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针刺血清调控内质网应激反应对无镁诱导培养大鼠海马神经元惊厥性损伤的保护作用
目的:观察针刺血清对无镁诱导惊厥样放电海马神经元凋亡数及内质网应激伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸蛋白酶蛋白-12(Caspase-12)表达的影响,探讨针刺血清对海马神经元惊厥性损伤的保护机制.方法:SD大鼠腹腔注射戊四唑诱发急性惊厥后分为针刺组及对照组.针刺组取“百会”“大椎”针刺,每日1次,共7d.末次针刺后,针刺组大鼠取血清作为针刺血清,对照组取血清作为非针刺血清.以无镁诱导惊厥样放电的原代培养胎鼠海马神经元为模型,根据对培养10 d海马神经元的不同处理分为正常细胞外液组(简称正常组)、无镁细胞外液组(简称无镁组)、针刺血清组和非针刺血清组.正常组将无血清培养液换成细胞外液培养3h后换液培养,其他各组用无镁细胞外液培养3h后换液培养.4组分别于换液培养2、12、48h3个时间点采用TUNEL法和Western blot法分别检测海马神经元凋亡情况及GRP78、CHOP和Caspase-12蛋白表达情况.结果:正常组仅见少量凋亡海马神经元;无镁组3个时间点凋亡海马神经元数均较正常组明显增加(P＜0.01);针刺血清组3个时间点凋亡海马神经元数与无镁组比较明显减少(P＜0.05,P＜0.01),与非针刺血清组12、48 h比较凋亡海马神经元数明显减少(P＜0.01).与正常组比较,无镁组3个时间点海马神经元CHOP和Caspase-12蛋白表达均明显增强(P＜0.05,P＜0.01),2h时间点海马神经元GRP 78蛋白表达明显增强(P＜0.05);与无镁组比较,针刺血清组3个时间点神经元GRP 78蛋白表达均明显增强(P＜0.01,P＜0.05),12、48 h时间点海马神经元CHOP蛋白表达明显减少(P＜0.05,P＜0.01),3个时间点神经元Caspase-12蛋白表达均显著减少(P＜0.05,P＜0.01);与非针刺血清组相比,针刺血清组2、12h时间点海马神经元GRP 78蛋白表达均明显增强(P＜0.01,P＜0.05),12、48 h时间点海马神经元CHOP蛋白表达明显减少(P＜0.05),3个时间点海马神经元Caspase-12蛋白表达均明显减少(P＜0.01,P＜0.05).结论:针刺血清能明显减少海马神经元凋亡数,上调GRP 78蛋白表达,下调CHOP和Caspase-12蛋白表达,发挥维持内质网稳定性的重要作用.
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小陷胸汤化裁方对非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏组织Caspase-12蛋白表达的影响
目的 探讨小陷胸汤化裁方治疗非酒精性脂肪肝病的可能作用机制.方法 将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和中药高、中、低剂量组,每组10只.除空白组外,其余大鼠采用高脂饮食12周建立非酒精性脂肪肝模型,造模后中药高、中、低剂量组分别给予小陷胸汤化裁方1.5、1.0、0.5ml/(100g·d)灌胃,西药组给予多烯磷脂酰胆碱胶囊溶液3ml/d灌胃,空白组及模型组分别给予等量生理盐水灌胃.给药5周后取肝脏组织进行HE染色,并采用免疫组化法和Western-Blot法检测Casepase-12蛋白表达.结果 肝脏病理结果显示,与空白组比较,模型组大鼠肝细胞存在明显脂肪变性和炎症活动;中药各剂量组肝细胞脂肪变性程度和炎症活动度较模型组明显减轻,且其脂肪变性和炎症活动度也比西药组轻.中药各剂量组与西药组肝脏组织Caspase-12蛋白表达均明显低于模型组(P＜0.05),且中药高剂量组Caspase-12蛋白表达低于西药组及中药中、低剂量组(P＜0.05). 结论 小陷胸汤化裁方能够明显延缓非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏损害,可能与下调肝脏组织Caspase-12蛋白表达有关.
关键词： 非酒精性脂肪肝病 小陷胸汤 内质网应激 Caspase-12蛋白 -
CCl4诱导大鼠肝硬化形成过程中Caspase-12蛋白表达与肝细胞凋亡的相关性
目的:探讨CCl4大鼠肝硬化形成过程中Caspase-12蛋白表达与肝细胞凋亡的相关性.方法:首次CCl4 3 mL/kg sc,以后500 mL/LCCl4橄榄油溶液2 mL/kg sc,2次/wk,共计12wk制备大鼠肝硬化模型.设4 wk、8 wk、12wk 3个时间点,动态观察肝细胞凋亡指数、肝组织Caspase-12免疫组织化学及蛋白表达.结果:模型大鼠4 wk时呈典型的急性肝损伤改变,8 wk时大鼠呈典型的慢性肝损伤肝纤维化的病理改变,12 wk时已形成肝硬化;随着肝损伤加重和肝硬化形成,肝细胞凋亡指数显著增加,模型对照4 wk与正常组、模型对照8wk比较有显著差异(70.4±11.59 vs 9.6±1.14,95.8±10.94,P＜0.01),模型对照12 wk与模型对照8 wk比较有统计学意义(122.8±17.51 vs 95.8±10.94,P＜0.05).Caspase-12蛋白表达亦显著增加,模型对照4 wk与正常组、模型对照8 wk比较有显著差异(0.071±0.014 vs 0.014±0.007,1.172±0.028,P＜0.01),模型对照12wk与模型对照8 wk比较亦有显著差异(1.84±0.083 vs 1.172±0.028,P＜0.01);且肝细胞凋亡指数和Caspase-12蛋白表达量之间呈正相关(r=0.89,t=9.125,P＜0.01).结论:内质网凋亡通路参与CCl4大鼠肝硬化形成过程中肝细胞凋亡事件,其关键的凋亡酶Caspase-12蛋白表达量基本能够反映肝细胞的凋亡程度.
关键词： 肝硬化 凋亡 Caspase-12蛋白
