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杜仲提取物中五个成分血浆蛋白结合率的测定
目的：测定杜仲药材中5个成分的血浆蛋白结合率。方法采用平衡透析法测定血浆蛋白结合率，生物样本用甲醇沉淀蛋白进行处理，以葛根素为内标，利用超高效液相色谱-串联质谱仪测定血浆和缓冲溶液中的5个成分浓度。结果在所研究浓度范围内，京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的平均蛋白结合率分别为(25．77±2．68)%、(57．54±3．79)%、(53．91±3．00)%、(24．15±4．92)%、(49．78±3．61)%。结论京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的蛋白结合率较低，原儿茶酸、绿原酸和松脂醇单葡萄糖苷则与大鼠血浆蛋白有中等强度的结合。
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HPLC法测定咳嗽枇杷糖浆中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷
目的 用高效液相色谱梯度洗脱法同时测定咳嗽枇杷糖浆(枇杷叶、桔梗、麻黄、车前子等)中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷,为制定该制剂质量标准中定量测定方法 及限度提供依据.方法 色谱柱:Agilent-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)流动相:以甲醇-0.5%醋酸溶液梯度洗脱(0～1 min:甲醇质量分数为5%;1～40 min:甲醇质量分数由5%递升至60%;40～50 min:甲醇质量分数由60%递减至5%);流速:1.0 mL·min-1,检测波长:254 nm,柱温:30℃,进样量:10 μL.结果 京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的线性范围为0.8128～4.064 μg和0.7696～3.848 μg,平均加样回收率(n=6)分别为99.66%和99.14%.结论 该方法 简单、快速、准确,可作为咳嗽枇杷糖浆的质量控制方法.
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产地加工对杜仲京尼平苷酸含量的影响
目的：比较不同加工方法对杜仲京尼平苷酸含量的影响，为杜仲的合理化产地加工提供科学依据。方法采用高效液相色谱法测定京尼平苷酸量。结果不同加工方法对杜仲京尼平苷酸含量有影响。同一干燥方法，未发汗杜仲京尼平苷酸量高于发汗杜仲；同一性状，烘干、晒干与阴干三者间京尼平苷酸量存在显著差异，以80℃烘干含量高；不同性状，80℃烘干京尼平苷酸量无显著差异。结论临床应用如以京尼平苷酸的生物活性为主，结合实际生产，建议杜仲采用趁鲜切宽丝，不发汗，80℃烘干的产地加工方法。
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车前子超微速溶饮片中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的含量测定
目的:建立一种同步测定车前子超微速溶饮片中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷含量的高效液相色谱方法.方法:色谱柱为Hypersil ODS2 C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速:1.0mL/min,检测波长:254 nm,柱温:35℃.结果:京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的线性范围分别为59.88 μg/mL～159.68μg/mL(r=0.9999)和91.26μg/mL～243.36μg/mL(r=0.9999);平均加样回收率分别为100.5％(RSD=1.1％,n=6)和99.7％(RSD=1.3％,n=6).结论:本方法操作简便,测定结果准确,重复性好,可作为该产品质控的方法.
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RP-HPLC法测定杜仲冲剂中3种成分的含量
目的:建立杜仲冲剂中京尼平苷酸(GPA)、绿原酸(CA)、京尼平苷(GP)3种成分含量测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,Diamonsil(钻石)C18色谱柱(5 μm,150 mm×4.6 mm),甲醇-水-冰醋酸(14∶86∶1.2)为流动相,检测波长237 nm.结果:该方法线性关系良好.GPA,CA,GP的精密度分别为1.82%,1.38%,1.92%.加样回收率分别为97.5%,97.9%,96.8%.结论:本方法简便快捷、重现性好,可用于同时测定杜仲冲剂中3种有效成分含量.
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UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中杜仲的五个成分及其药代动力学研究
目的 建立大鼠血浆中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的UPLC-MS/MS测定方法,并进行五种成分在大鼠体内药代动力学研究.方法 大鼠静脉注射杜仲提取物后,采用甲醇沉淀血浆蛋白,以葛根素为内标,采用Waters BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,0.1％甲酸乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),以多反应监测(MRM)方式进行检测.结果 京尼平苷酸等五种成分在血浆中呈良好线性关系.方法 学考察均符合要求,日内、日间精密度、准确度和稳定性良好,提取回收率86.06％～104.39％,无基质效应.京尼平苷酸等5个指标成分在大鼠体内消除较快.结论 建立的HPLC-MS/MS测定方法能快速灵敏地检测生物样品中京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷的血药浓度,可用于五种成分的药代动力学研究.
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栀子果皮颜色与6种成分的相关性研究
目的 研究栀子的果皮颜色与6种成分之间的关系.方法 选取栀子的果皮颜色作为栀子外观的主征,对栀子外观主征进行量化,并分析栀子的外观主征和栀子中6种成分之间的关系.结果 栀子中的绿原酸含量与果皮颜色色泽信息L值都呈显著关系,与L值呈负相关;L值和a值均和栀子苷的含量呈正相关,且a值的作用明显高于L值;京尼平苷酸的含量与L、a、b值都呈负相关;西红花苷-Ⅰ的含量与a值呈正相关;西红花苷-Ⅱ的含量与a值和b值呈正相关且a值的作用比b值大;而京尼平1-β-D龙胆二糖苷的含量与果皮颜色信息没有关系.结论 栀子的果皮颜色与5种成分相关性显著,而京尼平1-β-D龙胆二糖苷的含量与果皮颜色信息相关性不明显,可以辨别栀子的药材的优劣,为栀子的生产实践提供一定的依据.
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基于地形因子对栀子中6种成分含量的影响与生态适宜度研究
目的 为了研究地形因子对栀子中的6种成分含量的影响与生态适宜度.方法 利用HPLC/DAD测定栀子中京尼平苷酸、栀子苷、绿原酸、京尼平1-β-D龙胆二糖苷、西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量,应用spss19.0对6种成分的含量数据与地形因子(海拔、坡度和坡向)进行相关性分析,应用Maxengt模型和ArcGIS软件分析地形因子的数值以及权重.结果 京尼平1-β-D龙胆二糖苷含量与坡向相关性大,京尼平苷酸含量与坡向相关性大;绿原酸含量与海拔的相关性大;栀子苷含量与海拔相关性大;西红花苷-Ⅰ含量与坡度的相关性大;西红花苷-Ⅱ含量与坡度相关性大;当海拔为0～100m时,坡向为1～8.5时,坡度为0°～1°时适宜栀子的生长.结论 不同产地中栀子的6种成分含量不同,京尼平1-β-D龙胆二糖苷含量和京尼平苷酸含量与坡向有关,绿原酸含量和栀子苷含量与海拔有关,西红花苷-Ⅰ含量和西红花苷-Ⅱ含量与坡度有关.
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正交试验法优选结肠炎奇效颗粒水提部分的工艺研究
目的:优选结肠炎奇效颗粒的佳水煎工艺条件.方法:从煎煮方式、水煎因素水平的选择两方面进行试验,以京尼平苷酸的含量作为考核指标,采用L9(34)正交试验法确定佳水煎工艺.结果:结肠炎奇效颗粒的佳水煎工艺条件为加8倍量水,煎煮2 h,煎煮2次.结论:该制备工艺合理可行,其质量稳定,为结肠炎奇效颗粒的水提部分的佳提取工艺.
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HPLC测定结肠炎奇效颗粒中京尼平苷酸的含量
目的:建立结肠炎奇效颗粒中京尼平苷酸的HPLC测定方法.方法:色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6mm,5μm),以甲醇-1%醋酸溶液(10:90)为流动相,检测波长为254 nm,柱温为30℃,流速为1ml· min-1.结果:京尼平苷酸在0.306～3.666 μg范围内线性关系良好,相关系数为r=0.999 1,平均回收率为100.0%,RSD= 1.91% (n =6).结论:方法简便,结果准确,可用于结肠炎奇效颗粒的质量控制.
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斜率校正"一测多评法"同时测定杜仲中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂素二葡萄糖苷的含量
目的:建立斜率校正"一测多评法"同时测定杜仲中京尼平苷酸(GPA)、绿原酸(CHA)、京尼平苷(GP)、松脂素二葡萄糖苷(PDG)含量的方法.方法:以HPLC法含量测定为基础,CHA为对照,计算GPA、GP、PDG的斜率相对校正因子,并比较斜率校正"一测多评法"与外标法两种结果相关性,从而验证斜率校正"一测多评法"的准确性,终建立测定杜仲多种活性成分的斜率校正"一测多评法".结果:在一定的线性范围内,GPA、GP、PDG的斜率相对校正因子分别为:0.762 8,0.478 6,0.711 2,重复性良好.斜率校正"一测多评法"计算的含量值与外标法实测值相关性较好,56批杜仲样本中GPA、GP、PDG含量结果的相关系数均大于0.99.结论:建立的斜率校正"一测多评法"准确性高,可用于杜仲中GPA、CHA、GP、PDG活性成分的含量测定.
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超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定杜仲药材中5个指标成分
目的:建立超高效液相色谱串联质谱法同时测定杜仲药材中的京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷.方法:采用Waters BEH C18 (2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1％甲酸乙睛溶液-0.1％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),以多反应离子监测(MRM)检测.结果:京尼平苷酸、原儿茶酸、绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷分别在0.842～68.182,0.040～9.838,0.042～10.101,0.499～121.212,0.378～30.606μg·ml-1范围线性关系良好,平均回收率为93.15％～103.68％,RSD＜3％.精密度、重复性和稳定性良好.结论:本方法能简便有效的定量研究杜仲多种成分,为杜仲药材质量控制提供了新的方法.
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高效液相色谱法测定杜仲颗粒中京尼平苷酸和绿原酸的含量
目的:建立杜仲颗粒中两种活性成分京尼平苷酸和绿原酸快速、同时测定的方法.方法:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定,C18色谱柱(250 mm×4.6 mB,5 μm),甲醇-水-冰乙酸(14.5:85:0.5)为流动相,流速1 mL·min-1,柱温25℃,检测波长236 nm,灵敏度:0.08 AUFS,进样体积6μL.结果:该方法线性关系良好,京尼平苷酸和绿原酸的回收率分别为99.03%,99.99%,测定结果RSD分别为0.134%,1.72%.结论:该法快速、可靠、简单、灵敏度高.
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京尼平苷酸对大鼠缺血性脑损伤神经保护作用
目的 观察口服京尼平苷酸对缺血性脑损伤大鼠的保护作用.方法 SD大鼠随机分成四组,假手术组、脑缺血模型组、京尼平苷酸组和安理申对照组,每组10只.采用Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力;HE染色观察大鼠海马CA1区、皮质内锥体层、扣带回皮质层和皮质外颗粒层的神经元数量的变化.结果 水迷宫结果显示假手术组和脑缺血模型组大鼠平均逃避潜伏期分别为(31.81±9.51)s、(87.21±12.18)s;京尼平苷酸组大鼠平均逃避潜伏期为(45.48±15.04)s比脑缺血模型组明显缩短(P<0.01).HE染色结果脑缺血模型组相对于假手术组各脑区神经元总数显著降低,变性神经元数和变性率显著增加(P<0.01).京尼平苷酸组与脑缺血模型组相比较,CA1区、扣带回区、外颗粒层及内锥体层4个脑区的神经元总数均显著增加,变性神经元数及变性率均显著降低(P<0.01).京尼平苷酸组与安理申对照组比较,除在CA1区神经元总数方面前者高于后者(P<0.01)以外,其余各脑区指标的差异均无差异(P>0.05).结论 京尼平苷酸可以改善大鼠缺血性脑损伤,能减少缺血性脑损伤大鼠大脑皮质和海马神经元的缺血性坏死.
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正交试验优选前列舒康片提取工艺研究
目的:优选前列舒康片的提取工艺.方法:以浸膏得率、盐酸小檗碱和京尼平苷酸为评价指标,将溶剂倍数、溶剂种类、提取时间、浸泡时间等作为考察因素,通过正交试验优选出前列舒康片的提取工艺.结果:优选出前列舒康片中黄柏醇提工艺为黄柏粗粉加乙醇回流提取2次,第1次加7倍量60％乙醇提取1.5h,第2次加6倍量60％醇提取1h;车前子等药材水提工艺为加水煎煮2次,1次加8倍量水,浸泡1h,煎煮2h;第2次加6倍量水,煎煮1.5h.结论:通过正交试验优选出的前列舒康片提取工艺合理可行、重复性良好,可为前列舒康片的工艺研究提供参照.
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HPLC法同时测定矮林杜仲叶中6种成分含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定矮林杜仲叶中6种成分的含量.方法:采用Thermo BDS HYPER-SIL C18色谱柱(250mm ×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-0.05％磷酸(B)为流动相,梯度洗脱,程序化变波长,体积流量0.8 mL/min,柱温35℃.结果:桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、芦丁6种成分的质量浓度分别在1.0 ～ 500.0 μg/mL、5.0 ～ 600.0 μg/mL、4.0～300.0μg/mL、0.2～50.0 μg/mL、0.2～150.0μg/mL、0.1～ 100.0 μg/mL内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为102.3％、99.9％、100.8％、99.8％、100.6％、99.1％,其RSD分别为4.4％、0.6％、4.1％、1.0％、0.7％、5.0％.结果表明,不同采收期矮林杜仲叶中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸等主要有效成分的含量有明显差别.结论:该方法重复性好,可操作性强,可用于矮林杜仲叶中6种有效成分的含量测定,可较全面地反映不同采收时期矮林杜仲叶中有效成分的差异,通过对结果分析,8月底采收的矮林杜仲叶的整体质量好.
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甘草、牡蛎、续断与杜仲配伍对京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷煎出含量的影响
目的:建立杜仲水煎液中3种有效成分(京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷)的含量测定方法,考察药对“杜仲-甘草”、“杜仲-牡蛎”、“杜仲-续断”不同比例配伍过程中有效成分含量的变化规律,为杜仲临床配伍应用提供研究基础.方法:制备不同配伍比例(1∶0.5,1∶1,1∶2)杜仲与甘草、牡蛎、续断的合煎液,以杜仲单煎液为对照,采用HPLC-DAD法检测杜仲各样品中3种有效成分的含量,统计分析不同配伍对杜仲3种有效成分煎出含量的影响.结果:杜仲单煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量分别为0.649、0.069和0.440mg/g.与杜仲对照组比较,杜仲-甘草配伍水煎液中京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量均随甘草比例的增加而升高,绿原酸的煎出含量随甘草比例的增加而降低;杜仲-牡蛎配伍水煎液中京尼平苷酸的煎出含量随牡蛎比例的增加而升高,绿原酸的煎出含量随牡蛎的占比增加而降低,而松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量无显著性变化;杜仲-续断配伍水煎液中京尼平苷酸、绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的煎出含量均随续断比例的增加显著升高.结论:药对“杜仲-甘草”、“杜仲-续断”配伍,对杜仲有效成分煎出含量影响较大,表明中医临床疗效与中药药对配伍剂量有密切关系.
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UFLC法同时测定栀子中4种活性成分的含量
目的 建立超快速液相色谱(UFLC)法同时测定栀子中京尼平苷、 京尼平1-β-D-龙胆双糖苷、 京尼平苷酸和绿原酸的含量.方法 采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm);流动相为0.1%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~5 min,7%~12%B;5~11 min,12%~13%B);平衡时间为2 min;流速为0.4 mL·min-1;检测波长为240 nm;柱温为35℃.结果 京尼平苷、 京尼平1-β-D-龙胆双糖苷、 京尼平苷酸和绿原酸分别在20~200μg·mL-1(r=0.9999)、4.0~40μg·mL-1(r=0.9997)、4.0~40μg·mL-1(r=0.9999)和4.0~40μg·mL-1(r=0.9999)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.0%、99.6%、96.9%和98.7%(n=9).结论 该方法简便、 快速,重复性良好,可为栀子药材的质量控制提供依据.
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不同干燥方式对杜仲叶4种活性成分含量的影响
目的:考察不同干燥方式对杜仲叶中活性成分含量的影响,为建立杜仲叶在产地采收后的干燥加工方式提供参考.方法:取杜仲叶采用不同干燥方法[自然阴干72 h、自然晒干36 h、烘干(60℃6 h、80℃2 h、100℃1 h、120℃0.5 h)、微波真空冷冻干燥12 h、真空冷冻干燥12 h]对杜仲叶进行处理;采用高效液相色谱法同时测定样品中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷的含量,并与未处理的鲜品进行比较.结果:2种冷冻干燥后的样品与鲜品中的4种成分含量接近,并高于其他干燥方式处理的样品.结论:干燥方法对杜仲叶有效成分具有较显著的影响,微波真空冷冻干燥和真空冷冻干燥较自然阴干、自然晒干、烘干更能保留杜仲鲜叶中的活性成分.
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维药巴那都克布祖热颗粒中京尼平苷酸含量测定
目的 建立测定巴那都克布祖热颗粒剂中京尼平苷酸含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 色谱柱采用GEMINI C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),检测波长为254 nm,流速为1 mL/min,柱温为30℃,流动相为甲醇(A)-0.5％冰醋酸溶液(B),梯度洗脱.结果 制剂中京尼平苷酸进样量在0.206～2.581μg范围内与峰面积线性关系良好(r2=0.9999),平均加样回收率为99.75％,RSD为0.85％(n=6).结论 该方法方便简捷、快速准确,可用于维药巴那都克布祖热颗粒的质量控制.
关键词： 巴那都克布祖热颗粒剂 京尼平苷酸 高效液相色谱法 含量测定 质量标准
