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伊文思蓝、zo-1评估血脑屏障损伤的应用研究
目的:寻找新的简捷、快速、精确、灵敏的评估血脑屏障(BBB)损伤的指标和方法.方法:应用脑缺血再灌注损伤模型,造成大鼠BBB的损伤,采用形态学和化学定量两种新方法观察BBB对伊文思蓝的通透性,应用免疫组织化学法检测脑组织中ZO-1蛋白的表达水平的变化,以反映BBB的损伤程度.结果:①脑局限性缺血再灌注损伤后脑内ZO-1蛋白水平迅速降低,至再灌注后24 h达低水平,至再灌注7 d时恢复到正常水平;②两种方法检测的伊文思蓝大通透率均出现在再灌注损伤第24 h,其变化趋势与脑组织中ZO-1蛋白水平的变化趋势相一致.结论:BBB对伊文思蓝的通透性和脑组织中ZO-1蛋白水平的变化均可用于反映BBB损伤的程度,形态学观察BBB对伊文思蓝通透率的方法可灵敏地反映BBB的损伤程度.
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开颅手术对大鼠血脑屏障的影响
目的 通过切开硬脑膜和蛛网膜与不切开硬脑膜的开颅手术分析大分子物质是否会进入脑脊液和脑实质内. 方法 将成年雄性SD大鼠采用随机数字表法分成3组,分别为实验组A、实验组B和对照组C.A组在全身麻醉下行开颅手术,剪开硬脑膜和蛛网膜;B组仅做硬脑膜外的开颅手术;C组只麻醉,不做开颅手术.使用伊文思蓝作为示踪剂来检测实验结果,分别于不同时间点(1,3,6,12,24,72 h、1周)之前0.5 h内通过静脉注射一定剂量的伊文思蓝,0.5 h后处死,收取脑标本.采用荧光分光光度计测量脑组织中伊文思蓝的含量,分别进行统计学处理.对照组除未做开颅手术外,其他处理同实验组.取一部分A组和B组大鼠分别于术前和术后3,72 h进行脑组织含水量测定. 结果 脑组织取材时可见A组1,3,6,12,24 h局部呈浅蓝色,72 h脑组织的浅蓝色较微弱,1周未发现蓝染.B组和C组局部脑组织未发现蓝染.A组术后1,3,6,12,24,72 h和1周脑组织中伊文思蓝的含量[(18.07±1.25)μg/ml、(36.21±0.78)μg/ml、(25.73±1.14)μg/ml、(16.53±0.84)μg/ml、(23.34±1.91)/μg/ml、(43.34±2.25)μg/ml、(25.27±1.88)μg/ml]均比B组[(3.15±0.45)μg/ml、(3.36±0.33)μg/ml、(2.98±0.54)μg/ml、(3.47±0.55)μg/ml、(3.54±0.37)μg/ml、(2.88±0.42)μg/ml、(2.85±0.22)μg/ml]和C组[(2.97±0.37)μg/ml]高(P<0.01).利用干湿重法进行术前、后脑组织含水量测定,结果显示术前后脑组织含水量改变差异无统计学意义(P>0.05). 结论 开颅术后一些大分子物质能通过头皮创面渗出,在硬脑膜缝合不十分严密的情况下,能越过血脑屏障和血脑脊液屏障直接进入蛛网膜下腔,并进入脑组织内.
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伊文思蓝共振瑞利散射法测定穿琥宁
目的:通过实验,建立一种测定穿琥宁的新方法.方法:在pH 4.5的酸性溶液中,取适量穿琥宁溶液和伊文思监溶液混合,以二次蒸馏水稀释,放置一段时问后在荧光光度计上以λ_(em)=λ_(ex)方式进行同步拆扫描.结果:伊文思蓝和穿琥宁能够迅速反应牛成离子缔合物,导致共振瑞利散射(RRS)光谱的改变,产后比较特征的新的RRS光谱,大峰值在717 nm,并且在25～900 mg·L~(-1)范围内,RRS强度和穿琥宁的浓度成正比.结论:我们建立了测定穿琥宁的共振瑞利散射法.该法灵敏度较高,检测限可达到45 ng·mL~(-1),用于检测某些穿琥宁样品叶穿琥宁的含量,结果较满意.
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樟柳碱对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响
研究樟柳碱对大鼠急性脑缺血及再灌注损伤的影响.方法:电灼闭塞锥动脉并夹闭颈动脉,使大鼠前脑缺血30 min,放开双侧颈总动脉重灌60 min,并在重灌40 min时iv 2%伊文思蓝0.2 mL.分别用原子吸收分光光度法,分光光度法测定前脑钙含量和伊文思蓝含量.结果:缺血重灌后,大鼠脑钙含量由对照的112±6μg/g干重脑增加至165±7μg/g干重脑,伊文思蓝含量由对照的3.3±0.3μg/g湿重脑增加至6.7±0.5μg/g湿重脑,樟柳碱,东莨菪碱可使异常增高的脑钙含量以及伊文思蓝含量明显降低.结论:樟柳碱和东莨菪碱通过降低缺血及重灌引起的脑积累,减轻脑损伤改善脑功能.
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大黄乳酸菌素泡腾片对A型肝性脑病大鼠血脑屏障的影响
目的:探讨大黄乳酸菌素泡腾片(RLT)对A型肝性脑病大鼠血脑屏障的影响.方法:用硫代乙酰胺(TAA 250mg/kg )灌胃建立大鼠A型肝性脑病模型,RLT大、中、小三剂量防治,伊文思蓝(EB)渗出法检测血脑屏障通透性,透射电镜观察血脑屏障超微结构变化.结果:①模型组脑组织EB含量明显高于正常组(P<0.01), RLT大、中、小三剂量组均较模型组明显降低(P<0.01),以中剂量组下降显著.②模型组脑毛细血管管腔明显扩张,内皮细胞和星形胶质细胞超微结构均可见明显损害, RLT大、中、小三剂量组均有不同程度改善,以中剂量组改善明显.结论:A型肝性脑病时,血脑屏障受损,通透性增加.大黄乳酸菌素泡腾片可改善血脑屏障受损情况,这可能是该药治疗肝性脑病的作用机理之一.
