首页 > 文献资料
-
LC-MS-MS测定配伍黄柏对知母中4种有效成分含量的影响
目的:建立高效液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)测定知母黄柏药对中芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量,研究不同配伍比例对4种成分含量的影响.方法:采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,3.5 μm),柱温30℃,流动相0.1％甲酸水-乙腈,流速0.25 mL· min-1,梯度洗脱;质谱条件为电喷雾(ESI)离子源,负离子多反应离子监测(MRM)用于定量测定.结果:芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ分别在5.05 ～ 404,5.3 ～ 424,5.05 ～404,20.8～1 664 μg·L-1线性关系良好(r≥0.999);平均回收率分别为100.6％,99.2％,99.1％,98.5％.知母单煎时芒果苷、知母皂苷AⅢ含量高;新芒果苷在知柏配伍比例1∶1时含量高;知母皂苷BⅡ的含量各配伍比例没有明显差异.结论:该方法快速、准确,适用于知母黄柏中4种成分的含量测定.知母与黄柏配伍比例不同,芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ的含量不同,配伍黄柏时对知母成分含量有影响.
-
知母皂苷AⅢ酶解工艺优选
目的:优选知母皂苷AⅢ的酶解工艺.方法:采用β-葡萄糖苷酶水解知母皂苷制备知母皂苷AⅢ,以知母皂苷AⅢ转化率为指标,通过单因素和正交试验考察反应温度、反应时间、pH及酶用量对知母皂苷AⅢ酶解工艺的影响.结果:佳酶解工艺条件为温度55℃,pH 5.0乙酸-乙酸钠缓冲液,酶用量600 U·g-1,反应时间3h.结论:优选的酶解工艺简单可靠,反应条件温和,适用于工业化生产.
-
HPLC-ELSD法同时测定河北产道地药材不同物候期知母中知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量
目的:建立同时测定知母药材中知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测法.研究不同物候期知母道地药材中2种皂苷类成分的积累动态,为佳采收期的制定、品质评价提供参考.方法:采用Thermo C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-水梯度洗脱,流速:1mL/min,柱温:25℃.ELSD检测器雾化器流速:2.8L/min,漂移管温度:100℃.结果:知母皂苷AⅢ在0.6950-4.1700μg范围内(r=0.9993),知母皂苷BⅡ在1.0175-6.1050μg范围内(r=0.9996),进样质量的对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系.知母皂苷AⅢ平均回收率为99.88％,RSD=2.34％;知母皂苷BⅡ平均回收率为103.66％,RSD=0.99％.结论:该方法简便、准确、可靠,可同时测定知母药材中2种皂苷类成分的含量.不同物候期知母道地药材中两种皂苷的含量存在显著差异.
-
知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤增殖生长的机制研究
考察知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤U87MG细胞增殖的作用及机制 分析.在裸鼠皮下荷瘤模型中,知母皂苷AⅢ组与模型组相比,显著降低瘤重.知母皂苷AⅢ呈剂量 依赖性抑制U87MG细胞的体外增殖;呈剂量依赖性降低β-Catenin,Cyclin D1,Bcl-2的蛋 白表达,同时升高p21在蛋白和基因水平的表达;降低ERK磷酸化水平,抑制β-Catenin的核 转移,同时提高p38和JNK蛋白的磷酸化水平.联用JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580后可逆 转知母皂苷AⅢ处理而提高的p21和降低的β-Catenin的蛋白表达.知母皂苷AⅢ部分通过干预 MAPK及Wnt/β-Catenin信号通路而抑制脑胶质瘤U87MG的增殖.
-
HPLC-ELSD法同时测定知母药材中2种皂苷含量
目的:用HPLC-ELSD同时测定知母药材中2种皂苷的含量.方法:采用Kromasil C12柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温为30℃.蒸发光散射检测器漂移管温度50℃,蒸发温度70℃,以氮气为雾化气,压力为1.03×105Pa.结果:知母皂苷C在0.310～3.10 μg,知母皂苷AⅢ在0.323～3.23μg,进样质量的对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系.知母皂苷C回归方程为lgA=1.25421gM+5.734.7,r=0.9995,测定的平均回收率(n=6)98.1%,RSD2.0%;知母皂苷AⅢ回归方程为lgA=1.32841gM+5.937,r=0.9996,测定的平均回收率(n=6)97.3%,RSD1.5%.结论:建立的含量测定方法准确、快速,是控制知母药材质量较理想的方法.对我国北方主要知母产地药材中两种皂苷含量测定和比较表明不同产地野生知母质量差异较大.
-
高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定黄连清胃丸中栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量
目的:应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定黄连清胃丸中栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量.方法:采用C18色谱柱(4.6 mn×250 mm,5μm);流速为0.9 ml/min;乙腈-水(30∶ 70)为流动相;ELSD漂移管温度为90℃;载气(N2)流速为2.9 SLPM/min.结果:栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ进样量分别在0.061 8～1.236 0μg(r=0.999 2)、0.047 6～0.952 0 μg(r =0.999 7)和0.184 2～3.684 0 μg(r =0.999 3)时进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.67％、98.18％和98.36％,RSD分别为1.09％、1.01％和0.98％(n=6).结论:本方法测定结果准确、灵敏、重复性好.
关键词： 黄连清胃丸 栀子苷 知母皂苷AⅢ 知母皂苷BⅡ 高效液相色谱-蒸发光散射检测器法 -
不同干燥加工方法对知母化学成分含量的影响
目的:揭示各种干燥加工方法对知母有效成分含量的影响.方法:分别采用晒干、阴干、烘干、远红外干燥、微波干燥的方法对知母进行干燥加工,以菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ、芒果苷、新芒果苷为指标,通过高效液相色谱法(HPLC),分析各种干燥加工条件下知母中各类指标成分的含量变化情况.其中菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ采用高效液相蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)进行检测,用外标两点法对数方程计算含量,芒果苷、新芒果苷采用高效液相紫外检测法(HPLC-UV)检测.结果:采用烘干、远红外干燥、微波干燥方法加工后,知母菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ、芒果苷含量与晒干、阴干相比均有不同程度上升,新芒果苷含量与晒干、阴干相比有所下降.结论:从有效成分保存方面考虑,不同干燥方法的优劣顺序为微波干燥 > 远红外干燥 > 烘干 > 晒干≈阴干.
-
知母皂苷AⅢ药理活性及机制研究进展
中药知母是目前常用的中药材,具有抗菌、抗炎等广泛的药理作用,其主要成分知母皂苷也一直是国内外研究的热点.而作为知母皂苷的主要成分,知母皂苷AⅢ的药理学研究相对较少,本文就近年来对知母皂苷AⅢ的药理作用及机制进行阐述,希望能对深入研究与开发知母皂苷AⅢ的药效和药理作用提供参考帮助.
-
星点设计-效应面法优化知母盐制的炮制工艺
目的 采用星点设计-效应面法以进一步优化盐制知母的炮制工艺,保证临床疗效.方法 以具有降血糖作用的活性成分知母皂苷B-Ⅲ、知母皂苷A-Ⅲ、芒果苷的总含量为指标.以加盐量、炒炙时间、炒炙温度为考察因素,采用星点设计-效应面法(CCD)优选炮制条件,并进行预测分析.结果 优炮制工艺为加盐量3g,炒炙12min,炒炙温度为150℃.结论 本次实验使用盐制知母,并采用星点设计-效应面法优化知母的盐炙工艺,并且预测性良好.
-
盐酸阿霉素和知母皂苷AⅢ共载脂质体的制备及包封率的测定
目的 建立盐酸阿霉素和知母皂苷AⅢ共载脂质体包封率的测定方法 .方法 采用薄膜分散法制备盐酸阿霉素和知母皂苷AⅢ共载脂质体,分别用透析法、微柱离心法和超高速离心法分离脂质体和游离药物,采用HPLC法测定游离药物含量和脂质体中的药物含量,计算得出盐酸阿霉素和知母皂苷AⅢ的包封率.结果 确定盐酸阿霉素和知母皂苷AⅢ共载脂质体处方为DPPC-DSPE-PEG2000-TAⅢ-DOX比例为5∶1∶1∶1,采用薄膜分散法制备的脂质体大小适中,粒径为(55.4±0.40) nm,PDI为0.20±0.02,电位为(-17.4±0.6)mV;在所选的色谱条件下,脂质体的其他组分不干扰样品的测定,盐酸阿霉素在24.9～498.0 μtg/mL (r=0.999 9),知母皂苷AⅢ在50.55～1 011.00 μg/mL (r=0.999 6)线性关系良好.研究结果表明微柱离心法能有效地将盐酸阿霉素和知母皂苷AⅢ双载脂质体与游离药物分离,测得的包封率分别为(85.12±1.27)％、(76.51±0.46)％.结论 薄膜分散法可用于盐酸阿霉素和知母皂苷AⅢ共载脂质体的制备;微柱离心法准确度高、重复性好并快捷方便,可用于包封率的测定.
-
HPLC-MS法测定知母盐炙前后8种成分量变化
目的 建立HPLC-MS法同时测定知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷Ⅰ、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ 8种化学成分量的方法,分析炮制前后各成分量的变化.方法 色谱柱为Agilent SB-C18柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温30℃,进样量10μL.质谱采用大气压电喷雾离子源,选择性负离子模式监测.结果 所测定的8种成分在各自的线性范围内均具有良好的线性关系(r≥0.999 7);平均回收率在97.55％～103.01％,RSD＜2.80％.不同产地知母8种成分的量差异较大,其中芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ的量较高.知母盐炙后新芒果苷、芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ量变化不明显,知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷Ⅰ量下降,知母皂苷BⅢ量上升.结论 该方法简单、灵敏、准确,知母盐炙前后多种成分量发生变化.
-
知母皂苷AⅢ对白血病细胞HL-60增殖、凋亡和细胞周期的影响及机制探讨
目的 探讨知母皂苷AⅢ对人白血病细胞HL-60增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制.方法 对照组应用未加药的完全培养基培养,实验组分别采用10、50、100 nmol/L知母皂苷AⅢ处理,分别采用水溶性四氮唑(WST-1)法、流式细胞术双标法、分光光度法、流式细胞术单标法及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞存活率、凋亡率、半胱天冬酶-3 (Caspase-3)活化水平、细胞周期分布及相关通路蛋白表达情况.结果 知母皂苷AⅢ在10～100 nmol/L范围内可抑制HL-60细胞的增殖,且与对照组相比,实验组HL-60细胞的存活率均降低(P＜0.05);与对照组相比,实验组处理24、48 h后的凋亡率及Caspase-3活化率均升高,处理48 h后的G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低(P＜0.05);与对照组相比,100 nmol/L知母皂苷AⅢ处理后磷酸酶基因(PTEN)蛋白水平升高,而蛋白激酶B (Akt)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和原癌基因(C-myc)水平均降低(P＜0.05).结论 知母皂苷AⅢ对人白血病细胞HL-60有细胞毒性作用,主要体现在抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期阻滞方面,其机制可能与该药物抑制磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K) /Akt和Wnt/β-catenin通路有关.
-
HPLC-ELSD同时测定知母药材中4种主要皂苷的含量
目的 建立同时测定知母药材中4种主要皂苷成分的HPLC-ELSD方法.方法 采用Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以水(冰醋酸调节pH 3.3)(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,0～8 min,12％～23％ B;8～25 min,23％B；25 ～ 35 min,23％ ～45％B；35～ 40 min,45％ ～95％B.蒸发光散射检测器漂移管温度55℃,以氮气为雾化气,压力为4.0 Bar.结果 知母皂苷B、知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷A Ⅲ浓度分别在42.10～ 252.6 μg/ml(r=0.9993)、48.80～292.8 μg/ml(r=0.999 1)、192.2 ～1 153 μg/ml(r=0.999 7)、8.512 ～85.12μg/ml(r=0.998 5)的范围内呈良好的线性关系.4种成分精密度试验RSD＜ 1％,48 h内稳定性RSD＜1％,加样回收率为96.04％ ～ 102.8％.结论 该含量测定方法简便,分离效果好,能同时测定知母皂苷B、知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ和知母皂苷AⅢ 4种有效成分的含量,结果准确可靠.
-
一测多评法测定知母中皂苷类成分的含量
目的:采用一测多评法(QAMS)同时测定知母中5种皂苷类成分的含量.方法:以知母药材为研究对象,建立知母皂苷BⅠ与知母皂苷B、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ和知母皂苷C的相对校正因子,并用该校正因子进行含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定药材中该5种皂苷类成分的含量,并比较两者差异,以验证一测多评法的准确性和可行性.结果:一测多评法计算的10批知母中5种皂苷含量,与外标法比较,差异较小(相对误差＜5％).结论:采用一测多评法对知母中的皂苷类成分进行测定,其方法操作简便,测定结果准确,实现了在对照品缺失情况下的含量测定,为后续中药的多指标、多靶点的质量标准评价研究提供了参考依据.
-
知母皂苷AⅢ对黑色素瘤B16细胞生长和Bax，Bcl-2 mRNA的影响
目的：观察知母皂苷AⅢ对体外培养黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养B16细胞，分别以浓度为1，2，4，8，16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ作用24 h，通过MTT比色法检测对细胞生长的影响；倒置显微镜观察对细胞形态的影响；Annexin V-FITC/PI双染流式检测对细胞凋亡的影响；逆转录PCR检测对细胞凋亡相关基因Bax，Bcl-2的影响。结果8，16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ明显抑制细胞增殖，24 h的半数抑制浓度（IC50）为10.16μmol·L-1；细胞形态显示16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ使细胞体积缩小变圆，细胞减少。与对照组比较，10μmol·L-1知母皂苷AⅢ细胞凋亡率为（4.83±0.25）%（P<0.01），而Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05）。结论体外实验显示知母皂苷AⅢ能明显抑制B16细胞生长，并能诱导部分细胞发生凋亡。由于诱导细胞凋亡率与24 h的IC50有一定差距，因此知母皂苷AⅢ对B16细胞生长的影响可能不仅仅与激活凋亡信号通路有关，还与其他细胞生长信号通路有关。
-
知母皂苷AⅢ对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究知母皂苷AⅢ对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响.方法:体外培养HUVECs,分别以浓度为0、1、2、4、8 μmol/L的知母皂苷AⅢ作用24、48、72 h,通过MTT比色法检测细胞生长程度;倒置显微镜观察细胞形态.流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:8 μmol/L知母皂苷AⅢ作用24、48、72 h可明显抑制HUVECs增殖,IC50分别为7.2、4.0、2.0 μmol/L;随着知母皂苷AⅢ作用时间的延长和浓度的增加,HUVECs数目逐渐减少,细胞开始出现空泡、固缩现象;8μmol/L知母皂苷AⅢ作用于HUVECs,细胞凋亡率为(4.03±0.41)％.结论:知母皂苷AⅢ可明显抑制HUVECs的生长,并诱导部分细胞发生凋亡.
