人血源凝血因子Ⅸ纯化研究概况

凝血因子Ⅸ(FⅨ)是一种糖蛋白,与凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ同属维生素K依赖因子,分子量55000～65000D,在体内由肝细胞合成并分泌到血液中,健康人血浆中浓度约5μg/ml[1].FⅨ在血液中以丝氨酸蛋白酶原的形式存在,经FⅪ或FⅦ和组织因子复合物激活后形成具有蛋白酶活性的活化FⅨ即FⅨa,参与凝血途径.人血液中凝血因子Ⅸ含量不足或缺乏会导致血友病乙(hemophilia B),又名乙型血友病.临床症状以自发性和轻微外伤后关节、肌肉和内脏出血难止为特征,大多数患者自幼有出血倾向,外伤或手术后渗血不止,渗血表现为皮下或肌肉血肿,关节腔反复出血导致肿胀甚至畸形.血友病乙发病率约(1.0～1.5)×10-5,占血友病的20%～25%,治疗的方法通常是静脉注射FⅨ(包括凝血酶原复合物和高纯FⅨ).

离子交换层析法制备人高纯FVIII制剂

目的:用一种新的离子交换层析法从人血浆冷沉淀中制备高纯FVIII.方法:溶解后冷沉淀经氢氧化铝吸附,低温下酸沉淀和聚乙二醇沉淀后用0.3%磷酸三正丁酯和1%Tween-80处理以灭活脂包膜病毒,然后过DEAE-Fractogel TSK 650M层析柱.绝大部分杂蛋白和磷酸三正丁酯-Tween-80直接流穿,而吸附的FVIII凝集活性蛋白通过增加离子强度洗脱,并直接除菌分装而无需超滤或加入蛋白稳定剂.结果:层析收率达70%～90%,制品特异性活性超过100 IU·mg-1,相对血浆纯化倍数超过5 000倍.结论:该制剂纯度高于传统FVIII制剂,应用于甲型血友患者的治疗具有更好的耐受性和效果.

阶跃洗脱吸附层析法分离纯化红霉素A

红霉素碱粗品经大孔吸附树脂SP825二级阶跃洗脱层析法分离纯化红霉素A.研究了红霉素A、C组分的固定床吸附、洗脱过程,包括穿透曲线、洗脱曲线的测定及洗脱条件的选择等.结果 表明,红霉素A组分在竞争吸附过程中对红霉素C组分具有一定优势,采用乙酸乙酯洗脱对红霉素A组分的选择性和洗脱率均较好.为了进一步提高分离效率,进行了柱层析实验,考察了红霉素上柱量和第一阶段洗脱方式等对红霉素A、C组分分离效果的影响.优化的红霉素上柱量为树脂饱和吸附量的40%左右,依次对层析柱以2%乙酸乙酯水溶液进行第一阶段洗脱5BV以及纯乙酸乙酯进行第二阶段洗脱,所得终产品中红霉素A组分含量可达95.8%,总收率可达96.1%.此工艺过程简单、高效、经济、无污染.

变形链球菌葡聚糖结合蛋白B的纯化

目的:从变形链球菌S.mutans Ingbritt (serotype c)培养液上清中纯化葡聚糖结合蛋白B.方法:Sephadx G-200凝胶(α-1,6键葡聚糖)亲和层析和Q-Sephrose FF离子交换层析.结果:纯化出约10μg 具有葡聚糖结合特性的GbpB蛋白.结论:通过Sephadx G-200凝胶(α-1,6键葡聚糖)亲和层析和Q-Sephrose FF离子交换层析纯化出变链菌葡聚糖结合蛋白B.

纯化乙型脑炎疫苗的研制

将乙脑P3毒株接种地鼠肾细胞,制备病毒原液,经灭活、浓缩、层析纯化后收集抗原,再经除菌、配制,制备乙脑纯化疫苗.结果表明:病毒浓缩液经纯化后,杂蛋白去除率大于99%,牛血清蛋白残留量也明显降低;纯化疫苗主要指标检定均达到预期效果;效力试验结果显示当纯化原液蛋白含量稀释至15μg/ml时,疫苗效力符合要求.

海洋拖缆地震资料初至波走时层析反演

初至波走时层析反演技术作为建立近地表速度模型的重要手段,是解决陆地资料复杂静校正问题的关键技术.而折射波广泛发育的海洋地震资料,对折射波信息的关注与运用并没有得到广泛的重视.本文首次将层析反演方法应用于海洋拖缆地震数据的近海底速度模型的建立.本文方法与陆地资料层析反演的主要区别在于:①在震源信号的小相位化处理后进行初至时间的拾取,避免了混合相位子波初至拾取不准带来的误差;②以海水深度与海水速度作为反演约束条件,减小了迭代误差.实测二维资料的层析反演结果表明,本文方法可反演出较为精确的海洋地层速度结构.

中子相衬层析成像装置