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脉络宁针剂致敏RBL-2H3细胞的实验研究
目的:通过研究临床含有绿原酸的中药注射剂脉络宁针剂对RBL-2H3细胞(大鼠嗜碱性白血病细胞系)脱颗粒、释放介质的影响,探讨绿原酸与中药注射剂发生严重过敏反应的关系,为临床安全用药提供依据.方法:以含有绿原酸的中药针剂脉络宁为研究对象,以不含绿原酸的葛根素针剂为阴性对照,以绿原酸对照品为阳性对照,通过对体外培养RBL-2H3细胞模型的作用,观察该细胞模型发生脱颗粒反应和细胞形态变化,检测β-己糖胺酶释放量.结果:脉络宁、绿原酸组可显著引起RBL-2H3细胞释放β-己糖胺酶(P＜0.05)；葛根素注射液组能不同程度促进β-己糖胺酶的释放.结论:脉络宁组可显著引起RBL-2H3细胞释放β-己糖胺酶,提示绿原酸与中药注射剂脉络宁发生严重过敏反应有密切关系.
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粉尘螨过敏原β-己糖胺酶的表达、纯化和生物信息学分析
合成粉尘螨β-己糖胺酶基因并连接至pET-28a载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组β-己糖胺酶蛋白.通过生物信息学软件分析粉尘螨β-己糖胺酶蛋白基本特性.表达菌经诱导后,高效表达出β-己糖胺酶蛋白,SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量(Mr)约为55 000.粉尘螨β-己糖胺酶基因序列全长1 410 bp,编码469个氨基酸,位于胞外,无信号肽,属亲水性蛋白,其二级结构由14.71％的片层,30.70％的螺旋和54.58％的环组成.
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资木瓜总苷对大鼠嗜碱性白血病-2H3肥大细胞脱颗粒的作用?
目的：研究资木瓜总苷对大鼠嗜碱性白血病-2H3( RBL-2H3)肥大细胞脱颗粒释放β-己糖胺酶的影响。方法培养大鼠来源的RBL-2H3细胞，资木瓜总苷与RBL-2H3细胞共培养，噻唑蓝( MTT)法检测资木瓜总苷对肥大细胞的毒性作用，用荧光分光光度法定量检测RBL-2H3细胞释放的β-己糖胺酶量，计算其释放率，ELISA法检测细胞上清液肿瘤坏死因子( TNF)-α的释放量。结果资木瓜总苷与不同抗原刺激的RBL-2H3细胞作用后，细胞的β-己糖胺酶释放率及TNF-α与对照组相比均显著降低。结论资木瓜总苷可抑制RBL-2H3细胞脱颗粒，并存在着明显的量效关系，为研究抑制变态反应发生的机制提供了一定的依据。
关键词： 资木瓜总苷 嗜碱性白血病-2H3 大鼠 β-己糖胺酶 肿瘤坏死因子 -
资木瓜总苷抑制RBL-2H3细胞脱颗粒及其机制研究
目的 研究资木瓜总苷对RBL-2H3肥大细胞脱颗粒的影响及其作用机制.方法 培养大鼠来源的RBL-2H3肥大细胞,资木瓜总苷与RBL-2H3细胞共培养,MTT检测资木瓜总苷对肥大细胞的毒性作用,用荧光分光光度法定量检测RBL-2H3细胞释放的β-己糖胺酶量,计算其释放率,ELISA检测细胞上清TNF-α的释放,流式细胞术检测细胞表面高亲和力IgE受体FcεRIα的表达,Western blot检测胞内信号Lyn/P-Lyn、PLCγ1/P-PLCγ1的表达.结果 与空白对照组相比,资木瓜总苷可显著降低β-己糖胺酶释放率以及TNF-α释放量,降低肥大细胞表面FcεRIα表达,减弱肥大细胞Lyn和PLCγ1磷酸化水平.结论 资木瓜总苷可显著抑制RBL-2H3肥大细胞脱颗粒,并存在着明显的量效关系,其作用机制可能是通过IgE-FcεRIα-Lyn-PLCγ1通路抑制肥大细胞活化脱颗粒.
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资木瓜总苷抑制体外培养的原代小鼠骨髓源性肥大细胞脱颗粒
目的 研究资木瓜总苷对小鼠骨髓来源的肥大细胞(BMMC)脱颗粒影响.方法 从C57 BL/6小鼠股骨获得骨髓细胞,用含100 mL/L胎牛血清、20 ng/mL IL-3和40 ng/mL干细胞因子(SCF)的RPMI1640培养基,培养4周;流式细胞术检测CD117、FcεRIα双阳性细胞的比例,甲苯胺蓝染色法观察细胞的成熟度.资木瓜总苷与诱导成功的BMMC共培养,CCK-8法检测资木瓜总苷对BMMC的毒性作用,荧光分光光度法定量检测β-己糖胺酶释放量,并计算其释放率,ELISA检测类胰蛋白酶释放量.结果 原代培养诱导4周后,CD117和FcεRIα双阳性细胞比例大于95％,且核被染蓝色,胞质为紫红色,呈现肥大细胞特性.(0.01、0.03、0.10) mg/mL的资木瓜总苷作用12 h,对BMMC无毒性作用.与空白对照组相比,资木瓜总苷与交联牛血清白蛋白的二硝基苯半抗原(DNP-BSA)、A23187刺激的BMMC作用后,细胞的β-己糖胺酶释放率和类胰蛋白酶的释放量均显著降低.结论 资木瓜总苷对不同抗原刺激原代培养的小鼠BMMC脱颗粒具有显著抑制作用,且存在量效关系.
