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加味黄芪赤风汤对小鼠系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响
目的：观察加味黄芪赤风汤对脂多糖（LPS）刺激的肾小球系膜细胞（GMC）增殖及细胞外基质分泌的影响，探讨其在防治肾脏纤维化中的机制。方法采用血清药理学方法，以 LPS 作为刺激因子，以 CCK -8法、MTT 法检测含药血清对 GMC 的毒性作用，并动态观察在各种处理因素的作用下，GMC 的增殖情况；酶联免疫法吸附试验（ELISA）测定细胞外基质（ECM）即：层粘连蛋白（LN）、IV 型胶原（Col - IV）、纤维连接蛋白（FN）的分泌。结果与正常组比较，各含药血清对 GMC 无毒性作用（P ﹥0.05），LPS 能刺激体外培养的 GMC 增殖，0.625~80μg/ ml LPS 组与正常组比较，细胞增殖差异有统计学意义（P ﹤0.05，P ﹤0.01）；加味黄芪赤风汤组在24 h、48 h、72 h 对 LPS 刺激的 GMC 增殖都有抑制作用，且24 h 各组抑制率高；在某个固定的时间点中药各组抑制率比较，中剂量组与高剂量组比较，差异无统计学意义（ P ﹥0.05），中剂量组与低剂量组比较，差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。在对 ECM 的影响中，72 h 较模型组比较，加味黄芪赤风汤高剂量组中 Col -Ⅳ、FN 的含量明显减少（P ﹤0.01），而 LN 含量变化不明显；中剂量组中 Col -Ⅳ、FN、LN 的含量均明显减少（ P ﹤0.01）；低剂量组仅有 FN 含量减少（P ﹤0.01），而 Col -Ⅳ、LN 含量变化不明显。结论加味黄芪赤风汤能显著抑制 LPS 刺激下 GMC 的增殖，减少 ECM 的分泌，说明 GMC 是加味黄芪赤风汤防治肾脏纤维化作用的重要靶细胞。
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加味黄芪赤风汤对阿霉素诱导肾小球足细胞凋亡的影响
目的:探讨加味黄芪赤风汤对阿霉素诱导的肾小球足细胞凋亡的影响.方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,以阿霉素(adriamycin,ADR)诱导制作足细胞损伤模型.按随机数字表法分为空白组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组),采用CCK-8法检测各组足细胞存活率,流式细胞仪检测各组足细胞凋亡情况,并采用EXP032v1.2软件分析足细胞凋亡率,透射电镜下观察各组足细胞凋亡超微结构.结果:与空白组比较模型组足细胞存活率明显下降,与模型组比较中药高、中剂量组足细胞存活率均明显上升,中药低剂量组无明显升高;与空白组比较模型组早期凋亡率明显升高,与模型组比较中药各组及替米沙坦组早期凋亡率均明显下降,中药高、中剂量组与替米沙坦组比较差异无统计学意义,与低剂量组比较差异有统计学意义;模型组较空白组足细胞明显皱缩、胞浆内细胞器减少,染色质边集、凝聚成块、核碎裂,形成凋亡小体,中药各组及替米沙坦组较模型组凋亡超微结构均有不同程度改善.结论:加味黄芪赤风汤对ADR诱导的足细胞损伤具有保护作用,并呈现一定的量效关系,其保护作用可能与该方能够抑制足细胞的过度凋亡有关.
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加味黄芪赤风汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾脏皮质SOD和MDA的影响
目的:探讨加味黄芪赤风汤对阿霉素肾病大鼠蛋白尿治疗及抗自由基损伤的作用.方法:大鼠尾静脉注射阿霉素制作阿霉素肾病模型,于实脸第2,4,6,8周末收集24h尿液并测24h尿蛋白定量,于实脸第8周末取血和肾胜组织,进行血清ALB,TP,TCH以及肾脏皮质SOD,MDA的侧定.结果:2倍剂量加味黄芪赤风汤组与同期模型组相比,实验第4,6,8周末24h尿蛋白定量均降低(P<0.05),肾脏皮质SOD显著升高(P<0.01)及MDA降低(P<0.05);正常剂量加味黄芪赤风汤组与同期模型组相比,实脸第4周末24h尿蛋白定量减少(P<0.05),肾脏皮质SOD显著升高(P<0.01).结论:加味黄茂赤风汤能够明显改善阿霉素份病大鼠蛋白尿,提高抗自由基能力,改善肾脏自由基损伤.
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加味黄芪赤风汤对阿霉素大鼠肾脏保护及自噬水平的调控作用
目的:观察加味黄芪赤风汤对阿霉素肾病大鼠肾脏的保护作用及其对自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达的影响.方法:设立空白、模型、替米沙坦及加味黄芪赤风汤组,光镜下观察肾组织病理学变化,免疫组化法检测FN、LN、LC3和Beclin-1的表达及分布.结果:加味黄芪赤风汤可保护阿霉素肾病大鼠肾脏,显著抑制肾组织中的FN、LN,显著拮抗自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的过度表达.结论:加味黄芪赤风汤通过调控自噬水平对阿霉素肾病大鼠肾脏起到保护作用.
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张昱运用大剂量黄芪治疗肾病蛋白尿的经验
蛋白尿是慢性肾脏病的主要临床表现,也是诊断和判定肾病疗效的重要评价指标.同时,蛋白尿的治疗情况也反映了肾脏病的进展及预后.然而,慢性肾脏病病程长,蛋白尿反复难消,且易变生他症,治疗上颇为棘手.张昱主任医师家门四代业医,早年师从国医大师王绵之教授攻读博士学位,颇得薪传,从医20余年,博采众长,学养深厚,以治疗各类肾脏病为专长,特别是采用其经验方加味黄芪赤风汤倍用黄芪治疗蛋白尿,取得满意疗效.笔者有幸跟随师学习,做一总结,以飨同道.
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从自噬机制探讨加味黄芪赤风汤含药血清对阿霉素诱导的肾小球足细胞损伤的保护作用
目的 研究加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞自噬及足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及desmin表达的影响.方法 采用体外培养小鼠肾小球足细胞、以阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的方法制作足细胞损伤模型.随机分为空白组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组).采用Western blot法检测各组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、desmin和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平,透射电镜下观察各组足细胞自噬超微结构变化.结果 (1)与空白组比较,模型组nephrin、podocin表达明显下降(P＜0.01),desmin表达明显升高(P＜0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin表达明显升高(P均＜0.01),desmin表达明显下降(P均＜0.01),中药低剂量组无明显改善(P＞0.05).(2)模型组较空白组自噬小体数量明显增多,体积增大,细胞器减少;中药高、中剂量组及替米沙坦组较模型组自噬超微结构均有不同程度改善,而中药低剂量组无明显改变.(3)与空白组比较,模型组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显上升(P＜0.01);与模型组比较,中药高、中剂量及替米沙坦组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显下降(P＜0.01),中药低剂量组无明显下降(P＞0.05).结论 加味黄芪赤风汤对ADR诱导的足细胞损伤具有保护作用,调节足细胞自噬活性可能是其足细胞保护作用的内在机制之一.
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加味黄芪赤风汤含药血清对LPS诱导的小鼠肾小球系膜细胞ColⅣ、MMP-2及TIMP-2表达的影响
目的 探讨加味黄芪赤风汤对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ,ColⅣ)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制酶2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)水平的影响.方法 采用血清药理学方法制备正常血清及替米沙坦、加味黄芪赤风汤高、中、低剂量含药血清.体外培养GMCs,以LPS作为刺激因子,诱导系膜细胞增殖.将GMCs分为正常组、模型组、替米沙坦组及加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组(简称中药高、中、低剂量组).采用ELISA法检测各组GMCs上清液中ColⅣ含量,Western blot法检测GMCs中MMP-2及TIMP-2蛋白表达水平.结果 与正常组比较,LPS刺激72 h后,模型组GMCs上清ColⅣ含量明显增多,系膜细胞MMP-2及TIMP-2蛋白表达均明显上调,MMP-2/TIMP-2比例下调(均P＜0.01);与模型组比较,中药高、中剂量组及替米沙坦组ColⅣ含量明显减少(P＜0.01);中药中、低剂量组MMP-2蛋白表达明显下调(P ＜0.01,P＜0.05);替米沙坦组及中药高、中、低剂量组TIMP-2蛋白表达均下调(P＜0.01).中药高剂量组TIMP-2蛋白表达水平明显低于中药低剂量组(P＜0.01);替米沙坦组、中药高、中剂量组MMP-2/TIMP-2比例明显上调(P＜0.01).结论 加味黄芪赤风汤可调节LPS诱导的GMSc ECM中MMP-2/TIMP-2比例失调,抑制ECM中ColⅣ的过度产生,促进ECM降解,减少ECM积聚,从而延缓肾小球硬化的进程.
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基于TGF-β1/Smad信号通路的加味黄芪赤风汤抗肾脏纤维化机制研究
目的 观察加味黄芪赤风汤对TGF-β1/Smad信号通路的影响,探讨其抗肾脏纤维化的机制.方法 采用血清药理学方法,大鼠予加味黄芪赤风汤和替米沙坦灌胃,制备含药血清.体外培养小鼠系膜细胞,以脂多糖作为炎症刺激因子.实验分为6组:正常组、模型组、替米沙坦组、加味黄芪赤风汤(简称中药)高、中、低剂量组.含药血清干预72 h后,采用酶联免疫法吸附试验测定各组细胞上清液中层粘连蛋白(lam inin,LN)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量;采用Western blot法检测各组细胞中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果 (1)与正常组比较,模型组上清液中LN和FN含量增加(P＜0.01);与模型组比较,替米沙坦组与中药中剂量组LN及FN含量减少(P＜0.05,P＜0.01),中药低剂量组上清液中FN含量亦减少(P＜0.01).(2)与正常组比较,模型组TGF-β1、p-Smad2/3、CTGF蛋白表达显著增加,Smad7蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,替米沙坦组、中药高、中、低剂量组TGF-β1、CTGF蛋白表达均降低(P＜0.01,P＜0.05),替米沙坦组、中药高、中剂量组p-Smad2/3蛋白表达降低(P＜0.01),中药高、中剂量组Smad7蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 加味黄芪赤风汤能够抑制致炎因子诱导的肾小球系膜细胞分泌细胞外基质增加和肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad信号通路的过度激活,这可能是加味黄芪赤风汤抗肾脏纤维化的机制之一.
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加味黄芪赤风汤治疗IgA肾病蛋白尿的单病例随机对照研究
目的 观察加味黄芪赤风汤治疗IgA肾病蛋白尿的有效性及安全性.方法 病例来源于2011年12月～2012年12月就诊于中国中医科学院西苑医院肾病科门诊患者,纳入5例轻到中度蛋白尿、肾功能正常且属中医气虚血瘀证型的IgA肾病患者,采用单病例随机对照设计,治疗期应用加味黄芪赤风汤联合替米沙坦,对照期应用替米沙坦,疗效指标为24h尿蛋白定量与中医症状积分,安全性指标为肝肾功能以及血常规.结果 每例患者治疗期中医症状积分均较对照期有不同程度的减少(P＜0.05);将5例患者中医症状积分合并,治疗期较对照期明显改善(P＜0.05).每例患者治疗期24 h尿蛋白定量均较对照期减少(P＜ 0.05);将5例患者24 h尿蛋白定量合并,治疗期较对照期明显减少(P＜0.05).结论 加味黄芪赤风汤治疗IgA肾病蛋白尿安全且有效,单病例随机对照设计应用于中医临床研究具有可行性.
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加味黄芪赤风汤治疗IgA肾病蛋白尿临床研究
目的:探讨加味黄芪赤风汤治疗IgA肾病蛋白尿的临床疗效及药理机制.方法:选取IgA肾病蛋白尿患者32例,采用随机数字表法分为对照组和观察组各16例.对照组给予替米沙坦治疗,观察组给予加味黄芪赤风汤治疗.结果:治疗3个月后,两组血肌酐水平比较无统计学意义(P＞0.05);观察组24h尿蛋白水平、中医证候积分均优于对照组(P均＜0.05).结论:加味黄芪赤风汤可有效降低IgA肾病尿蛋白水平和中医证候积分,对血肌酐水平无明显影响.
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他克莫司联合加味黄芪赤风汤治疗老年特发性膜性肾病的临床疗效
目的 :分析对老年特发性膜性肾病(IMN)患者给予他克莫司、加味黄芪赤风汤联合治疗的临床疗效.方法:随机数字表法将88例老年IMN患者分为对照组、研究组各44例.对照组采用他克莫司、甲泼尼龙治疗,研究组采用他克莫司、加味黄芪赤风汤联合治疗.治疗12周,记录两组治疗效果.结果:(1)研究组总有效率明显优于对照组(P<0.05);(2)研究组血脂、血糖、尿沉渣红细胞数量、蛋白尿水平、不良反应均低于对照组,有统计学意义(P<0.05).结论:对老年IMN患者给予他克莫司、加味黄芪赤风汤联合用药的疗效安全性高,不良反应少.
