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miR-9前体分子抑制食管癌细胞株TE6中NF-κB1的研究
目的:探讨micro RNA-9(miR-9)前体分子对食管癌细胞株TE6中NF-κB1表达的影响.方法:RT-PCR分析miR-9前体分子对食管癌细胞株TE6中NF-κB1mRNA表达.Western blot印迹法观察miR-9前体分子对食管癌细胞株TE6中NF-κB1·蛋白表达.结果:食管癌细胞TE6的NF-κB1基因、蛋白高表达,转染阴性对照前体分子不能抑制NF-κB1基因及蛋白的表达,而转染miR-9前体分子可显著抑制NF-κB1的基因和蛋白表达,抑制率分别为73.21%,87.63%.结论:miR-9前体分子可显著抑制食管癌细胞株TE6中NF-κB1的表达,为食管癌的临床防治提供了新思路.
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槲寄生碱抗肿瘤作用的研究
目的:通过体内、体外实验研究槲寄生碱的抗肿瘤作用.方法: 体外实验采用MTT法测定槲寄生碱对食管癌细胞株(Eca-109)生长的抑制作用.取对数生长期的肿瘤细胞培养24 h后加入含不同浓度槲寄生碱培养液;作用24 h后倾去上清液,加入MTT;4 h后吸去上清液,加入二甲亚砜(DMSO);30 min后测吸光度(A)并计算抑制率;体内实验将制备的肿瘤细胞悬液,以0.2 mL/只的量接种于小鼠右前肢腋部皮下,24 h后将已接种的小鼠随机分组.各组均连续给药7 d,停药后1～3 d将小鼠拉颈处死,剥取瘤块称重,计算抑瘤率. 结果: 体外实验证实槲寄生碱对肿瘤细胞生长有显著的抑制作用;体内实验证实槲寄生碱可抑制肿瘤生长、延长荷瘤动物的生存期.结论:槲寄生碱具有抗肿瘤作用.
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硒蛋氨酸对食管癌细胞株增生的影响
目的:探讨硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC9706增生的影响.方法:通过MTT比色法、细胞生长曲线描绘研究硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC9706增生的影响,采用流式细胞仪观察硒蛋氨酸诱导EC9706细胞凋亡的作用及对细胞周期的影响.结果:硒蛋氨酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC9706细胞增生,改变细胞周期分布,增加G0/G1期细胞比例,诱导细胞凋亡.结论:硒蛋氨酸可能通过影响细胞周期分布和诱导细胞凋亡,来抑制EC9706细胞增生.硒蛋氨酸可能是预防和治疗食管癌的一种新方法.
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多烯紫杉醇对EC-9706食管癌细胞株Survivin与VEGF mRNA表达的影响
目的 探讨多烯紫杉醇对EC-9706食管癌细胞株存活素蛋白(Survivin)与血管内皮细胞生长因子信使RNA(VEGF mRNA)表达的影响.方法 将不同浓度(0、0.1、1和10 nmol/L)的多烯紫杉醇分别作用于食管癌EC-9706细胞,依次纳入A、B、C和D组,48h后观察各组食管癌细胞株的早期及晚期凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞株Survivin和VEGF mRNA的表达情况.结果 B、C、D组食管癌细胞株早期及晚期凋亡率均明显高于A组,C、D组食管癌细胞株早期及晚期凋亡率明显高于B组,D组食管癌细胞株早期及晚期凋亡率明显高于C组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).A、B、C、D组Survivin表达的相对灰度值分别为(0.5123±0.0125)、(0.4823 ±0.0134)、(0.3295±0.0065)和(0.2163 ±0.0034),各组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05),随着多烯紫杉醇浓度的升高,食管癌细胞株Survivin表达明显减少.A、B、C、D组VEGF mR-NA表达的相对灰度值分别为(1.0683±0.0345)、(0.9423±0.0374)、(0.5235±0.0245)和(0.3763 ±0.0124),各组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 多烯紫杉醇能有效增加EC0706食管癌细胞株凋亡,并减少肿瘤相关Survivin与VEGF mRNA表达的减少,且随着多烯紫杉醇浓度的升高,其抑制Survivin与VEGF mRNA表达的程度越明显,值得临床重视.
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3-氨基苯甲酰胺对人食管癌细胞放射增敏作用的实验研究
目的 探讨多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对人食管癌细胞株CaEs-17的放射增敏作用及其机制.方法 利用人食管癌细胞CaEs-17为靶细胞,给予0、2.5、7.5 mmol/L 3-AB及0、3、6,9、12 Gy照射剂量,采用集落形成法及噻唑蓝(MTT)法观察3-AB的放射增敏效应;彗星电泳法、中期染色体分析法分别观察3-AB对放射所致细胞DNA断裂及细胞染色体畸变的影响.结果 根据多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线,得出2.5、7.5 mmol/L 3-AB作用于CaEs-17细胞24 h的放射增敏比分别为1.21和1.52;MTT实验结果显示3-AB可降低放射细胞的存活分数;3-AB可增加放射所致细胞DNA断裂程度以及放射所致细胞染色单体断裂数.结论 3-AB对体外培养人食管癌细胞株CaEs-17有一定放射增敏效应;放射增敏的机制可能与3-AB抑制PARP的功能从而降低细胞对放射所致DNA断裂的修复水平有关.
关键词： 食管癌细胞株 放射增敏剂 多聚(ADP-核糖)聚合酶 抑制剂 3-氨基苯甲酰胺 -
5-氮-2'-脱氧胞苷联合应用顺铂对食管癌细胞株Eca109 bax和bcl-2基因mRNA表达的影响
目的 检测5-氮-2’-脱氧胞苷(5Aza-dC)联合应用顺铂(CDDP)对食管癌细胞株Eca109中bax和bcl-2基因mRNA表达的影响.方法 培养食管癌细胞株Eca109,通过加入不同浓度的5Aza-dC联合应用CDDP后,提取细胞总RNA,通过RT-PCR检测细胞中bax和bcl-2基因mRNA表达变化.结果 低浓度5Aza-dC+高浓度CDDP联合用药组的bcl-2表达量与空白对照组、中浓度5Aza-dC用药组和低浓度CDDP用药组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);低浓度CDDP用药组与高浓度CDDP用药组,中浓度5Aza-dC+高浓度CDDP联合用药组,bcl-2表达量差异有统计学意义(P＜0.05).而bax的表达量各组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在食管癌细胞株Eca109中,bax和bcl-2的表达量均较高.低浓度5Aza-dC+高浓度CDDP联合用药组,使bcl-2 mRNA表达明显低于空白对照组及单一用药组.高浓度的CDDP及高浓度CDDP联合不同浓度5Aza-dC用药组,与低浓度CDDP用药组相比,可使bcl-2 mRNA表达降低.而药物对bax mRNA的表达无影响.提示食管癌细胞株中联合用药使bcl-2 mRNA表达降低,可能是癌基因bcl-2的高表达与食管癌的发生有关,但细胞株对不同药物及浓度反应有差异.不同用药组bax的表达量无明显差异,提示bax的表达可能与食管癌的发生无直接关系.
关键词： 食管癌细胞株 5-氮-2'-脱氧胞苷 顺铂 bax基因 Bcl-2基因 -
食道通结方对裸鼠食管癌移植瘤中TE-1细胞增殖及凋亡的影响
目的 通过体内实验观察食道通结方对食管癌细胞株TE-1细胞增殖和凋亡的影响,以进一步明确该方治疗食管癌的作用机制.方法 裸鼠皮下接种食管癌TE-Ⅰ瘤株,将荷瘤裸鼠随机分成模型组、中药组、顺铂组、中药+顺铂组,每组10只,其中中药选取食道通结方.各组均灌胃2周后,处死裸鼠,分离瘤块.称取瘤重,计算肿瘤抑制率;HE染色观察TE-1细胞形态的变化、细胞凋亡的变化;免疫组化检测肿瘤组织内B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase 3)蛋白表达的变化.结果 中药组、顺铂组和中药+顺铂组平均瘤重均低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.01),抑瘤率分别为45.95％、48.65％、56.76％;顺铂组平均瘤重与中药组相比差异无统计学意义(P＞0.05),中药+顺铂组平均瘤重低于中药组,差异有统计学意义(P＜0.01).在形态变化上,中药组、顺铂组和中药+顺铂组细胞部分形态呈圆形或卵圆形,细胞核浆比例减小,其中中药+顺铂组变化为显著;免疫组化结果显示,中药组、顺铂组和中药+顺铂组Bcl-2OD值明显低于模型组,其中以中药+顺铂组低,差异有统计学意义(P＜0.01);中药组与顺铂组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),中药组Bcl-2OD值高于中药+顺铂组,差异有统计学意义(P＜0.01).中药组、顺铂组和中药+顺铂组caspase 3的OD值明显高于模型组,其中以中药+顺铂组高,差异有统计学意义(P＜0.01);中药组与顺铂组相比差异无统计学意义(P＞0.05),中药组caspase 3的OD值低于中药+顺铂组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 食道通结方具有抑制食管癌细胞株TE-1增殖、促进其凋亡的作用,该作用可能与下调食管癌细胞株TE-1中Bcl-2的表达,上调caspase3的表达相关.
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siRNA干扰ERCC2表达对食管癌细胞紫杉醇敏感性的影响
背景与目的:通过siRNA干扰沉默ERCC2基因,观察食管癌细胞株对紫杉醇敏感性的改变,初步探讨新的紫杉醇耐药可能机制.方法:体外合成靶向ERCC2的SiRNA(si-ERCC2);应用脂质体法瞬时转染ERCC2高表达细胞株KYSE150;应用RT-PCR和流式细胞术(FCM)分别检测转染组细胞点ERCC2 ndlNA和蛋白的表达水平:应用MTT法检测转染前后细胞对紫杉醇敏感性的变化.结果:si-ERCC2组在转染后24、48、72 h均未测出ERCC2特异性条带且ERCC2蛋白表达量分别下调了31.2%,51.6%和60.0%.si-ERCC2组紫杉醇IC_(50)值为6.3±0.9 μg/mL,较对照组降低49%.结论:siRNA成功封闭了目的基因ERCC2在转录和翻译水平的表达,封闭ERCC2表达能部分逆转紫杉醇耐药现象.
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人食管癌间充质干细胞对食管癌细胞株Eca-109侵袭性的影响
目的 探讨人食管癌间充质干细胞(hEC-MSCs)对食管癌细胞株Eca-109侵袭性的影响.方法 在体外将间质干细胞与食管癌细胞株ECA-109非接触共培养,使用RT-PCR和Western blotting的方法检测间质干细胞对ECA-109细胞株中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和抑癌基因E-cadherin表达的影响.结果 间质干细胞可明显上调ECA-109细胞株中的MMP-9表达,显著下调ECA-109细胞株中E-cadherin的表达.结论 食管癌间充质干细胞可能参与调节食管癌细胞的侵袭与转移.
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中药安迪注射剂对人食管癌细胞的放射增敏作用
目的:观察安迪注射剂(Andi)对电离辐射生物学效应的影响.方法:人食管癌细胞株(ECA 109)在富氧(空气)和缺氧(通99.99%的高纯氮气50 min)条件下分别观察对照组、Andi组、60Co-γ线辐射和Andi+60Co-γ线辐射4组细胞形态(光镜)、细胞倍增时间(TD)、存活率(SR)及集落存活分数(SF).结果:光镜下可见Andi组、辐射组、Andi+辐射组癌细胞变性、坏死、凋亡,以Andi+辐射组为显著.MTT法测定对照组、Andi组、60Co-γ线辐射和Andi+60Co-γ线辐射四组缺氧细胞的TD (%)分别为46.12,118.72,62.81,171.02 h,SR分别为100%,42%,86%,30%;各治疗组与对照组比较TD和SR均相差显著(P<0.05).方差分析显示,辐射在富氧(F=90.19,P=0.0001)和缺氧(F=37.09,P=0.0003)时均为SF的影响因素;Andi仅在缺氧时对SF是有意义的影响因素(F=29.04,P=0.0007),与60Co-γ线辐射合用对缺氧细胞SF的影响具有协同作用(F=11.37,P=0.0098).用单靶多击模型拟合数据分析,Andi的放射增敏比(SER)为1.5,相对敏化效应(RSE)为55%.结论:Andi对缺氧ECA 109细胞具有明显的细胞毒和放射增敏作用.
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E2F1对食管癌细胞株ECA109生物学功能的影响及机制
目的 探讨E2F1对食管癌细胞株生物学功能的影响及其调控机制.方法 食管癌细胞株ECA109分为ECA109阴性对照组(对照组)、ECA109空载体组(空载体组)和ECA109-E2F1过表达组(过表达组).对照组仅行电转染不加入质粒载体,空载体组电转染不携带E2F1基因的质粒载体,过表达组电转染E2F1过表达质粒载体.质粒转染48 h后,3组采用荧光倒置显微镜观察绿色荧光的表达情况,采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况,采用PCR检测转录因子E2F1、KB抑制蛋白激酶(Ⅰ kappa B kinase,IKK)、IKKβ、核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)和survivinmRNA表达情况,采用Western blot法检测E2F1、IKKα、IKKβ、NF-κB、survivin蛋白表达情况.结果 过表达组绿色荧光蛋白表现为针尖状,呈强阳性表达,空载体组绿色荧光蛋白表达呈阳性,对照组未见绿色荧光蛋白表达;转染48 h后,过表达组G1期细胞比例与空载体组和对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);过表达组G2期细胞比例[(9.30±4.45)％]和早期凋亡率[(16.50±3.21)％]明显低于空载体组[(18.16±1.25)％、(31.70±5.56)％]和对照组[(17.60±4.42)％、(31.46±2.73)％](P＜0.05),S期细胞比例[(35.66±2.99)％]明显高于空载体组[(28.86±1.80)％]和对照组[(29.83±1.84)％](P＜0.05);空载体组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);转染48 h后,过表达组E2F1 mRNA(1.79±0.18)和蛋白(0.535±0.003)、IKKβ mRNA(0.20±0.06)和蛋白(0.394±0.044)、NF-κB mRNA(4.64±0.55)和蛋白(0.043±0.001)、survivin mRNA(2.98±0.20)和蛋白(0.039±0.001)表达水平明显高于对照组[E2F1 mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.009)、IKKp mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.021)、NF-κB mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.014±0.002)、survivin mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.027±0.003)]和空载体组[E2F1 mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.212±0.020)、IKKp mRNA和蛋白(0.99±0.05、0.188±0.018)、NF-κB mRNA和蛋白(0.99±0.03、0.019±0.001)、survivin mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.025±0.002)] (P＜0.05),IKKα mRNA(0.60±0.14)和蛋白(0.614±0.050)表达水平低于对照组(1.00±0.00、0.817±0.055)和空载体组(0.96±0.02、0.733±0.036);对照组与空载体组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ECA109细胞株中E2F1与survivin存在表达调控关系,E2F1对survivin的表达调控通过激活NF-κB的经典激活通路,导致了survivin的转录激活.
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pcDNA3.1-KISS-1真核表达载体的构建及其对EC1细胞转移的抑制作用
目的 克隆人食管组织KISS-1基因及构建真核表达载体pcDNA3.1-KISS-1,并观察其在食管癌EC1细胞中的表达及时EC1细胞侵袭及运动能力的影响.方法 从人正常食管组织中提取总RNA,设计特异性引物,通过逆转录一聚合酶联链反应(RT-PCR)扩增KISS-1基因cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-KISS-1,酶切鉴定及测序分析后用Lipofeetamine脂质体将其转染到食管癌细胞.Western blot法检测其蛋白在EC1细胞中的表达情况;应用细胞运动实验及重建基底膜侵袭实验分析KISS-1表达对EC1细胞运动和侵袭能力的影响.结果 成功克隆了人KISS-1基因全长编码序列,构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-KISS-1,脂质体转染后KISS-1基因在EC1细胞中成功表达;转基因组细胞的运动能力(174.6±14.24)和体外穿越重建基底膜的能力(90.44±12.83)明显低于转空质粒组(222.6±30.08,110.22±15.87)和对照组EC1细胞(234.40±14.72,124.78±18.14)(P均<0.05).结论 重组pcDNA3.1-KISS-1真核表达质粒构建成功,并且KISS-1对食管癌细胞的侵袭和运动能力具有抑制作用.
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miRNA-9在食管癌细胞株中的表达
目的 探讨miRNA-9在食管癌细胞株与正常食管上皮细胞的表达. 方法 采用荧光定量PCR法检测食管癌细胞株及正常食管上皮细胞miRNA-9基因的表达水平. 结果 5株食管癌细胞株和正常食管上皮细胞均存在miRNA-9基因表达,食管癌细胞株miRNA-9基因的表达量均高于正常食管上皮细胞(P＜0.01).结论 miRNA-9基因在食管癌细胞株表达明显上调,说明miRNA-9基因与食管癌的发生有关.
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PTEN对食管癌细胞增殖的影响及机制
目的 探讨PTEN对食管癌细胞增殖的影响及作用机制.方法 将食管鳞状细胞癌细胞株TE1和TE13分为对照组、空载体组和转染组3个处理组.对照组仅常规培养细胞,而空载体组和转染组常规培养细胞后,分别转染空载体质粒、PTEN/sh-AKT质粒后备用.采用细胞计数法检测细胞浓度,MTT方法检测细胞增殖能力,RT-PCR方法检测细胞PTEN、AKT基因的表达,Western blot方法检测细胞PTEN、p-AKT蛋白的表达.结果 转染PTEN质粒后,转染组两种细胞浓度均较其余两组明显下降(P＜0.05).转染PTEN质粒后,转染组两种细胞的增殖能力(OD值)均较其余两组明显下降(P＜0.05).转染PTEN质粒后,转染组两种细胞PTEN基因表达量均明显高于其余两组(P＜0.05),而AKT基因无明显变化(P＞0.05);转染sh-AKT质粒后,各组间两种细胞PTEN、AKT基因表达量差异均无统计学意义(P＞0.05).转染PTEN质粒后,转染组两种细胞PTEN蛋白表达量均明显高于其余两组(P＜0.05),而p-AKT蛋白表达量均明显低于其余两组(P＜0.05);转染sh-AKT质粒后,各组间两种细胞PTEN蛋白表达量差异均无统计学意义(P＞0.05),而转染组两种细胞p-AKT蛋白表达量均明显低于其余两组(P＜0.05).结论 基因水平上调PTEN的表达可抑制AKT的活化,进而达到抑制食管癌细胞增殖的作用.
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姜黄素对人食管癌细胞株Eca-109增殖抑制和凋亡诱导的实验研究
目的 研究姜黄素对人食管癌细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响.方法 以四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验测定细胞的生长抑制率,以流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 姜黄素对细胞的生长有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性.结论 姜黄素可抑制人食管癌细胞增殖,诱导失巢凋亡是其机制之一.
