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不同产地杜仲叶中5种主要有效成分的含量比较
目的:比较17个不同产地杜仲叶中5种主要有效成分的含量差异.方法:利用高效液相色谱法(HPLC)测定桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、儿茶素、芦丁的含量,流动相乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0～45 min,5％ ～ 15％A;45～85 min,15％ ～24％ A),检测波长208 nm.考察不同产地杜仲叶中5种有效成分的含量差异.结果:不同产地杜仲叶中5种主要有效成分总量及各有效成分含量之间均存在显著差异,其中采自陕西省黄陵县的杜仲叶中5种有效成分总质量分数高达14.15％,而采自四川省渠县的杜仲叶仅1.37％,两者相差＞10倍.结论:杜仲叶中主要有效成分含量存在一定的地域性差异,其中陕西、河南等地样品中含量明显高于西南地区(如四川、重庆、贵州等).杜仲叶应尽可能采取低温快速干燥.
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不同产地栀子药材中8种主要药效成分的含量测定及聚类分析
目的:比较不同产地栀子药材中京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸及西红花苷Ⅰ共8种药效成分的含量,为栀子药材佳产地的确定提供理论依据.方法:采用HPLC测定各指标成分含量,流动相乙腈(A)-o.1％磷酸溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 10 min,5％～10％A;10 ～ 20 min,10％ ～ 18％A;20～ 30 min,18％ ～ 45％A,40 ～ 50 min,45％ ～5％A),检测波长分别238,324,440 nm.并以各成分作为指标进行聚类分析,采用SPSS 20.0中主成分分析法提取4个主因子.结果:累计方差贡献率95.98％,聚类分析结果显示江西泰和县和江西樟树县GAP基地的栀子药材质量较好.结论:不同产区栀子药材中主要药效成分的含量有较大差异,各成分含量与产地呈一定的相关性.
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京尼平苷酸在胆汁淤积型大鼠体内的药动学分析
目的:京尼平苷酸(GPA)具有利胆作用,研究该成分在胆汁淤积病理模型状态下体内代谢过程的差别.方法:大鼠随机分为正常组和α-萘异硫氰酸酯(ANIT剂量100 mg·kg-1)诱导胆汁淤积模型组,给予不同剂量GPA(高、中、低剂量分别为100,50,25 mg· kg-1).采用蛋白沉淀法对大鼠血浆进行处理,建立以绿原酸为内标的HPLC-UV检测方法,流动相乙腈-0.5％冰乙酸(28∶72),检测波长238 nm,利用Stata12.0软件拟合房室模型并计算各组大鼠的药动学参数.结果:ANIT造胆汁淤积模型成功率＞95％.与正常组相比,胆汁淤积模型降低了GPA在体内的消除速率常数(Ke),延长了在体内的平均驻留时间(MRT0-t)和半衰期(t1/2),提高了药时曲线下面积AUC0-t和AUC0-∞.结论:该分析方法满足了京尼平苷酸体内药物分析的要求,胆汁淤积模型可降低京尼平苷酸的消除和排泄.
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基于大鼠离体外翻肠囊模型考察杜仲提取物在正常和自发性高血压状态下的肠吸收特性差异
目的:研究杜仲提取物在正常大鼠和自发性高血压大鼠的肠吸收特性差异.方法:采用大鼠外翻肠囊模型,收集10.0 g·L-1杜仲提取物给药后不同时间点的肠囊液,通过UPLC-MS/MS检测肠吸收液样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷7个成分的含量,计算累积吸收量和吸收速率常数,比较正常大鼠和自发性高血压大鼠肠吸收液中杜仲提取物各指标成分的吸收情况.结果:杜仲提取物中7种成分的肠吸收均为线性吸收(R2均＞0.99),主要吸收部位在小肠,正常状态下以十二指肠的吸收好.原儿茶酸和松脂醇二葡萄糖苷在高血压状态下的空肠有更好吸收,提示病理状态可能会改变药物吸收的特定部位.7个指标成分在SHR模型的肠吸收与正常大鼠相比均表现出了不同程度的差异.京尼平苷酸在自发性高血压大鼠各肠段的吸收弱于正常大鼠,但以松脂醇二葡萄糖苷为代表的其他成分都没有表现出一致的吸收趋势.结论:自发性高血压会影响杜仲提取物的肠吸收,从肠黏膜通透性降低和吸收部位后移的角度无法完全解释这些差异,可能还与肠道中存在的酶和转运蛋白等相关,具体作用机制有待进一步的深入研究.
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京尼平苷酸对siRNA介导BRL-3A细胞中FXR基因沉默后MRP2和BSEP表达的影响
目的:通过siRNA干扰法尼酯衍生物X受体(FXR)基因沉默与否考察京尼平苷酸(GPA)对BRL-3A细胞中多药耐药相关蛋白2(MRP2)和胆汁酸转运体胆盐输出泵(BSEP)的影响.方法:运用RT-PCR检测siRNA介导FXR沉默结果和GPA对BRL-3A细胞中FXR、MRP2和BSEP基因水平的影响;Western blot检测FXR被沉默后、以及GPA对BRL-3A细胞中FXR沉默与否,对FXR、MRP2和BSEP蛋白水平的影响.结果:4mmol/L和1mmol/L浓度的GPA可以上调BRL-3A细胞中FXR、MRP2和BSEP基因和蛋白的表达水平,且与GPA的剂量呈正相关,在统计学上有显著性差异(P＜0.01,P＜O.05);4mmol/L和lmmol/L浓度的GPA可以逆转因siRNA-FXR沉默引起的FXR、MRP2和BSEP基因和蛋白水平降低,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),且以GPA呈剂量正相关.结论:FXR的沉默可下调胆汁酸转运体MRP2和BSEP基因和蛋白的表达,GPA在体外可通过上调FXR来上调MRP2和BSEP基因和蛋白的水平.
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京尼平苷酸对佐剂性关节炎大鼠抗炎作用及滑膜细胞凋亡机制研究
目的:研究京尼平苷酸(GA)对佐剂性关节炎(AA)大鼠抗炎作用,探讨GA对AA大鼠滑膜细胞增殖影响的可能凋亡机制.方法:Wistar大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,200,100,50 mg·kg~(-1) GA组和0.75 mg·kg~(-1)甲氨蝶呤(MTX)组,右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂后第19天给药,治疗4周,测定足肿胀指标和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)水平.培养AA大鼠滑膜细胞给予GA(1,2,4μmol·L~(-1))和4μmol·L~(-1) MTX处理,MTT法检测细胞增殖,Hoechst/PI双染观察细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡细胞率,RT-PCR法检测Bcl-2和Bax基因mRNA表达水平.结果:200,100mg·kg~(-1) GA可以明显降低足肿胀度和关节炎指数(P＜0.05或P＜0.01),肿胀抑制率分别为25.4%,21.37%,并抑制血清中TNF-αIL-1β水平(P＜0.05),TNF-α抑制率为34.61%,28%,IL-1β抑制率为29.05%,21.65%.GA(1～4μmol·L~(-1))处理AA大鼠滑膜细胞5 d,明显抑制细胞增殖.流式细胞仪检测显示1,2,4μmol·L~(-1) GA组凋亡率分别为15.8%,24.3%,40.7%(P＜0.01).RT-PCR结果显示,不同浓度GA明显抑制Bcl-2 mRNA表达,而促进Ba)(mRNA表达(P＜0.05或P＜0.01).结论:京尼平苷酸可抑制AA大鼠继发性炎症,降低血清TNF-α,IL-1β水平,体外可抑制AA大鼠滑膜细胞增殖及诱导细胞凋亡,作用机制与其下调Bcl-2和上调Bax基因mRNA表达有关.
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杜仲中京尼平苷酸的提取工艺研究及应用
目的:用正交试验法对杜仲中的活性成分京尼平苷酸的提取工艺进行了优选研究.方法:采用正交表L16(45),以提取时间、提取温度、提取次数、料液比以及提取有机溶剂乙醇含量为因素,以京尼平苷酸提取率为指标进行试验.采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定京尼平苷酸提取率. 结果:佳提取参数为,温度为50 ℃,时间1 h,提取1次,80%的乙醇,料液比为1∶12.应用佳提取工艺对杜仲原料进行了筛选. 结论:该工艺为杜仲中京尼平苷酸的大规模提取提供理论依据.
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基于入血成分的杜仲药材的含量测定
建立杜仲药材中京尼平苷酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷3种原型入血成分的含量测定方法.采用LC-MS/MS检测技术确定大鼠灌胃杜仲提取物后吸收入血的药物成分,结合高效液相色谱技术检测23批杜仲样品中入血成分的含量.结果表明,大鼠口服杜仲提取液后,京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷均以原型入血;以杜仲药材中的京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖为对照品建立的含量测定方法线性范围良好,平均回收率分别为98.69％,100.8％,98.39％.该方法简便可行、回收率和重复性良好.
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青娥丸方有效成分药动学-药效学相关性研究
研究青娥丸方中3种有效成分京尼平苷酸、补骨脂素、异补骨脂素在大鼠体内的药代动力学过程与其抗骨质疏松作用的相关性.该实验通过大鼠灌胃给药青娥丸生品与盐炙品后,选取不同时间点进行眼眶取血,采用UHPLC-MS/MS测定大鼠血浆中京尼平苷酸、补骨脂素和异补骨脂素的药物浓度,绘制药-时曲线;以成骨细胞的增殖率为药效学指标,采用MTT法测定不同时间点含药血清作用于成骨细胞后的增殖率,绘制时-效曲线.比较时-效曲线和药-时曲线可以发现,在成骨细胞的增殖率达到峰值时,京尼平苷酸和补骨脂素的血药浓度也在峰值附近,表明两者具有较好的相关性.而异补骨脂素的血药浓度峰值相对于药效峰值具有一定的滞后性.将青娥丸生品及盐炙品各成分的时-效曲线与药-时曲线进行拟合,进行相关性分析,发现盐炙品组各成分的相关性略高于生品组.上述实验结果表明,青娥丸中京尼平苷酸、补骨脂素的药-时曲线和时-效曲线具有良好的相关性,且与生品相比,青娥丸盐炙品中两者的相关性更高.
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静脉给药热毒宁注射液大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中代谢产物的鉴定
研究热毒宁注射液在大鼠体内的代谢产物.采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电轨道阱串联质谱联用方法(UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对大鼠尾静脉注射热毒宁后血浆、胆汁、尿液和粪便进行分析,利用质量亏损过滤(MDF)技术进行京尼平苷、京尼平苷酸、断氧化马钱子苷、绿原酸代谢产物分析鉴定,推测出大鼠体内京尼平苷氧化、脱水、去甲氧基、水解、开环、半胱氨酸结合和苷元葡萄糖醛酸结合等14个代谢产物;京尼平苷酸脱水、开环、双键还原和半胱氨酸结合等9个代谢产物;断氧化马钱子苷水解、去甲氧基、羟基化和乙基化等6个代谢产物;绿原酸脱羧、水解、甲基化、乙酰化、半胱氨酰甘氨酸结合和谷胱甘肽结合等12个代谢产物.为进一步探讨热毒宁注射液体内过程,阐明其功效物质基础提供依据.
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车前子煎煮过程中4种化学成分含量变化规律研究
目的:研究车前子煎煮过程中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷4种化学成分的含量变化规律.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Kinetex C18 (100 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相为乙腈-0.5％乙酸溶液,梯度洗脱,流速为0.3 m L·min-1,柱温30℃,检测波长:京尼平苷酸为239 nm、咖啡酸为325 nm、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷为330 nm.测定药材、水煎液和配方颗粒中4种化学成分的含量.结果:水煎过程中4种指标化学成分含量随煎煮时间、温度、p H值不同有不同程度变化.结论:煎煮过程中,毛蕊花糖苷可能会发生酯键断裂生成咖啡酸,并部分转化为异毛蕊花糖苷.
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栀子中4种环烯醚萜苷类成分治疗大鼠血管性痴呆的药效学研究
目的:比较栀子中4种环烯醚萜类成分抗血管性痴呆的活性.方法:血管性痴呆模型大鼠术后3d经口给予京尼平苷、京尼平苷酸、山栀子苷甲酯及京尼平溶液,剂量为15 mg·kg-1,连续给药30d,进行空间探索和定位航行实验等行为学测试和大脑病理切片观察.结果:空间探索和定位航行实验结果显示,京尼平苷、京尼平苷酸、京尼平能改善模型大鼠的学习能力和记忆能力(P ＜0.05或0.01);脑组织病理切片显示,京尼平苷、京尼平苷酸和京尼平组大鼠海马CA1区和大脑皮质内锥体层各脑区的神经元变性情况明显优于模型组大鼠.结论:京尼平、京尼平苷酸和京尼平苷可能具有抗血管性痴呆的作用,山栀子苷甲酯没有抗血管性痴呆的作用.
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高效液相色谱法同时测定车前子配方颗粒中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量
目的 建立车前子配方颗粒中京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量测定方法,为其质量标准的研究提供依据.方法 采用Kinetex C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.6 μm),以乙腈-0.5％乙酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1,检测波长分别为:京尼平苷酸239 nm,咖啡酸325 nm,毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷330 nm;柱温30℃.结果 京尼平苷酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的进样量分别在0.292 1 ～2.921μg(r =0.999 9),0.003 4 ～0.033 6μg(r =0.999 8),0.047 6 ～0.476 μg(r =0.999 8),0.102 7 ～1.027 μg(r =0.999 9)内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.32％,98.62％,98.23％和98.51％,RSD分别为1.47％,1.36％,1.62％和1.53％.结论 该方法简便、准确,分离效果好,可为车前子配方颗粒的质量控制提供方法参考.
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预知子化学成分研究
目的 研究预知子[Akebia trifoliate (Thunb) koidz]的化学成分.方法 采用柱色谱和半制备液相色谱进行分离,利用化合物的光谱数据结合理化性质鉴定化合物的结构.结果 分离鉴定了15个化合物,分别为京尼平苷酸(1)、10-乙酰基京尼平苷酸(2)、3-氧化-6-羟基紫罗兰醇(3)、对羟基苯甲酸(4)、原儿茶酸(5)、咖啡酸(6)、酪醇(7)、棕榈酸(8)、15--二十九烷醇(9)、豆甾醇(10)、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、β-谷甾醇(12)、β-胡萝卜苷(13)、熊果酸(14)和齐墩果酸(15).结论 化合物1～7,9,14为首次从预知子中分离得到.
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京尼平苷及其衍生物的药效学研究进展
目的综述京尼平苷及其衍生物的药效学研究进展,为京尼平苷及其衍生物的开发利用提供参考.方法总结近年来有代表性的文献,对京尼平苷及其衍生物的药效学进展加以归纳.结果京尼平苷及其衍生物是杜仲、栀子等多种中药材及天然药物主要的有效成分,具有广泛的药理作用,有望成为新的治疗药物.结论应充分利用我国资源优势,加大对其的研发力度,为开发新的治疗药物奠定基础.
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车前子超微速溶饮片中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的含量测定
目的 建立一种同步测定车前子超微速溶饮片中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷含量的高效液相色谱方法.方法采用液相色谱法,色谱柱为Hypersil ODS2 C18 柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速:1.0 mL/min,检测波长:254 nm,柱温:30℃.结果 京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的线性范围分别为0.191 ～ 1.910μg( r2= 0.999 8)和0.2002 ～ 2.002μg(r2=0.999 9);平均加样回收率分别为100.1%(RSD=0.57%,n=6)和99.8%(RSD=0.28%,n=6).结论本方法操作简便,测定结果准确,重复性好,可作为该产品质控的方法.
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杜仲的血清药物化学研究
目的 对杜仲Eucommia ulmoides进行血清药物化学研究.方法 采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,通过比较杜仲提取物、给药组及空白组大鼠血清的指纹图谱,确定口服杜仲提取物后大鼠血中移行成分.结果 给药组大鼠血清指纹图谱与空白组血清指纹图谱对比有明显不同.含药血清中出现7个移行成分,与杜仲提取物指纹图谱在相同保留时间出峰,为原型成分.采用对照品对照,确定5个色谱峰所表征的化学成分为原型吸收入血成分,依次为京尼平苷酸、原儿茶酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷.通过查阅文献,推断了2个色谱峰所表征的化学成分可能为1-羟基松脂醇二葡萄糖苷、杜仲醇.结论 血中移行成分可能为杜仲的体内直接作用物质,为明确杜仲药效物质基础提供了科学依据.
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香花藤化学成分的研究
目的 对香花藤Aganosma marginata全株化学成分进行研究.方法 采用硅胶色谱柱、Sephadex LH-20色谱柱、MCI色谱柱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构.结果 从香花藤70％乙醇提取物中分离得到23个化合物,分别鉴定为periseoside C(1)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖-3β,15α-二羟基孕甾-5-烯-20-酮(2)、3β,20α-二羟基-5-烯-孕甾(3)、24-methylstigmast-5-en-3-ol (4)、29-norcycloart-23-ene-3,25-diol (5)、29-norcycloartan-3-ol (6)、京尼平苷酸(7)、丁香树脂醇(8)、丁香脂素-4,4’-O-双-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、丁香酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(10)、水杨酸(11)、东莨菪内酯(12)、壬二酸(13)、3-O-[β-D-xylopyranosyl]-(1→4)-β-D-allopyranoside-14-hydroxycard-20(22)-enolide (14)、bis (2-ethylhexyl)phthalate (15)、山柰酚3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-α-L-吡喃葡萄糖苷(16)、山柰酚3-O-α-L-吡喃葡萄糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(17)、山柰酚3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(18)、山柰酚3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(19)、二十六碳酸-1-甘油酯(20)、5,8,12-trihydroxy-9-octadecenoic acid (21)、(2S,3S,4R)-phytosphingosine (22)、水粉覃素(23).结论 所有化合物均为首次从该属植物中分离得到.
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杜仲雄花生长发育动态及活性成分量变化
目的 建立杜仲Eucommia ulmoides雄花6种活性成分的测定方法,分析杜仲雄花生长发育动态及活性成分的变化规律.方法 采用超声法进行提取,采用A1C13比色法测定总黄酮,采用HPLC法测定其他6种成分,色谱柱为Thermo hypersil gold柱(250 mm× 4.6 mm,5μm),以甲醇-0.5％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长:206nm (0～15 min)、236 nm (15～55 min)、255 nm (55～100min);体积流量1.0 mL/min.结果 花径、花高、鲜质量、干质量、雄蕊长度和雄蕊数均在盛花期达到大值;总黄酮、绿原酸以及活性成分总量均以花蕾期高,始花期低;桃叶珊瑚苷量总体呈下降趋势;京尼平苷酸量花蕾期低,至盛花期达到高值,末花期有所下降;京尼平苷、异槲皮苷和紫云英苷量均以盛花期高,始花期低.结论 花期对杜仲雄花形态、产量、活性成分量及质量均有很大影响,为杜仲雄花质量控制及相关产品开发提供了重要依据.
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HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷
目的 HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷4种有效成分的量,为更好控制杜仲皮质量提供依据.方法 采用Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～7 min,7％ A; 7～35 min,14％A; 35～45 min,15％A.体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温30℃.结果 在该色谱条件下,京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.1025～0.5125 (r=0.9999)、0.0925～0.4625(r=0.9999)、0.1200～0.6000(r=0.9996)、0.0900～0.4500 μg/mL (r=0.9998)内与色谱峰峰面积呈现良好的线性关系,加样回收率分别为98.97％、98.71％、98.20％、100.44％,RSD分别为1.54％、1.30％、0.76％、1.13％.结论 该分析方法快速准确、重现性好,可为杜仲药材的质量控制与标准的完善提供可靠的检测依据.
