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参芪提取物对闭合性脑外伤作用的试验研究
目的:观察参芪提取物(SQE)对闭合性脑外伤的作用.方法:选用昆明种小鼠,随机分成模型组、脑复康(NFK)组(0.24 g·kg-1)、参芪提取物(SQE)高、中、低剂量组(0.282,0.141,0.071 g·kg-1,按公斤体重计,相当于人用量的20,10,5倍),并设正常组.采用自由落体法复制闭合性脑外伤小鼠模型,分别于造模后8,24 h测定耐缺氧时间、脑组织含水量、脑指数和血脑屏障(BBB)通透性.结果:参芪提取物能明显降低闭合性脑外伤模型小鼠脑组织含水量、脑指数和血脑屏障通透性,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05);明显提高模型小鼠耐缺氧时间,与模型组比较有显著性差异(P＜0.01).结论:参芪提取物(SQE)对小鼠闭合性脑外伤有一定的保护作用.
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黄连解毒汤及其各部位群抗炎物质基础
目的:研究黄连解毒汤(HLJDT)全方及其各部位群抗炎活性,讨论HLJDT抗炎活性的物质基础.方法:通过鼠毛细管通透性和二甲苯致炎实验,建立动物模型以及确定黄连解毒汤的有效剂量,并依据全方的有效剂量计算出各组分群的给药剂量.将动物随机分为空白组,模型组,地塞米松组,HLJDT全方组,HLJDT上清液50％醇,HLJDT沉淀水洗,沉淀50％醇洗组,按传统给药方式连续3dig给药.末次给药60 min后尾静脉注射伊文思蓝(EB),然后立即进行小鼠二甲苯致炎实验,结合高效液相色谱(H PLC)研究HLJDT全方及其各部位群抗炎作用,比较各组间差异.结果:地塞米松,HLJDT全方,上清液50％醇洗和沉淀50％醇洗均能有效降低模型组的肿胀度,与模型组比较有显著性差异(P＜0.01).HLJDT全方,上清液50％醇洗和沉淀50％醇洗部位群均能有效降低耳片中EB含量,抑制肿胀度,EB含量分别为(11.8±1.8),(23.4±3.8),(25.2±3.2) ng·g-1;肿胀度抑制率分别为26.44％,29.89％ ,19.54％;HLJDT上清液50％醇洗抗炎作用比沉淀50％醇洗作用显著.结论:H LJDT,上清液50％醇洗和沉淀50％醇洗均能有效降低模型组的肿胀度,结合HPLC结果可推断,黄酮与生物碱相互作用后,可以降低生物碱副作用,增加环烯醚萜类成分后,抗炎效果更显著,为抗炎有效部位.
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乌司他丁对脓毒症大鼠脑组织的保护作用
目的 观察乌司他丁对脓毒症大鼠血脑屏障及脑细胞凋亡的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠52只,随机(随机数字法)分为6组.假手术(Sham)6 h组、24h组,每组6只;脓毒症(CLP)及乌司他丁(UTI)6 h组、24h组,每组10只.Sham组只开腹后关腹,CLP组及UTI组用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症模型,UTI组建模后1h股静脉注射乌司他丁50 000U/kg,其他组注射等容量生理盐水.各组在建模后6h、24 h断脑取材,取材前进行神经功能缺损评分,取材后HE染色、称量脑干湿质量、伊文思蓝渗透法测定血脑屏障通透性,TUNEL免疫荧光检测脑细胞凋亡.应用SPSS 13.0软件统计学分析,多组比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 UTI组大鼠神经功能评分低于Sham组(P＜0.05),高于CLP组(P＜0.05).光镜下CLP组大鼠神经细胞变性、坏死、水肿较UTI组明显.CLP 24 h组大鼠血脑屏障通透性较UTI 24 h组显著升高(P＜0.05).CLP组大鼠脑细胞凋亡数较UTI组显著增多(P＜0.05).结论 乌司他丁通过减轻血脑屏障损伤,抑制脑细胞凋亡,对脓毒症大鼠脑组织起保护作用.
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脑超声造影中超声强度对血脑屏障通透性的影响
目的探讨不同机械指数的诊断性超声在超声造影中对血脑屏障通透性的影响,以了解脑超声造影检查中超声强度的安全应用范围.方法 50只清洁级SD大鼠,经尾静脉注射剂量为1 ml/kg的"脂氟显"超声造影剂,辅以不同机械指数的超声进行辐照,观察超声照射后血脑屏障通透性的变化.结果在MI等于0.4时,血脑屏障通透性与对照组相比无统计学差异,当MI≥0.8时,血脑屏障通透性增加,且随着超声能量的进一步提高血脑屏障的通透性增加.结论高机械指数的体表超声在超声造影中可导致血脑屏障通透性增加,但应用适当强度的超声在进行大脑超声造影时仍是安全的.
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诊断性超声造影对胎盘屏障通透性影响的实验研究
目的 探讨不同机械指数的诊断性超声造影对胎盘屏障通透性的影响,以了解超声造影检查中超声强度的安全性.方法 14～16 d(孕中期)清洁级SD孕鼠,经尾静脉注射剂量为1 ml/kg的"声诺维"超声造影剂,不同机械指数(MI:0.13、1.0、1.4)的超声对孕鼠子宫进行连续及间歇辐照,时间5 min,在荧光显微镜下观察胎盘及胎鼠组织伊文思蓝(Evans blue,EB)自发红色荧光情况.结果 诊断剂量超声造影,大体观察胎盘呈深蓝色,胎鼠呈半透明浅粉色.在荧光显微镜下,胎盘内可见明显的EB自发的红色荧光斑块,在胎鼠体内未见EB荧光显像.结论 高机械指数及低机械指数诊断性超声造影均不会导致孕鼠胎盘屏障通透性增加.
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低功率超声辐照微泡造影剂对大鼠前列腺内伊文思蓝浓度的影响
目的 探讨低功率超声辐照微泡造影剂提高前列腺内的药物浓度的价值.材料与方法 选取成年远交群(SD)雄性大鼠60只,按抽签法分为对照组、伊文思蓝(EB)组、微泡组、同时辐照组及先行辐照组,每组各12只.对照组给予生理盐水10 ml/kg;EB组给予EB 50 mg/kg;微泡组给予微泡造影剂0.1 ml/kg;同时辐照组先给予EB 50 mg/kg,超声辐照5 min后,再给予微泡造影剂0.1 ml/kg;先行辐照组给予微泡造影剂0.1 ml/kg后,超声局部间歇辐照前列腺5 min,30 min再给予EB 50 mg/kg.实验结束后取前列腺组织进行病理观察,并制备前列腺组织匀浆测量EB浓度.结果 EB组大鼠前列腺内EB浓度高于对照组及微泡组,差异有统计学意义(t=4.157、4.357,P＜0.01);同时辐照组大鼠前列腺内EB浓度高于EB组,差异有统计学意义(t=2.438,P＜0.05);先行辐照组大鼠前列腺内EB浓度明显低于同时辐照组,差异有统计学意义(t=2.761,P＜0.05);先行辐照组与EB组EB浓度差异无统计学意义(t=0.684,P＞0.05).结论 低功率超声联合微泡造影剂可以明显提高前列腺组织EB药物浓度.
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急性肝坏死小鼠血脑屏障通透性的改变
目的:探讨急性肝坏死动物血脑屏障通透性异常改变.方法:将280只6 Balb/c小鼠分为4组,应用内毒素(LPS,10 μg/kg)和D-氨基半乳糖(GalN,800 mg/kg)联合ip,建立急性肝坏死小鼠模型.并检测血清ALT,观察肝脏组织病理学变化,利用伊文思蓝研究小鼠血脑屏障通透性的改变情况.结果:单独应用LPS或GaIN仅使血清ALT轻度升高,动物无死亡.而联合应用后ALT则从6 h开始明显升高(41.89±14.57 μkat/L),到12h达高峰(170.30±16.13 μkat/L),较其他各组均有显著性差异(P＜0.01).动物从6 h开始死亡,9 h达高峰,总死亡率达66.6%.肝脏HE染色可见大块或亚大块出血性坏死,而其他组仅见单个或灶状肝细胞坏死,部分细胞脂肪变性.并且脑组织EB含量在各时间点均较其他组明显升高.结论:在急性肝坏死动物中存在血脑屏障通透性异常增加的改变,可能是引起脑水肿发生的重要机制.
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NOS在侧支血管生长中对血管VE-cadherin表达及通透性的影响
目的：探究氧化氮合酶（NOS）在侧支血管生长中对血管VE-cadherin表达及通透性的影响。方法选取40只成年SD（Sprague-Dawley）大鼠作为研究对象，采用随机数字表法分为正常组及研究组（股动脉结扎并腹腔注射NOS）各20只。采用苏木素-伊红染色法、伊文思蓝通透性实验观察两组大鼠侧支血管生长中血管VE-cadherin表达及通透性变化情况。结果研究组大鼠实施股动脉结扎诱导侧支血管生长并腹腔注射NOS存活1周后，其血管VE-cadherin表达（190.2±22.8），与正常组（169.5±15.5）相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；VE-cadherin通透性指标上，研究组伊文思蓝渗出量（37.5±5.8）ng/mg，与正常组（80.5±11.0）ng/mg相比较，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 NOS能够显著提高血管VE-cadherin表达，从而降低血管通透性以及阻断侧支血管炎症的形成与发展，对血管疾病的治疗具有重要应用价值，值得在临床中推广使用。
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大鼠烫伤后肠壁微血管通透性和肠组织含水量的变化
目的:观察大鼠烫伤后12h肠壁微血管通透性和肠组织含水量变化,探讨烫伤早期肠粘膜损伤的可能机制.方法:制作成年大鼠严重烫伤模型(Ⅲ度,30%TBSA),在未烫伤鼠及烫伤后12h应用分光光度法测量肠壁微血管通透性,测量回肠组织含水量.结果:对照组肠壁微血管对伊文思蓝有一定的通透性(12.39±5.062μg/g),烫伤后12h肠壁微血管对伊文思蓝通透性较对照组低(10.50±2.031μg/g),但无统计学意义(t=0.923,P>0.05);对照组回肠含水量为83.3±3.8%,烫伤后12h肠组织含水量比对照组稍低(82.9±1.5%),也无统计学意义(t=0.278,P>0.05).结论:烫伤早期肠壁微血管通透性和肠组织含水量无显著变化,提示炎症介质在烫伤早期肠粘膜损伤中可能不是主要致病因子.
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缝隙连接对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的影响
目的 探讨缝隙连接(GJ)在脑缺血再灌注血脑屏障通透性变化中的作用及其可能机制.方法 ①应用激光共聚焦显微镜技术观察GJ蛋白Cx43在缺血再灌注半暗带区脑毛细血管周终足上含量及分布情况的变化.②将Wistar大鼠随机分成假手术组,手术组.线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.通过荧光分光光度定量的方法测定不同时间点脑组织中的伊文蓝含量来观察血脑屏障的通透性的改变.③取伊文蓝漏出多的时间点,增设辛醇干预组和DMSO溶剂对照组,与相同时间点手术对照组比较,观察辛醇对血脑屏障通透性的影响.结果 缺血2 h再灌注3 h脑组织伊文蓝含量开始增加,再灌注24 h达高峰.激光共聚焦显微镜发现GJ蛋白Cx43在脑内毛细血管周围的星形胶质细胞终足上分布密集.在缺血2 h再灌注24 h半暗带内,终足上的Cx43分布发生变化,聚集成较大斑块.在缺血2 h再灌注24 h组术前给予辛醇干预,脑组织伊文蓝含量[(4.924±0.296)μg/g]低于手术对照组[(5.543±0.506)μg/g],二者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GJ在脑缺血再灌注后半暗带终足上分布变化明显,可能加重了血脑屏障通透性的增加;辛醇阻断GJ可以降低脑缺血再灌注血脑屏障的通透性,从而起到减轻脑水肿的作用.
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超压对大鼠血脑屏障结构损伤的实验研究
目的 探讨冲击波超压对大鼠血脑屏障(BBB)的影响.方法 雄性SD大鼠20只,随机分为爆后15min、12h、24h组和正常对照组,每组5只.应用爆炸冲击波致伤大鼠,采用伊文思蓝(EB)静脉注射,荧光显微镜下定性、脑组织伊文思蓝光密度计法定量观察BBB的开放情况.结果 在超压作用后15min大鼠全脑呈现广泛的BBB开放,EB荧光斑沿着毛细血管走行方向呈网纹状开放,越靠近皮层开放越明显;随超压作用时间的延长,荧光斑数量由内到外逐渐减少.脑组织伊文思蓝含量的变化过程与荧光显示BBB的改变相一致,15min组的脑组织EB含量为33.04±5.36mg/g,明显高于其他各组(P＜0.01).结论 超压可致大鼠全脑BBB广泛损伤,且此损伤是可逆的.
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慢性前列腺炎牵涉痛神经机制及其与膀胱、盆底肌的关系
目的寻找慢性前列腺炎牵涉痛的神经学证据及其与膀胱、盆底的关系.方法辣椒素刺激SD大鼠前列腺及膀胱,用伊文思蓝血管内注射,确定血浆外渗情况并分析其分布;用福尔马林分别刺激大鼠前列腺、膀胱、盆底,用原位杂交方法确定脊髓中P物质的分布及表达情况.结果对前列腺及膀胱的疼痛刺激均可导致L5～S2(主要集中于L5～S1)体表节段的血浆外渗;福尔马林刺激前列腺、膀胱及盆底后L6～S1脊髓节段内P物质的表达显著增强.结论前列腺牵涉疼痛是神经介导的,它与膀胱有着相似的体表牵涉痛范围.接受前列腺、膀胱及盆底的伤害刺激的脊髓感觉神经元可能有显著的互相重叠.前列腺、膀胱、盆底的病变可引起相似的疼痛感觉.
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伊文思蓝灌注染色技术在微波辐射致大鼠血脑屏障通透性改变中的应用
目的 应用伊文思蓝(EB)灌注法并结合脑组织EB含量测定,检测大鼠血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的变化,为研究微波辐射致大鼠BBB结构与功能的影响提供简便、快速、精确和灵敏的技术方法.方法 采用10、30和100 mW/cm2微波辐射55只雄性Wistar大鼠,分别于辐射后1、3和7 d活杀前0.5 h尾静脉注入 2%EB,脑组织冰冻切片应用共聚焦激光扫描显微镜下观察EB在大鼠海马BBB通透性变化,并采用化学比色法对脑组织中EB含量进行定量分析.结果 共聚焦激光扫描显微镜观察EB在405 nm波长激发状态下呈鲜艳明亮的红色荧光,正常脑组织中,EB仅局限于血管腔内,未见透过血管壁渗出至管腔外.10～100 mW/cm2微波辐射后3～7 d大鼠海马脑组织BBB通透性增加,脑组织中可见大小不一的光斑,边界模糊,呈片状,血管周围可见弥散的红色荧光;与假辐射组相比,辐射组于3～7 d内海马组织EB含量均明显升高.结论 应用伊文思蓝灌注后结合共聚焦显微镜观察和脑组织中EB含量的测定可准确检测微波辐射后BBB通透性的改变,值得推广应用.
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类透明质酸壳聚糖微乳对小鼠血脑屏障通透性的影响
目的研究类透明质酸壳聚糖微乳(HAC-ME)对血脑屏障开放的促进作用.方法采用甲酰胺提取-紫外分光光度法测定小鼠各脏器中伊文思蓝(EB)的浓度,考察HAC-ME对伊文思蓝在小鼠体内组织分布的影响;荧光显微镜观察脑组织切片中伊文思蓝的荧光强度和分布.结果与未修饰的微乳比较,低浓度的HAC(＜5 mg·mL-1)表面修饰微乳可进一步促进伊文思蓝透过血脑屏障,Tmax延后0.5 h左右,同时降低肝、肾组织中EB浓度.结论HAC-ME可显著增加血脑屏障的通透性,提高药物的脑趋向性,该作用与HAC的浓度有关.
关键词： 类透明质酸壳聚糖微乳 伊文思蓝 血脑屏障 -
糖尿病大鼠肺脏微循环通透性的变化及其意义
目的 观察实验性糖尿病大鼠肺脏微血管通透性的变化,为临床提供糖尿病肺病的形态学依据.方法 雄性SD大鼠共60只,体重(220±20)g,按65 mg/kg的剂量一次性腹腔注射链脲菌素(STZ)来制备糖尿病大鼠模型,在成模即刻(0周)、成模后2、4、8、12周时分别随机抽取12只,通过干湿重法、尾静脉注入伊文思蓝(EB)并心脏灌注后在分光光度计下测肺组织OD值以及荧光显微镜下测其荧光量来了解肺脏微血管的通透性.另随机抽取12只大鼠作为正常组.结果 ①与正常组比较,0周组、2周组糖尿病大鼠肺组织的干湿重稍有增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).而4周组、8周组和12周组糖尿病大鼠出现了组织干湿重明显增加,差异有统计学意义(P＜ 0.05).②与正常组相比较,0周组、2周组糖尿病大鼠肺组织EB含量稍有增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).从4周开始,糖尿病大鼠出现肺组织EB含量明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).③荧光显微镜下观察肺腑组织荧光量可见4、8、12周组大鼠肺脏组织出现较强的红色荧光.结论 糖尿病导致大鼠肺脏微血管通透性发生了变化.
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侗药血马鞭水提物对吡啶诱导的急性非感染咽喉炎大鼠的保护作用研究
[目的]在吡啶所致的急性非感染性咽炎大鼠模型上初步评价侗药血马鞭水提取物对咽喉炎的保护作用.[方法]SD大鼠被随机分为5组,包括吡啶+侗药血马鞭水提物低、高剂量组(500、1000 mg/kg,灌胃给药)、吡啶+地塞米松组(4 mg/kg,灌胃给药)、正常对照组、模型对照组.造模前,各组大鼠尾静脉注射无菌伊文思蓝溶液(EB),随后大鼠通过采用10％吡啶溶液涂抹咽喉部建立咽喉炎模型,正常对照组涂抹相同体积的无菌生理盐水.造模1 h后处死大鼠,观察大鼠咽部并拍照,同时对咽部组织EB渗出量进行测定.称量各组大鼠主要脏器质量,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠咽喉组织病理改变情况.[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠咽喉组织EB渗出显著增加、炎性细胞浸润明显增多、黏液腺细胞排列分散不规则且部分肥大破裂,并伴有组织出血.与模型组比较,侗药血马鞭水提物高剂量组大鼠和地塞米松组大鼠EB渗出明显降低(P<0.05),组织炎性细胞浸润显著减少.[结论]侗药血马鞭水提物对吡啶所诱导的急性非感染性咽炎大鼠有很好的保护作用.
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壳聚糖神经毒素纳米粒鼻腔给药对血脑屏障开放性的影响
目的 制备壳聚糖神经毒素纳米粒(CS-NT-NP),研究其鼻腔给药对大鼠血脑屏障(BBB)开放性及小鼠血清中S100β蛋白的影响.方法 采用甲酰胺提取-紫外分光光度法测定不同给药途径及不同神经毒素(NT)制剂给药后大鼠脑组织中伊文思蓝(EB)的浓度;荧光显微镜定性分析EB在脑组织中的荧光强度及分布;ELISA法测定不同NT制剂鼻腔给药后小鼠血清中S100β蛋白量的变化.结果 分别与壳聚糖(CS)组和NT水溶液组比较,CS-NT-NP能明显增加大鼠脑内EB浓度,有一定时效关系,且在120 min时达到高峰(P＜0.01);而鼻腔给药相较于ip和im给药,EB入脑量明显增加(P＜0.01),且达峰时间短,荧光检测结果表现出相同的趋势,CS-NT-NP鼻腔给药后不同时间小鼠血清S100β蛋白水平显著升高.结论 CS-NT-NP鼻腔给药能显著增加BBB的开放性,进一步提高脑内NT的浓度,壳聚糖纳米粒是大分子药物入脑的良好载体.
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人工胶体液对感染性休克犬血管通透性及血管内皮细胞生长因子的影响
目的 观察不同液体对感染性休克犬复苏后血管通透性、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探讨毛细血管渗漏综合征的发生机制及治疗措施.方法 采用肠穿孔腹膜炎法制备成年家犬感染性休克模型.将24只休克模型犬随机分为3组,制模成功后按20 ml·kg-1·h-1输入下列液体进行复苏,Ⅰ组为生理盐水;Ⅱ组为高渗盐水(体积分数为7.5%);Ⅲ组为中分子羟乙基淀粉(HES130/0.4),复苏成功后维持60 min.观察各组的用液量、复苏所需时间及停止复苏后维持时间;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆VEGF浓度.注射伊文思蓝(EB)30 min后处死动物,取肺脏观察肺组织病理学变化;并用免疫组化法观察VEGF蛋白表达情况;计算肺组织含水量,测定肺组织中的EB含量.结果 Ⅰ组用液量、复苏所需时间均显著高于其他组(P＜0.05或P＜0.01);Ⅲ组维持时间、肺组织含水量及EB含量均显著低于其他组(P＜0.05或P＜0.01).休克后血浆VEGF浓度较休克前显著升高,复苏后又明显降低,Ⅲ组复苏后2 h较其他组更为显著(P均＜0.05);复苏后各组肺组织切片VEGF表达较休克时减轻,Ⅲ组尤为明显.结论 与生理盐水、高渗盐水相比,HES130/0.4更有利于降低感染性休克犬的血管通透性,减轻肺水肿,降低VEGF.
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高同型半胱氨酸血症对大鼠血脑屏障的影响
目的:探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠血脑屏障损伤的作用机制.方法:通过高蛋氨酸饮食制备HHcy大鼠模型(HHcy组),并设普通饲料饲养大鼠做对照.实验初始及24周末检测2组大鼠血浆总同型半胱氨酸(tHcy)及血清一氧化氮(NO),第24周末检测2组大鼠脑组织伊文思蓝含量及脑组织含水量,利用透射电镜观察血脑屏障超微结构.结果:HHcy组与对照组实验初始及第24周末血浆tHcy分别为(13.19±3.10)μmol/L、(13.37±3.18)μmol/L,(P>0.05)及(22.51±4.47)μmol/L、(13.92±4.16)μmol/L(P<0.05).2组实验初始及第24周末血清NO分别为(28.44±8.86)μmol/L、(27.11±7.81)μmol/L(P>0.05)及(12.74±5.73)μmol/L(27.13±5.85)μmol/L(P<0.05).第24周末HHcy组与对照组脑组织伊文思蓝含量及脑组织含水量分别为(7.37±1.07)μg/g、(5.90±0.46)μg/g及(78.10±0.31)%、(74.93±0.28)%(均P<0.05).电镜示对照组血脑屏障结构正常,HHcy组脑血管内皮细胞结构欠清晰,基膜局部不规则增厚等变化.结论:HHcy可造成大鼠血脑屏障损伤,推测其机制与一氧化氮活性降低致血管内皮损伤有关.
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光化学法诱导建立大鼠局灶性脑梗死模型的效果评价
①目的 评价光化学法诱导建立大鼠局灶性脑梗死模型的效果.②方法 雄性westar大鼠105只,随机分为模型组、假手术组,取4h、12h、1d、3d、5d为观察时间点.通过行为学评分、HE染色、MRI扫描及伊文思蓝渗出量评价大鼠脑皮质局灶性脑梗死模型的效果.③结果 与对照组比较,模型组大鼠出现不同程度的神经功能缺失(P＜0.05);HE染色可见大脑皮质脑梗死改变; MRI可见皮质脑梗死的信号改变;伊文思蓝染色可见梗死区血脑屏障破坏,伊文思蓝渗出量高于假手术组(P＜0.05),并且以4h渗出量增多,1d达高峰,以后逐渐减少.④结论 光化学法制备局灶性脑梗死模型梗死效果肯定、简便、可重复性高,动物病死率低,接近人类局灶性脑梗死类型.
