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杜仲中松脂素二葡萄糖苷和松脂素对成骨细胞中OPG和RANKL表达的影响
目的:观察杜仲中松脂素二葡萄糖苷及其苷元松脂素对体外培养的小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 MC3T3-E1的影响.方法:采用质量浓度为1×10 -7～1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷与松脂素体外干预MC3T3-E1成骨细胞48,72 h,采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞分化情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞骨保护素(OPG)与核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达的水平.结果:与空白组相比,培养48 h,1×10 -4～100μg·L-1松脂素二葡萄糖苷及1×10 -4～1μg·L-1松脂素均能促进成骨细胞增殖(P<0.05,P<0.01);培养72 h,1 ×10 -3～100μg·L-1松脂素二葡萄糖苷及0.1μg·L-1松脂素能促进成骨细胞增殖(P<0.05,P<0.01).与空白组相比,培养48 h时,质量浓度为1×10 -4～1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷、松脂素均能够显著促进成骨细胞ALP分泌(P<0.01);培养72 h时,质量浓度为0.1～1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷和1×10 -4～1×103μg·L-1松脂素均能显著促进成骨细胞ALP分泌(P<0.05,P<0.01).与空白组相比,培养48 h,1×10 -5～10μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷和松脂素均能促进细OPG蛋白分泌(P<0.05,P<0.01);只有松脂素在1×10 -5,1×10 -3μg·L-1时能明显抑制RANKL蛋白的分泌(P<0.01),在1×10 -5～0.1μg·L-1时提高OPG/RANKL(P<0.01).结论:松脂素二葡萄糖苷与松脂素均能通过促进成骨细胞的增殖和分化达到抗骨质疏松作用,但其作用机制不同,松脂素二葡萄糖苷主要通过促进OPG分泌来发挥,而松脂素则既能通过促进OPG分泌又能通过抑制RANKL表达来发挥作用.
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斜率校正"一测多评法"同时测定杜仲中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂素二葡萄糖苷的含量
目的:建立斜率校正"一测多评法"同时测定杜仲中京尼平苷酸(GPA)、绿原酸(CHA)、京尼平苷(GP)、松脂素二葡萄糖苷(PDG)含量的方法.方法:以HPLC法含量测定为基础,CHA为对照,计算GPA、GP、PDG的斜率相对校正因子,并比较斜率校正"一测多评法"与外标法两种结果相关性,从而验证斜率校正"一测多评法"的准确性,终建立测定杜仲多种活性成分的斜率校正"一测多评法".结果:在一定的线性范围内,GPA、GP、PDG的斜率相对校正因子分别为:0.762 8,0.478 6,0.711 2,重复性良好.斜率校正"一测多评法"计算的含量值与外标法实测值相关性较好,56批杜仲样本中GPA、GP、PDG含量结果的相关系数均大于0.99.结论:建立的斜率校正"一测多评法"准确性高,可用于杜仲中GPA、CHA、GP、PDG活性成分的含量测定.
