h后收集细胞培养液，以酶联免疫吸附法检测 TM 、T‐TM 、APC、EPCR、PS水平。结果 MX组的 TM 、T‐TM 、APC、EPCR、PS水平相对 KB组均显著升高（均P＜0.05，其中 T‐TM 、EPCR和PS的 P值＜0.01）；DY 组、ZY组、GY组的 TM 、T‐TM 、APC、EPCR、PS水平相对MX组均出现不同程度的降低，其中ZY组降低效果显著（均 P＜0.05，其中 T‐TM 和 EPCR的 P值＜0.01）。结论竹叶青蛇毒可造成血管内皮细胞损伤，增加机体出血风险；蛇伤胶囊可通过作用血管内皮细胞 T M／PC系统改善机体的凝血功能，是治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的部分机制。
