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日本医蛭的研究进展
日本医蛭是中国药典收载的唯一吸食动物血液的水蛭药材品种,具有极强的抗凝血酶活性和抗血小板聚集作用.现阶段对日本医蛭的研究十分匮乏,不利于日本医蛭资源繁育及开发利用.本研究综合国内外日本医蛭的研究现状进行了分析,并阐述了日本医蛭产业发展存在的问题,旨在为更好地保护利用中药材资源提供数据和参考.
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生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性测定的研究
目的 将生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性的测定,探讨反映水蛭生物活性的质量控制方法.方法 采用肝素钠作为对照品,选择活化部分凝血酶时间值作为抗凝活性评价依据,对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭、棒纹牛蛭的抗凝活性进行测定,测定结果分别用标准曲线法和生物检定统计法计算.结果 4种水蛭活性部分凝血酶时间法的量效关系曲线与肝素的量效关系曲线类似,突跃范围呈平行关系,上述特点符合生物检定的要求,以肝素钠作为标准品,采用生物检定技术活性部分凝血酶时间法测定水蛭等的抗凝活性是可行的.结论 活化部分凝血酶时间值可以全面反映水蛭的抗凝血作用,测定结果对临床使用更具指导意义.生物检定技术应用于中药质量评价,是对现有中药质量标准控制方法良好的补充.
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日本医蛭中一种新抗凝血蛋白质的仿生亲和纯化及鉴定
目的 从日本医蛭中快速提取和纯化生物活性蛋白质.方法 利用仿生亲和介质库进行配体筛选和1步纯化.结果 从日本医蛭中纯化出了1种具有抗凝血活性的新型低丰度蛋白质,命名为NLP-1 (New Leech Protein-1).通过进一步分析,其相对分子质量为13800,蛋白回收率可达到69.2%,其在血浆中含量为0.02mg/mL时即可产生明显的抗凝血现象.利用MALDI-TOF-TOF分析,在蛋白质数据库中未找到相似蛋白质或多肤.结论 从日本医蛭中纯化出的NLP-1蛋白质是1种新型的抗凝血物质,具有很高的开发研究价值.
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日本医蛭化学成分研究
目的 研究动物日本医蛭Hirudo nipponica Whitman的化学成分.方法 各种色谱方法 进行分离纯化,理化性质和光谱数据鉴定结构.结果 从日本医蛭中分离并鉴定了8个化合物,其结构分别为:菜油甾醇(campesterol) (1),十六烷基甘油醚(2),(2S,3S,4E)-4,5-二脱氢十八鞘氨醇二十五烷酸脂肪酰胺(3),1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-2-N-(二十二酰基)-E-4,5-二脱氢-3-羟基十八脑苷脂(4),丁二酸(5),次黄嘌呤(6),丙胺酸(7),异亮氨酸(8).结论 以上化合物均为首次从该动物中分离得到.
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日本医蛭不同萃取部位体外抗凝活性的实验研究
目的 研究日本医蛭不同萃取部位的抗凝活性,为日本医蛭的新药开发提供依据.方法 SD大鼠腹主脉取血,应用血凝仪体外测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和活化的部分凝血活酶时间(APTT).结果 日本医蛭的总提物能使大鼠PT,TT,APTT时间显著延长;石油醚部位能使大鼠PT,APTT延长.结论 中药日本医蛭的低极性小分子具有抗凝活性.
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土鳖虫与日本医蛭提取物抗凝血酶活性的比较研究
目的研究土鳖虫提取物的抗凝血作用,并与日本医蛭抗凝活性做了比较,为土鳖虫的新药开发提供实验依据.方法采用凝血酶直接滴定法.结果鲜(干)土鳖虫提取物的抗凝血活性均很强,与日本医蛭相当.但土鳖虫和日本医蛭抗凝血酶活性成分对热稳定性有差异.结论土鳖虫中含有直接作用于凝血酶的成分,但不同于日本医蛭的抗凝血酶成分.
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水蛭(日本医蛭)皮肤及消化系统组织学研究
目的:对水蛭(日本医蛭)进行组织学研究,为更好的保护这一宝贵中药材提供参考.方法:利用组织学切片及显微拍照方法,对日本医蛭皮肤及消化系统进行分析研究.结果:日本医蛭体壁可分为5层,分别是:表皮层、上皮层、真皮层、肌肉层、葡萄状组织.日本医蛭消化系统主要由口、咽、食道、嗉囊、肠、直肠以及肛门等部分构成.结论:本研究可为日本医蛭养殖学、病理学以及生理功能研究提供依据和基础资料.
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日本医蛭冻干粉的质量标准研究
目的:建立日本医蛭(水蛭)冻干粉(简称"冻干粉")的质量标准,为控制其质量提供参考.方法:取3批冻干粉,按照2015年版《中国药典》(一部)(简称"药典")水蛭项下要求对冻干粉进行鉴别、检查和抗凝血霉素活性分析;通过大耐受量(MTD)实验来考察其毒性;通过设计温度、湿度和强光照射试验来考察其稳定性.结果:供试品薄层色谱中,在与对照药材色谱的相应位置显相同的紫红色斑点,紫外光灯(365 nm波长)下显相同的橙红色荧光斑点.3批样品的平均水分含量为2.61%、总灰分含量为2.83%、酸不溶性灰分含量为0.38%、pH为6.92、黄曲霉毒素总量为0.28μg/kg、抗凝血酶活性为257.0 U/g,除汞元素含量略高于药典水蛭项下限量外,铅、镉、砷、铜元素含量均符合药典规定.MTD实验结果显示,给予以生药量计26.4 g/kg的冻干粉后小鼠未出现死亡及不良反应,此剂量为药典规定大用量的58倍.在20、40℃和强光[(4500±500)Lx]照射条件下,冻干粉的抗凝血酶活性随着贮藏时间的延长均明显下降,在4℃条件下保存6个月其抗凝血酶活性仍符合药典要求;在高湿(相对湿度为90%、75%)条件下,冻干粉的吸湿性极强.结论:本研究按照药典标准对日本水蛭冻干粉建立了一套系统的质量评价标准,可用于其质量控制.
