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去氢木香内酯对实验性大鼠肝损伤的保护作用
目的:研究去氢木香内酯对大鼠肝损伤模型的保护作用。方法:以氨基半乳糖、四氯化碳建立大鼠肝损伤模型,分别设正常对照组、模型组、阳性药对照组(0.2 mg/kg)、去氢木香内酯高、中、低剂量组(45 mg/kg,15 mg/kg,5 mg/kg),测定各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、天门冬酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase, AST)活性及肝组织中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量。另以 HE、Masson 染色,对各组大鼠肝脏作病理检查。结果:与模型组相比,去氢木香内酯可显著降低大鼠血清 ALT、AST 的活性及 MDA 的含量(P <0.05),减轻大鼠肝脏坏死性病理改变。结论:去氢木香内酯对大鼠肝脏损伤有较好的保护作用。
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清肝浸膏对D-氨基半乳糖所致大鼠肝损伤模型的保护作用
目的:研究清肝浸膏对D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导的大鼠肝损伤模型的保护作用.方法:采用D-GalN引发大鼠的急性肝损伤模型,观察转氨酶及谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量的变化.结果:清肝浸膏能明显降低血清中AST的含量及肝组织中MDA的含量,并能升高GSH和SOD的含量.结论:清肝浸膏对D-GalN所致的大鼠肝损伤模型有一定的保护作用,其作用机制可能与抗氧化有关,具体机制还须进一步的实验研究.
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中药863对大鼠D-氨基半乳糖肝损伤保护作用的定量组织化学研究
药863是我们以清热利湿解毒为主,辅以舒肝健脾,活血化瘀为治则,结合现代科学对保肝中药的研究成果而组成的方剂.为判定该方剂的保肝作用并探讨其作用机理,本实验用国产D-氨基半乳糖做成肝炎动物模型,用组织学和组织化学方法观察和分析了所用方剂对D-氨基半乳糖肝损伤的保护作用,并用图象分析仪和Micro-videomat对组织化学染色结果进行了原位定量分析,以期获得可靠的生物参数依据.
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水飞蓟宾对小鼠急性肝损伤的保护作用
目的:研究水飞蓟宾对四氯化碳(carbon tetrachlitied,CCl4)与D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-Gal)所致的急性肝损伤的保护作用.方法:分别取健康昆明种小鼠84只,随机分为6组,即正常组、急性肝损伤模型组、水飞蓟宾低、中、高剂量组、阳性药组,除正常组外,分别ip0.2% CC14和800 mg· kg-1D-Gal,造模后1,6h这2个时间点,尾静脉注射不同剂量的水飞蓟宾(120,240,480 mg·kg-1),CCl4所致的急性肝损伤给予阳性药硫普罗宁(40 mg·kg-1),D-Gal所致的肝损伤给予甘草酸二铵组(30 mg·kg-1);造模24 h后,检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),谷氨酸氨基转移酶(ALT)水平及肝组织匀浆中超氧化歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),还原型谷胱甘肽(GSH)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织切片的病理变化.结果:与正常组比较,CCl4和D-Gal所致的急性肝损伤模型中AST,ALT,MDA的水平明显升高(P<0.01),SOD,GSH的水平明显降低(P<0.01);与CCl4,D-Gal所致的急性肝损伤模型组比较,水飞蓟宾低、中、高3个剂量组明显降低AST,ALT和MDA的水平及升高SOD,GSH的水平(P<0.01).肝脏的病理切片结果显示,模型组肝细胞明显的坏死、变性等病变,水飞蓟宾给药后肝小叶结构尚完整,肝细胞未见明显病灶.结论:水飞蓟宾对CCl4和D-Gal所致的小鼠急性肝损伤具有良好的保护作用.
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新疆紫草提取物对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用
新疆紫草Arnebia euchroma(Royle)Johst.又名新疆软紫草、新藏假紫草,属紫草科Boraginaceae多年生草本植物,是《中国药典》收录的3种紫草科植物之一.紫草的有效成分主要为2大类[1,2]:一类是脂溶性很强的萘醌类色素,包括紫草素(shikonin),乙酰紫草素(acetyl shikonin),β-羟基异戊酰紫草素(β-hydroxyisovaleryl shikonin),β,β'-二甲基丙烯酰紫草素(β,β'-dimethylacryl shikonin),去氧紫草素(deoxy shikonin)等.另一类是水溶性成分,主要为多糖和酚酸类等.现代药理实验表明,它们具有多种生理活性,主要是杀菌抗病毒、抗炎、抗肿瘤、保肝以及免疫调节等作用[3-6].为阐明新疆紫草的药理活性,在以往研究的基础上,用新疆紫草的不同提取物(脂溶性提取物AEJ-Ⅰ、水溶性提取物AEJ-Ⅱ)对D-氨基半乳糖(D-GalN)所致小鼠急性肝损伤模型进行了研究,以探明其保肝作用,旨在为新疆紫草的进一步开发研究提供实验依据.
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当飞利肝宁对实验大鼠酒精性肝损伤防治作用的实验研究
当飞利肝宁胶囊是以天然植物当药的提取物和水飞蓟素配伍而成的中成药,具有清热利湿,退黄解毒之功效,临床多年用于治疗急、慢性肝炎、黄疸性肝炎及脂肪肝.有报道表明,该药有效成份对CCL4,D-氨基半乳糖及大剂量扑热息痛所致的小鼠丙氨酸转氨酶的升高有明显的降低作用.对肝细胞膜具有稳定作用,能保护肝细胞,防止或减轻肝细胞损伤.本实验拟观察当飞利肝宁对大鼠酒精性肝损伤的防治作用.
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同种肝细胞脾内移植治疗大鼠肝衰竭的实验研究
目的:探讨经脾内同种异体移植培养的原代肝细胞与肝细胞悬液治疗大鼠药物性肝衰竭的疗效,并观察脾内移植肝细胞的生物学特性.方法:采用D-氨基半乳糖(D-gal)建立大鼠急性肝衰竭模型,24h后随机分为3组进行治疗,Ⅰ组:经脾内移植体外培养3d的肝细胞2×107;Ⅱ组:经脾内移植预孵育8h的肝细胞悬液2×107;Ⅲ组:经脾内注射生理盐水1 mL.观察受体大鼠的存活率、肝脏功能和病理变化及移植肝细胞的生物学特性.结果:Ⅰ组、Ⅱ组大鼠存活率(78%,71%)与Ⅲ组大鼠存活率(23%)相比具有显著性差异(P<0.01,P<0.05),肝功能各项指标均有明显改善,肝组织病理改变较轻.而Ⅰ,Ⅱ组大鼠的存活率、肝功能改变方面,没有统计学差异.经HE和PAS染色证实,移植的肝细胞在受体脾内结构和功能保持较好.结论:经脾内移植的培养肝细胞和肝细胞悬液均能提高大鼠药物性肝衰竭的存活率、改善肝功能及肝脏组织病理变化.而培养肝细胞与细胞悬液相比,统计学上没有明显差异,但结果显示培养肝细胞仍具有一定的优越性.
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肿瘤坏死因子-α及一氧化氮对暴发性肝衰竭肝损伤的作用
目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)及一氧化氮(nitric oxide,NO)在暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure,FHF)中对肝损伤的作用及相互关系.方法:采用脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)构建FHF小鼠模型,采用ELtSA方法和RT-PCR法检测血清TNF-α水平及肝组织TNF-αmRNA表达,采用硝酸还原酶法和RT-PCR法检测血清NO水平及肝组织iNOSmRNA,在小鼠用药后不同时期动态观察TNF-α、NO及肝损伤的变化,并对模型鼠分别给予TNF-α单抗和NO合成酶抑制剂L-NMMA,动态观察上述指标的变化.结果:在FHF小鼠中,用药后2~4h肝组织TNF-αmRNA表达显著增加(0.91±0.75→0.82±0.08,P<O.01),伴血清TNF-α水平升高,给予TNF-α单抗后可阻断LPSD-GalN介导的肝损伤,用药后4~8 h肝组织iNOSmRNA表达及血清NO水平亦显著升高(0.87±0.08→0.85±0.08,P<0.01),给予L-NMMA后使肝损伤反而加重.FHF小鼠用药后8~12 h血清总胆红素(TBiL)和ALT明显异常,肝组织切片可见肝组织大块状出血和坏死.结论:在LPS/D-GalN所致的FHF中,TNF-α的产生与肝损伤成正相关,而NO在此模型中似有保肝和肝损伤的双重作用,TNF-α和NO在FHF模型鼠的肝损伤中起协同作用.
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急性肝坏死小鼠血脑屏障通透性的改变
目的:探讨急性肝坏死动物血脑屏障通透性异常改变.方法:将280只6 Balb/c小鼠分为4组,应用内毒素(LPS,10 μg/kg)和D-氨基半乳糖(GalN,800 mg/kg)联合ip,建立急性肝坏死小鼠模型.并检测血清ALT,观察肝脏组织病理学变化,利用伊文思蓝研究小鼠血脑屏障通透性的改变情况.结果:单独应用LPS或GaIN仅使血清ALT轻度升高,动物无死亡.而联合应用后ALT则从6 h开始明显升高(41.89±14.57 μkat/L),到12h达高峰(170.30±16.13 μkat/L),较其他各组均有显著性差异(P<0.01).动物从6 h开始死亡,9 h达高峰,总死亡率达66.6%.肝脏HE染色可见大块或亚大块出血性坏死,而其他组仅见单个或灶状肝细胞坏死,部分细胞脂肪变性.并且脑组织EB含量在各时间点均较其他组明显升高.结论:在急性肝坏死动物中存在血脑屏障通透性异常增加的改变,可能是引起脑水肿发生的重要机制.
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促肝细胞生长素对急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67表达的影响
目的:观察促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factors,pHGF)对急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67表达的影响,探讨肝细胞再生的规律.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-GalN)组和D-GalN+pHGF组,以D-GalN 1.2 g/kg腹腔注射制备大鼠急性肝功能衰竭模型,2 h后D-GalN+pHGF组大鼠每24 h腹腔注射pHGF 2 mg/kg,并分别于第1、3、5、7、9、11、13、15 d处死各组大鼠6只.如果该时间点前每组有濒死大鼠则提前处死,使每组各时间点处死大鼠总数为6只.采用S-P免疫组织化学法检测肝组织中Ki-67的表达.结果:D-GalN组大鼠肝组织Ki-67标记指数(Ki-67 labeling index,Ki-67-LI)在模型建立成功后第5 d达峰值,以后急剧下降,在第15 d时达到正常对照组水平,但DGalN+pHGF组大鼠Ki-67-LI峰值于第3 d出现,比D-GalN组早,持续时间长,且各时间点的Ki-67-LI均明显高于D-GalN组,在第15 d时仍未降至正常对照组水平,与之相比,明显升高(P<0.01).D-GalN组及D-GalN+pHGF组肝细胞数量逐渐增多,但除第1 d外,D-GalN+pHGF组各时间点肝细胞数量明显高于D-GalN组(P<0.01).结论:急性肝功能衰竭时,残存的肝细胞仍有再生能力,但其再生过程受到抑制.pHGF可以提高急性肝功能衰竭大鼠肝组织Ki-67的表达,从而促进肝细胞的再生,但其再生程度同样受到一定程度的抑制.
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鼠暴发性肝衰竭中Fas表达与肝细胞凋亡的关系
目的:研究Fas表达及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)在暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure,FHF)中与肝细胞凋亡的关系.方法:采用脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合用药制备FHF小鼠模型;采用免疫组化方法检测肝组织Fas表达,分别采用ELISA方法和RT-PCR法检测血清TNF-α水平及肝组织TNF-αmRNA表达;采用肝组织DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL法检测肝细胞凋亡;在用药后2,4,8,12 h的不同时期动态观察Fas表达、血清TNF-α水平及肝组织TNF-α mRNA表达及肝细胞凋亡的变化,并对模型鼠给予TNF-α mAb,动态观察上述指标的变化.结果:在FHF模型小鼠中,用药后2 h开始Fas有少量表达,至8 h和12 h表达均很多,二者比较无显著差异,与2 h组比较P<0.01,与4 h组比较P<0.05.用药后2-4 h肝组织TNF-αmRNA表达显著增加(0.91±0.75,正常值为0.32±0.10),伴血清TNF-α水平升高(320±87 ng/L,正常值为17±7 ng/L),8 h可出现典型的肝细胞凋亡表现,血清ALT和TBil水平显著增加(分别为9352±1 000nkat/L和163.7±34.5 μmoL/L,正常值分别为393±134 nkat/L和14.9±4.8 μmoL/L),12 h肝细胞坏死和凋亡同时存在,血清ALT和TBil水平达高峰(分别为11141±1312nkat/L和203.2±19.9lμmoL/L).给予TNF-αmAb LPS/D-GalN介导的肝细胞凋亡和损伤被阻断,Fas表达亦被阻断.结论:在F-F中,TNF-α对肝细胞凋亡及肝损伤起重要的作用,肝细胞凋亡的发生与Fas的表达增加有关.
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实验性肝损伤小鼠血清IL-18、NO的检测意义及异甘草酸镁对其的影响
研究表明,白细胞介素-18(IL-18)和一氧化氮(NO)在肝损伤中发挥重要的作用,笔者以昆明种ICR小鼠为实验对象,用D-氨基半乳糖(D-GalN)建立急性肝损伤动物模型,通过检测IL-18及NO血清浓度变化,探讨二者与肝损伤的关系,同时应用异甘草酸镁观察对IL-18和NO水平的影响,探讨其对肝损伤的保护作用.
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双环醇保肝的基础与临床研究进展
一、基础研究1.双环醇能够稳定肝细胞膜的完整性及其显著的肝细胞保护作用:(1)双环醇对急性实验性肝损伤动物模型的保护作用[1-3]:分别以四氯化碳、对乙酰氨基酚和D-氨基半乳糖3种化合物损伤小鼠肝脏,实验中给小鼠灌服不同剂量的双环醇.结果显示血清ALT和AST显著降低,有明显的剂量-效应关系,同时肝组织形态学损伤明显降低,片状坏死明显减轻、炎症和脂肪变性减轻;
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石见穿多糖对脂多糖和D-氨基半乳糖胺联合诱导小鼠急性肝衰竭的保护作用
目的 研究石见穿多糖(PSSC)对脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖胺(GaIN)诱导小鼠急性肝衰竭(ALF)的保护作用及可能机制.方法 将昆明小鼠随机分为正常组、模型组、PSSC 30和100 mg·kg-1给药组.给药组每日1次,连续给药1周.给药结束后,除正常组外,其余各组ip给予LPS 10μg·kg-1和GalN 700 mg·kg-1,制备小鼠ALF模型.HE染色法检测肝组织病理变化;用试剂盒法检测血清谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)及肝过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平;DCFH-DA荧光探针法检测肝组织活性氧(ROS)的相对含量;ELISA法测定血清及肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的含量;胱天蛋白酶3活性测试试剂盒检测小鼠肝组织匀浆中胱天蛋白酶3的活性.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠肝细胞排列杂乱,胞质皱缩,细胞边界模糊,可见较大量的炎症细胞浸润和明显的肝组织内出血,病理评分明显升高(P<0.01);MDA和ROS含量分别升高至正常对照组的2.2倍和4.3倍(P<0.01),GSH含量下降至51%(P<0.01),抗氧化酶SOD,CAT和GSH-Px的活性分别降低至74%,36%和42%(P<0.01),TNF-α,IL-1β和IL-6的水平有明显提高(P<0.01),胱天蛋白酶3活性升高至正常对照组的5.3倍(P<0.01).与模型组相比,PSSC组小鼠存活比例明显升高(P<0.01);小鼠肝组织病理评分降低(P<0.01);MDA和ROS含量升高(P<0.01),GSH含量下降(P<0.01);TNF-α,IL-1β和IL-6的含量降低(P<0.01);胱天蛋白酶3活性降低(P<0.01).结论 PSSC对LPS和GalN联合诱导的小鼠ALF具有良好的缓解作用,该作用可能与降低肝氧化应激、抑制肝炎症反应和细胞凋亡相关.
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硫酸软骨素分析方法研究近况
硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)是由动物喉骨、鼻中骨、气管等软骨组织中提取制备的粘多糖类药物,是由长短不一的D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖构成的双糖结构单元组成,在酸性条件下能水解产生葡萄糖醛酸和氨基己糖.
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APA微囊猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验研究
目的探讨APA微囊猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的有效性.方法用胶原酶灌注分离猪肝细胞,用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)包埋肝细胞,测定肝细胞产量和存活率.用氨基半乳糖诱导建立大鼠急性肝功能衰竭(fulminate hepahc failure,FHF)模型(n=68),实验动物分为微囊肝细胞植入组、游离肝细胞植入组、空囊组、对照组4组.分别将微囊肝细胞、游离肝细胞、空微囊、生理盐水植入或注入FHF大鼠腹腔,观察治疗效果.结果分离肝细胞产量为1.74×1010~2.90×1010个,微囊肝细胞存活率>80%.APA微囊肝细胞组与游离肝细胞、空囊和对照组相比,能提高FHF大鼠存活率,延长存活时间,改善肝功能.结论APA微囊猪肝细胞腹腔移植治疗FHF大鼠有较好疗效.
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海参糖胺聚糖抑制血管内皮细胞纤溶酶原活化抑制物-1的表达
海参糖胺聚糖(holothuria glycosaminoglcan, hGAG)是从玉足海参体壁中提取的一种含岩藻糖的糖胺聚糖.它含有氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖等[1,2].临床和动物研究表明,hGAG具有抗凝、降低血粘度、降低血脂等作用[3,4].
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清化凉血化瘀方对急性肝衰竭大鼠生存率及生化指标的影响
目的:观察清化凉血化瘀方对急性肝衰竭大鼠肝功能和累积生存率的影响。方法将160只大鼠随机分为空白组20只、模型组35只、西药组35只、中药组35只、中西医结合组35只,西药组和中西医结合组予复方甘草酸苷溶液灌胃,中药组予清化凉血化瘀方灌胃,空白组与模型组予灭菌蒸馏水灌胃。灌胃3d后,除空白组外,其余组均腹腔注射纯D-氨基半乳糖(D-Gal)800 mg/kg、内毒素脂多糖(LPS)8μg/kg制造急性肝衰竭模型,造模后西药组和中药组再分别给予相应药物灌胃1次,中西医结合组予清化凉血化瘀方灌胃1次。造模24 h后,将每组大鼠再随机分为A、B 2个亚组,空白组2个亚组均为10只,其余每组中A组20只,B组15只,处死每组中A组大鼠,采集血清,检测肝功能、凝血功能;每组中B组大鼠观察至96 h,统计大鼠累积生存率及生存时间。结果模型组大鼠血清ALT、AST、TBil、CHE水平及血浆PT均明显高于空白组(P均<0.05),ALB明显低于空白组(P<0.05);各给药组大鼠血清ALT、AST、TBil、CHE水平及血浆PT均明显低于模型组(P均<0.05),ALB均明显高于模型组(P均<0.05);中西医结合组和西药组ALT、AST水平均明显低于中药组(P均<0.05),ALB水平均明显高于中药组(P均<0.05),且中西医结合组ALB水平明显高于西药组(P均<0.05);中西医结合组TBil、CHE水平及血浆PT明显低于中药组及西药组(P均<0.05),西药组CHE水平明显低于中药组(P均<0.05)。各给药组大鼠存活率均明显高于模型组(P均<0.05),但各给药组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。各组生存时间比较差异均有统计学意义(P均<0.05);中西医结合组生存时间明显长于模型组(P<0.05)。结论清化凉血化瘀方联合复方甘草酸苷可改善肝衰竭大鼠的肝功能及凝血功能,提高大鼠累积生存率,延长大鼠生存时间。
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中医酒疸证动物模型造模药物的筛选研究
目的::建立一种符合中医酒疸证的实验动物模型。方法:以历代医家对中医酒疸证的论述为蓝本,通过深入分析中医酒疸证形成的机理,在充分考虑中医证候动物模型的症状、病因、治疗、相关因素和客观指标五方面临床诊断依据的基础上,采用高脂饮食并自由饮用乙醇的方法造成大鼠脾胃虚弱,再分别以四氯化碳、氨基半乳糖、α-萘异硫氰酸酯诱导大鼠肝损伤。通过观察大鼠的一般生物学状态和生化指标,对四氯化碳、氨基半乳糖、α-萘异硫氰酸酯三种化学造模药物进行筛选,确定能够模拟中医酒疸证形成机理的造模因素组合,建立符合酒疸证证候特点的动物模型。结论:选取乙醇、α-萘异硫氰酸酯作为中医酒疸证动物模型的造模药物。
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NHE-1与肝纤维化的关系及姜黄素的影响
姜黄素(Curcumin,CUR)是从中药姜黄中提取的一种酚类色素,其对四氯化碳、D-氨基半乳糖及卡介苗加脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤有保护作用,对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化有治疗作用,可显著抑制肝星形细胞(HSC)的增殖和分泌细胞外基质,并诱导其凋亡[1-3].本研究观察肝纤维化大鼠肝脏Na+/H-交换泵(NHE)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、ERK-1、NF-κB表达关系及姜黄素的影响,探讨姜黄素对肝纤维化的作用.