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壳聚糖微球对伊文思蓝鼻腔给药靶向到脑的影响及鼻腔毒性研究
目的:考察壳聚糖微球对伊文思蓝鼻腔给药靶向到脑的影响及鼻腔毒性.方法:采用交联固化法制备伊文思蓝壳聚糖微球;大鼠鼻腔给药,以脑部伊文思蓝含量为指标考察伊文思蓝壳聚耱微球的脑靶向性;以蛙上腭纤毛持续摆动时间为指标考察伊文思蓝壳聚糖微球对鼻腔纤毛的毒性;取鼻腔黏膜做组织切片,考察黏膜的病理变化.结果:优化工艺制得的伊文思蓝壳聚糖微球粒径为(30.2±2)μm、载药量为(10.2±0.7%)、包封率为(71.6±5.5)%;对鼻腔纤毛无毒、对大鼠鼻腔黏膜无急性毒性,具有良好的脑靶向性(与壳聚糖溶液相比,P<0.05).结论:壳聚糖微球是水溶性药物鼻腔给药靶向到脑的良好载体.
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废用状态下大鼠骨骼肌再负荷对比目鱼肌calpain活性和肌细胞膜通透性的影响
目的:探讨废用状态及废用后再负荷对大鼠比目鱼肌钙蛋白酶(calpain)活性和肌细胞膜通透性的影响.方法:采用尾部悬吊法建立大鼠后肢骨骼肌废用模型,将48只雌性SD大鼠分为正常组(CON)、正常运动组(CON+T)、吊尾2周组(TS)和吊尾2周后运动组(TS+T),每组12只.用伊文思蓝(Evans blue,EB)作为示踪物,检测细胞膜的通透性;用酪蛋白酶谱法检测calpain的活性.结果:CON组和CON+T组细胞间隙充满EB,肌细胞内则未见,TS组极少量肌细胞有EB进入,TS+T组有部分细胞内充盈EB.TS组calpain水解条带与正常组相比吸光度呈增加趋势,并且有自激发条带出现,TS+T组calpain水解条带更加明显,calpian水解活性明显增强.结论:大鼠在经历2周吊尾后的再负荷,肌细胞膜通透性升高,屏障功能受损,可能与calpain水解肌细胞膜上的骨架蛋白有关;由calpian介导的细胞骨架蛋白的降解加速可能是导致废用后再负荷骨骼肌损伤的重要机制.
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Evans蓝用于鼠皮肤炎症反应损害程度的量化分析
目的:利用Evans蓝对由组胺和神经肽P物质引起的局部皮肤炎症损害、渗出,进行量化分析.方浇法:从Balb/c鼠尾静脉注射标定浓度的Evans蓝100μL,麻醉后在脊背局部皮内分别注射20μL组胺、神经肽物质P及生理盐水,15 min后处死动物,切下反应皮肤区,取约1 cm×1 cm×1 cm组织放入600μL二甲酰胺溶液的小瓶中保存.实验时取出组织55℃避光孵育24h,取200μL孵化液用分光光度计进行测定,测量渗出的Evans蓝的吸光度进行定量分析.结果:Evans蓝注射后5 min给予组胺3.0μg/0.2 cm2诱导效果佳,可得到大的Evans蓝吸光度.Evans蓝注射后10 min,给予0.1 μg/0.2 cm2神经肽P物质可得到大的Evans蓝吸光度.Evans蓝在0.312-100mg/L浓度范围内与吸光度呈线性关系.结论:Evans蓝可用于由组胺和神经肽P物质诱导的鼠局部皮肤炎症损害渗出的定量监测分析,所建立的评估超敏反应程度的方法简单、敏感且可定量.
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脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障通透性的荧光定量分析
目的:通过敏感的荧光方法,定量分析脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障(BBB)的通透性.方法: 采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2 h后再灌注,采用伊文思蓝(EB)荧光定量的方法,分别观察了再灌注2 h、3 h、9 h、24 h和48 h时BBB的通透性.结果:再灌注3 h时,缺血侧纹状体EB的含量开始增加(与假手术组相比,P＜0.05).再灌注9 h时,缺血侧新皮层EB的含量开始增加(P＜0.01).而再灌注2 h时纹状体EB的含量和再灌注2 h、3 h时新皮层EB的含量与假手术组相比差别无显著(P＞0.05). 结论: 脑缺血2 h再灌注2-3 h时,纹状体的BBB通透性开始增加.再灌注9 h时,新皮层的BBB通透性增加.纹状体BBB较新皮层更易受损.EB荧光的方法可精确定量地反映BBB通透性,是研究BBB通透性理想的方法.
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全脑照射后血脑屏障改变对放射性脑损伤的影响
目的 探讨全脑照射后血脑屏障通透性的改变对放射性脑损伤的影响.方法 80只昆明小鼠随机分对照组、5 Gy、15 Gy和30 Gy剂量组,每组20只,分别于照射后1周和4周,各组随机取出10只小鼠采用Morris水迷宫测试其空间记忆能力,行为测试结束后,随机抽取7只测量其脑内伊文思蓝的含量,3只在电镜下观察血脑屏障结构的改变.结果 照射后1周,15 Gy和30 Gy剂量组脑内依文思蓝明显升高;照射后4周,15 Gy剂量组恢复到对照组水平,而30 Gy剂量组仍未见恢复.照射后1周,15 Gy和30 Gy剂量组小鼠第1次穿越平台的时间延长和穿越次数明显减少;照射后4周,15 cy剂量组恢复到对照组水平,而30 Gy剂量组仍未见恢复.电镜结果显示15 Gy剂量组照射后1周血脑屏障基膜周围出现透亮区,照射后4周恢复;30 Gy剂量组照射后1周血脑屏障基膜周围也出现透亮区,而照射后4周除血脑屏障基膜继续透亮区外,尚出现内皮细胞核固缩、神经元凋亡和脱髓鞘等现象.结论 放射后血脑屏障的通透性的改变是放射损伤的结果,可能也是放射后继发性脑损伤的原因.
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超声造影对心肌毛细血管通透性的影响
目的 研究高机械指数、高剂量微泡造影剂条件下超声造影对心肌毛细血管通透性的影响并观察其恢复正常的时间.方法 将30只Wistar雄性大鼠随机分为5组.A～D组采用相同的超声造影条件,但各组伊文思蓝(EB)注射时间不同:分别为超声造影前10 s、造影结束即刻、造影结束后5 min、造影结束后20 nun给予EB;E组为对照组(假造影组),即5 nun超声照射结束后即刻再注射造影剂微泡及EB.所有动物均在EB注射后5 min处死.测定心脏EB渗出面积百分比及单位心肌内EB含量.结果 A、B、C组EB渗出面积明显高于对照组(P<0.05),D组渗出面积与对照组无差异(P>0.05);A、B组心肌EB含量明显高于对照组(P<0.05),C及D组心肌EB含量与对照组无差异(P>0.05).各组造影前后心率及心律失常数目无差异(P>0.05).结论高机械指数超声联合高剂量微泡造影剂可使心肌毛细血管通透性增加,其恢复时间在超声造影结束后20 min内.
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超声微泡造影剂对大鼠骨骼肌毛细血管通透性的影响
目的 研究治疗剂量超声破坏微泡造影剂对大鼠骨骼肌毛细血管通透性的影响.方法 以伊文思蓝(EB)为指示剂,18只清清级SD大鼠,随机均分为EB组(E)、EB+超声组(E+U)和EB+超声+微泡组(E+U+M)共3组进行实验.给予相同参数条件的超声进行照射,经颈动脉输/不输入微泡造影剂,在体荧光显微镜下观察EB外溢情况并行视觉评分;使用标准曲线和分光光度法测量各组大鼠脊斜肌中EB的含量.结果 E+U+M组镜下可见微血管周嗣EB外溢,视觉评分等级为2级.显著高于E组(0级)及E+U组(0-1级)(P<0.05).E组及E+U组两者相比无显著性差异(P>0.05).E+U+M组脊斜肌中EB含量为(51.57±3.89)μg/g,比E组[(28.99±4.67)vg/g]及E+U组[(30.99±4.11)μg/g]明显增加(P<0.05).E组及E+U组两者相比无显著性差异(P>0.05).结论 超声介导微泡造影剂破坏可使脊斜肌组织毛细血管通透性增加.可能是超声微泡造影剂增强基因转染的主要机制之一.
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微泡增强的超声空化增加兔睾丸组织伊文思蓝浓度的研究
目的：探讨微泡增强的超声空化增加睾丸组织的药物浓度的可行性。方法18只雄性8月龄性成熟新西兰兔随机分为空白对照组（C）、单纯微泡组（MB）、治疗超声组（TUS）、超声联合微泡辐照组（MEUS）4组，每组各9个。MB组给予静注微泡造影剂0.1 mL／kg ；TUS组给予超声辐照5 min；MEUS组给予静注微泡造影剂0.1 mL／kg的同时超声辐照5min；每组在治疗前5min均经耳缘静脉注射2％伊文思蓝（EB）2.5 mL／kg；治疗后1 h取各组睾丸组织制备组织匀浆测量 EB 浓度。结果 MEUS组兔睾丸组织内 EB 浓度高于其他各组（P＜0.05），差异有统计学意义。结论微泡增强的超声空化可以明显提高睾丸组织内EB浓度。
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高渗盐水对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响
目的:探讨10％高渗盐水(hypertonic saline,HS)对脑缺血再灌注大鼠脑水肿、血脑屏障(bloodbrain barrier,BBB)通透性的影响及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)变化的关系.方法:126只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=18)、脑缺血再灌注6、12、24 h组(模型6、12、24 h组,各组n=18)和脑缺血再灌注+10％ HS 6、12、24 h组(治疗6、12、24 h组,各组n=18).采用右侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法制作动物模型,比较各组右侧脑组织脑水含量(brainwater contain,BWC)、伊文思蓝(evans blue,EB)含量及VEGF mRNA和蛋白的表达差异.结果:模型6、12、24 h组和治疗6、12、24 h组BWC、EB含量均高于假手术组;模型组BWC、EB含量随时间推移逐渐上升,治疗组BWC、EB含量随时间推移逐渐降低.治疗6、12、24 h组BWC、EB含量均低于模型6、12、24h组;模型6、12、24 h组和治疗6、12、24h组VEGF mRNA及蛋白表达量均高于假手术组,治疗6、12、24 h组VEGFmRNA及蛋白表达量均低于模型6、12、24 h组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:10％ HS可明显降低MCAO模型BBB通透性,减轻脑水肿,其作用机制可能与抑制VEGF的表达有关.
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大鼠急性脊髓完全性损伤后血脊膜屏障通透性的变化
目的:探讨大鼠急性脊髓完全性损伤后血脊膜屏障(blood-spinal cord barrier,BSCB)通透性的变化.方法:本研究选用wistar大鼠48只,制作Allen氏脊髓打击模型(打击当量300 gcf),随机分为对照组(n=6)和脊髓损伤组(n=42),后者又根据伤后不同时间点分为2、8、24、48、72 h以及1、2周组,每组6只,再分为A组和B组,每组各3只.A组从大鼠股静脉注射2%的伊文恩蓝(Evens blue,EB),通过荧光显微镜下观察:B组用干湿重法测定脊髓水肿变化情况.结果:随着脊髓损伤时间的延长,脊髓组织EB蓝染的范围逐渐增大,荧光光斑数量增加,强度增强,24～48 h达高峰,与脊髓组织内水肿时间一致,72 h后水肿逐渐减轻,其内开始出现坏死灶,1～2周可见明显大小不等的囊腔形成,未见EB蓝染.结论:脊髓损伤后BSCB的通透性增高,并在24～48 h达高峰,72 h后逐渐下降,1周后BSCB通透性明显减小.
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弓形虫速殖子死活快速鉴别的实验研究
目的 寻求快速鉴别弓形虫速殖子死活的染色方法.方法用0.1%伊文思蓝、0.4%台朌蓝和0.5%溴酚蓝三种染液分别对死、活弓形虫速殖子进行染色.结果前二种染液均能使死亡弓形虫速殖子在1min内着色,活虫则不着色;后一种染液能使活动弓形虫速殖子在1min内着色,死虫则不着色.结论 3种染液染色均可快速鉴别弓形虫速殖子死活.
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两种微泡造影剂开放大鼠血脑屏障的比较性研究
目的 探讨自制磷脂微泡和声诺维两种微泡对大鼠血脑屏障的影响.方法 将32只SD大鼠随机分为自制微泡即刻组、自制微泡24 h组、声诺维即刻组和声诺维24 h组,各组由尾静脉注射相应微泡后,在探头频率为1 MHz、声强4 W/cm2、辐照时间1.0 min参数下超声照射大鼠脑部,大体观察脑组织的蓝染程度及范围;伊文思蓝测定法观察大鼠血脑屏障通透性;光镜下观察脑组织、脑细胞和血脑屏障病理学改变.结果 声诺维24 h组大鼠脑组织蓝染程度及范围明显小于其他各组,脑组织通透性明显低于其他各组(P﹤0.05),HE染色各组未见大鼠脑组织损伤及血细胞渗出.结论 自制磷脂微泡开放大鼠血脑屏障效果与声诺维相比无明显差异,且自制微泡开放血脑屏障的效果更为稳定.
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伊文思蓝定量评估超声造影对鼠胎盘屏障通透性影响的实验研究
目的 探讨不同机械指数诊断性超声造影对胎盘屏障通透性的影响.方法 怀孕14～16 d(孕中期)清洁级SD鼠60只,经尾静脉注射剂量为1 ml/kg的"声诺维"超声造影剂,在不同机械指数下(MI:0.13,1.0,1.4)超声辐照孕鼠子宫,辐照时间(连续5 min,间歇10 s),分光光度法测定胎盘及胎鼠组织内伊文思蓝(EB)含量. 结果 不同机械指数下的超声造影,胎鼠组织内EB含量与对照组相比差异无统计学意义.结论 高机械指数及低机械指数诊断超声造影均不会导致孕鼠胎盘屏障通透性增加.
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大鼠蛛网膜下腔出血后血脑屏障通透性变化
目的 探讨大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性变化.方法 雌性SD大鼠80只,分为生理盐水对照组(NS组)和SAH组.采用经额叶底面蛛网膜下腔插管至Willis环注血法建立SAH模型,在SAH后6、12、24、36、48、60、72 h等不同时间点,应用荧光分光光度计和荧光显微镜方法分别检测大脑皮质BBB对伊文思蓝(Evans Blue, EB)的通透性,同时利用透射电镜观察BBB超微结构变化.结果 与NS组比较,大脑皮质EB含量和漏出量的大值均出现在SAH后36 h时(P＜0.05),于60 h时恢复至正常水平(P＞0.05).BBB超微结构改变在SAH后36 h时明显.结论 BBB通透性改变发生在SAH急性期,是由多种因素共同所致,而且SAH后BBB具有自我修复特性.
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两种不同开放血脑屏障方法的比较
目的 比较超声波诱导微泡破坏和甘露醇渗透性开放两种方法对大鼠血脑屏障通透性的影响.方法 大鼠分为2个实验组和1个对照组,1个实验组大鼠经股静脉注入微泡造影剂后,采用频率43 kHz、声强1.2 W/cm2的超声波经大鼠颅骨照射3 min;另1个实验组大鼠经颈内动脉注入20%甘露醇.干湿重法测定脑水含量,荧光显微镜观察伊文思蓝的渗出.结果 两种方法都可以可逆开放血脑屏障,利用超声波诱导微泡破坏法开放血脑屏障较甘露醇渗透性开放法局限且持久.结论 超声波诱导微泡造影剂破坏是一种无创和具靶向性开放血脑屏障的新方法.
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DDR1蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤引起血脑屏障破坏中的作用及机制
目的:探讨盘状结构域受体酪氨酸激酶(discoidin domain recetor 1,DDR1)蛋白在局灶性脑缺血致血脑屏障损伤中的作用机制及其病理性意义.方法:成年雄性SD大鼠80只,体重280 ～ 320 g,采用随机数字表法,将其随机分为假手术组、缺血再灌注组、siRNA处理组和siRNA错配组,每组5只.采用大鼠大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,缺血120 min再灌注24 h时进行神经行为学评分,随后处死大鼠取脑,分别采用TTC(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride)染色法、干湿比重法、伊文思蓝法测定脑梗死体积、脑组织含水量及血脑屏障的通透性.结果:与假手术组比较,脑缺血再灌注组神经行为学评分降低(P＜0.05),脑梗死体积百分比增加,缺血侧脑组织含水量增多(P＜0.05),血脑屏障的通透性增大(P＜0.01);与局灶性脑缺血再灌注组比较,DDR1-siRNA处理组神经行为学评分升高,脑梗死体积百分比减少,脑组织含水量减少(P＜0.05),血脑屏障通透性降低(P＜0.01).结论:DDR1蛋白可能参与了脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的破坏,抑制DDR1的表达可降低血脑屏障的通透性;另外,检测DDR1的表达可作为脑卒中早期诊断和判断预后的分子指标之一.
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脊髓挤压伤所致小胶质细胞的变化与血脊髓屏障的关系
为探讨脊髓损伤时血脊髓屏障的破坏和小胶质细胞被激活两者之间的关系,本实验用大鼠脊髓挤压伤模型进行了研究.将成年雄性SD大鼠64只,随机分为对照组及脊髓挤压伤后0 h.8 h、24 h.72 h、1 w、2 w.4 w等8组.分别以HE染色观察病理变化,小胶质特异性标记物OX-42的免疫荧光组化染色观察小胶质细胞,股静脉伊文思蓝注射观察血脊髓屏障的变化.结果显示,脊髓损伤面积在伤后8 h组明显扩大,72 h达顶峰,1w组时面积回缩并维持到实验后(4 w).在伤后24 h组可观察到活化的小胶质细胞,其后一部分迁移入损伤区内,吞噬坏死组织,变成巨噬细胞.至4 w时,HE染色切片上仍可在伤区内见到小胶质巨噬细胞.伤区外活化的小胶质细胞仍可见于伤后4 w.伊文思蓝不能通过正常的血脊髓屏障,脊髓挤压伤后即可进入脊髓,分布于损伤区及其邻近.至1w时脊髓内已无伊文思蓝,血脊髓屏障恢复正常.此现象与脊髓伤后活化的小胶质细胞长期存在的事实不一致.活化的小胶质细胞町损坏血脊髓屏障,血脊髓屏障在脊髓挤压伤后1 w已恢复,而活化的小胶质细胞却可在伤后长期存在,说明单纯激活的小胶质细胞不足以破坏血脊髓屏障.
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成年大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障通透性变化
为了观察脊髓挤压伤后血-脊髓屏障(BSCB)的通透性变化,本研究选用体重180～200 g成年雄性SD大鼠39只,随机分为对照组(n=3)和脊髓损伤组(n=6).后者又分为伤后0、8、24、72 h以及1周、2周等6组,每组6只,再分为A组、B组,每组各3只.脊髓损伤组A组的组织切片行H.E.染色,显微镜下观察脊髓损伤后的形态学变化.对照组和B组动物股静脉注射30g/L伊文思蓝,30 min后,以温生理盐水及4%多聚甲醛灌注动物,取出脊髓,行冰冻切片,荧光显微镜下观察.结果观察到,脊髓挤压伤术后72 h内,损伤区周围均可见伊文思蓝染色,至1周后损伤区周围未见伊文思蓝染色.本研究结果提示,脊髓损伤72 h内可能为有效给药时间窗,1周后给药,药物对脊髓损伤的治疗作用将难以达到治疗目的.
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芪灯明目胶囊对高血糖大鼠血视网膜屏障影响的研究
目的:观察链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠在造模后血-视网膜屏障(blood-retina barrier,BRB)变化情况,并以阳性药为对照研究中药芪灯明目胶囊对STZ诱发糖尿病大鼠的视网膜血管渗漏影响.方法:采用STZ腹腔注射制作糖尿病大鼠模型,在造模后6mo内各时点(2wk;1,2,3,4,5,6mo)采用伊文思蓝灌注示踪显示血-视网膜的渗漏情况,在造模后3mo开始用中药芪灯明目胶囊(低中高剂量组分别给予125,250,500mg/kg体质量剂量的胶囊内容物灌胃),对照组用安多明胶囊(200mg/kg体质量剂量,相当于10倍成人剂量),灌胃3mo,观察药物对 BRB的影响.结果:STZ糖尿病大鼠在2wk即可出现BRB的损害,并随着高血糖状态的持续而不断加重.对造模3mo STZ糖尿病模型大鼠连续灌胃中药芪灯治疗3mo,结果提示:中药芪灯对STZ糖尿病BRB有保护作用,可明显减少视网膜血管的渗漏.结论:STZ糖尿病模型大鼠在早期即可出现BRB损害,并随着高血糖的持续而加重,中药芪灯明目胶囊可减少高血糖导致的BRB损害.
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深Ⅱ°烫伤早期大鼠空肠P物质阳性神经与血管通透性的相关性变化
目的:研究深Ⅱ°烫伤后早期大鼠空肠P物质(SP)阳性神经变化与血管通透性变化,探讨其相关性.方法:运用免疫组化技术和改良伊文思蓝渗出法,分别观察和检测大鼠空肠SP阳性神经变化和血管通透性变化.结果:烫伤后1h大鼠空肠SP阳性神经密度达到高值,后明显下降,烫伤后4h～8h达到低值,随后逐渐恢复;烫伤后1h大鼠空肠血管通透性高,后缓慢下降,烫伤后8h～24h达到低值,而后略有升高,烫伤后72h接近正常值.深Ⅱ°烫伤后早期大鼠空肠SP阳性神经变化与血管通透性变化明显相关.结论:P物质是引起烫伤后早期血管通透性升高的重要介质之一.
