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竹节参醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用
目的:观察竹节参醇提物对脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步探讨.方法:用不同质量浓度的竹节参醇提物处理RAW264.7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;检测LPS刺激的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)释放量以及竹节参醇提物干预后RAW264.7细胞NO释放量;酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)分泌;聚合酶链反应(PCR)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达;免疫印迹(Westernblot)法检测胞浆胞核核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达.结果:竹节参醇提物作用RAW264.7细胞的安全范围＜100 mg·L-1;LPS的用药质量浓度为1mg·L-1;与LPS模型组相比,竹节参醇提物0.1,1,10,40 mg·L-1能有效抑制NO释放(抑制率分别为31.2％,41％,46.1％,55.2％)和抑制TNF-α,IL-1β的分泌(P＜0.05或P＜0.01);竹节参醇提物10,40 mg·L-1能下调LPS模型组iNOS mRNA表达且抑制NF-κB的核移位.结论:竹节参醇提物对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有保护作用,其保护机制可能与调控NF-κB通路,进而抑制NO的释放,降低TNF-α,IL-1β,iNOS表达有关.
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竹节参醇提物免疫佐剂作用的实验研究
目的 采用高效液相色谱法(HPLC)筛选竹节参醇提物中佳免疫佐剂活性部位,进而探讨此有效部位作为HBsAg佐剂的作用及可能机制.方法 通过HPLC初步分离和分析竹节参醇提物,MTT法检测不同浓度乙醇洗脱的竹节参皂苷中佳佐剂活性部位,将此部位与HBsAg共同注入到雌性Balb/c小鼠体内进行免疫,小鼠随机分为正常对照组,HBsAg模型组和(HBsAg+竹节参醇提物)低(300μg)、高剂量(600μ g)组,末次免疫7d后收集小鼠淋巴细胞并采集血清,CCK-8检测脾淋巴细胞增殖情况;间接ELISA法检测小鼠血清中抗体滴度;RT-PCR法检测脾淋巴细胞中相关细胞因子的表达;流式细胞仪检测细胞表面蛋白的表达.结果 竹节参醇提物显著促进淋巴细胞的增殖,60％浓度的醇过大孔树脂所得竹节参皂苷对淋巴细胞的增殖显著(P＜0.01);显著增强小鼠血清中抗HBsAg的IgG、IgG1和IgG2b亚型抗体滴度;上调细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10的表达;增强TLR4受体的表达.结论 竹节参醇提物中60％乙醇提取物具有较强的免疫佐剂作用,作为HBsAg抗原佐剂是通过活化TLR4受体来发挥作用的.
