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基于HPLC指纹图谱研究清炒和盐炙对泽泻中化学成分的影响
目的 建立生泽泻、清炒泽泻和盐泽泻的HPLC指纹图谱,通过比较三者的差异考察清炒和盐炙对泽泻中化学成分的影响.方法 样品用甲醇5 mL超声提取30分钟,采用HPLC建立指纹图谱,色谱条件为Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水梯度洗脱,检测波长208 nm,柱温25℃,流速1.0 mL/min,分析时间120分钟.分别采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)"和SPSS软件对谱图进行相似度分析和聚类分析.结果 生泽泻、清炒泽泻和盐泽泻的HPLC指纹图谱的相似度分别为0.905～0.948、0.902～0.955、0.904～0.960,三者分别有14、15和15个共有峰,其峰面积存在不同程度的差异.其中,生泽泻的2号峰在炮制品中未见,而炮制品中出现的8和16号峰为未知成分,尚待进一步研究.在聚类分析中可聚为两大类,生泽泻S1～S10号样品聚为一类,清炒泽泻C1～C10和盐泽泻Y1～Y10号样品聚为一类.结论 清炒和盐炙对泽泻化学成分的组成和含量均可产生影响,其中盐炙的影响明显大于清炒.
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益智仁盐炙对水负荷多尿模型大鼠缩尿作用的研究
目的:通过比较盐炙益智仁对水负荷多尿模型大鼠的缩尿作用,进一步验证益智仁盐炙人肾传统炮制理论的正确性.方法:SD大鼠按尿量、体重均匀分成正常组、模型组、缩泉丸组、益智仁石油醚部位生品(低、中、高剂量)组、盐炙品(低、中、高剂量)9组,缩泉丸组剂量为1.5 g·kg-1,益智仁石油醚部位生品和盐炙品低、中、高剂量分别为含生药4.5,9,18g·kg-1.各组按10 mL·kg-1体积灌胃给药1周后,用1％盐水造成大鼠水负荷多尿模型.采用代谢笼法测定大鼠尿量、首次排尿时间,并计算6h排泄率；放免法测定大鼠血清精氨酸加压素(AVP)含量.结果:与模型组相比,益智仁生、炙品(除生品低剂量组外)能显著降低0～1h段大鼠尿量(P＜0.01),延长大鼠首次排尿时间(生品高剂量组P＜0.05,盐炙品低、中、高剂量组P ＜0.01),显著降低大鼠6h排泄率(生品高剂量组P＜0.05,盐炙品高剂量组P＜0.01).与模型组相比,各组AVP含量均升高,其中生品高剂量、盐炙品中、高剂量组有极显著性差异(P＜0.01).结论:益智仁石油醚部位具有缩尿作用,盐炙能增强其作用.
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不同产地泽泻盐炙前后成分差异及利尿作用的研究
目的:通过研究不同产地泽泻盐炙前后水提液中成分及其利尿作用的差异,探讨盐炙泽泻利尿作用与成分变化之间的关系.方法:利用代谢笼法研究不同产地泽泻盐炙前后水提液对正常大鼠利尿作用的影响.采用SD大鼠,分为6组,即空白对照组(蒸馏水),阳性对照组(呋噻米,48 mg· kg -),不同产地泽泻生品组(按生药量计10 g·kg-1),不同产地泽泻盐炙品高、中、低剂量组(10,5,2.5 g·kg-1).ig,20 mL· kg -,给药后每隔1h分别收集并记录尿量1次,共8h.利用薄层色谱法和高效液相色谱法比较不同产地泽泻盐炙前后水提液的成分差异.结果:薄层色谱结果显示不同产地的泽泻生品成分种类与含量有较大差异,盐炙后成分的种类与含量发生较大改变.高效液相色谱结果表明泽泻成分有4个主要峰,但不同产地泽泻盐炙前后各主要峰的峰面积无明显差异.大鼠代谢笼法结果表明,福建产泽泻盐炙前后均能明显减少正常大鼠排尿量(P＜0.05),大抑制率达60.2％；江西产泽泻生品对正常大鼠排尿量无明显影响,而盐炙品能明显减少正常大鼠排尿量(P＜0.05),大抑制率为72.6％；广西和四川产泽泻盐炙前后均能明显增加正常大鼠排尿量(P＜0.05),大增加率分别为64.8％,56.6％.结论:不同产地的泽泻盐炙前后水提物成分发生改变可能是其利尿作用差异的主要原因.
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益智仁盐炙前后分别组成缩泉丸的缩尿部位指纹图谱比较
目的:通过比较益智仁盐炙前后组成缩泉丸缩尿部位的指纹图谱,从物质基础上揭示益智仁盐炙后增强缩泉丸缩尿药效的原因.方法:采用HPLC,流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长230 nm.记录10批益智仁盐炙前后分别组成缩泉丸的石油醚部位HPLC图谱,建立相应指纹图谱,标定特征共有峰并比较其平均相对峰面积和平均相对保留时间.结果:益智仁盐炙后组成缩泉丸时,有11个共有峰平均相对面积明显增加,包括对缩尿药效贡献较大的1号,4号(teuhetenone A),5号(7-表-香科酮),7号色谱峰,增加率分别为123.08％,90.91％,53.33％,43.75％.结论:对缩尿作用贡献较大的4个成分含量的明显增加极有可能与缩泉丸缩尿作用的增强紧密相关,此外其他7个成分含量也有明显增加.
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缩泉丸中益智仁盐炙前后对肾阳虚大鼠肾脏功能的改善作用
目的:通过分析缩泉丸中益智仁盐炙前后对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏功能的改善作用及肾脏水通道蛋白2(AQP-2)表达的影响,探讨“盐炙入肾-肾主水”的作用机制.方法:采用腺嘌呤致肾阳虚多尿大鼠模型,比较缩泉丸中益智仁盐炙前后对肾阳虚多尿模型大鼠脏器系数、尿量,血中肌酐、尿素氮和β2-微球蛋白,肾脏AQP-2 mRNA和蛋白表达差异的影响.结果:与模型组相比,给药组能降低大鼠尿量,对各脏器指数的变化有一定抑制作用,降低血清肌酐、尿素氮和β2-微球蛋白含量的异常升高;提高AQP-2 mRNA和蛋白的表达,且与生品组相比,盐炙品组降低尿素氮,β2-微球蛋白含量和提高AQP-2mRNA和蛋白的表达作用显著增强.结论:益智仁盐炙后纳入缩泉丸中能较好地改善模型大鼠的肾脏功能和AQP-2的表达,盐炙后作用明显增强,证实了缩泉丸中益智仁盐炙增强疗效的科学性.
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基于多指标成分探究菟丝子盐炙方法的影响因素
目的:考察食盐和加热两个因素对菟丝子盐炙方法的影响,为进一步探究菟丝子盐炙的作用机制提供理论依据.方法:采用方差分析法对菟丝子不同炮制品中总黄酮、总多糖、金丝桃苷、槲皮素的含量变化进行比较.结果:菟丝子5种炮制品间各化学成分含量均有显著性差异(P＜0.0001),菟丝子加入食盐或加热后总黄酮、总多糖、槲皮素含量明显升高.结论:食盐和加热两个因素对菟丝子盐炙方法均有影响.
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补骨脂盐炙前后对肾阳虚大鼠肝肾功能及水通道蛋白表达的影响
目的 观察补骨脂盐炙前后对肾阳虚大鼠肝肾功能及口腔唾液腺水通道蛋白5 (AQP5)、结肠AQP4、肾脏AQP2基因表达的影响,分析阐明盐炙缓和补骨脂毒副作用的机制.方法 采用sc氢化可的松的方法复制大鼠肾阳虚模型,以化学试剂法测定大鼠血清中总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)的量,荧光定量PCR (qRT-PCR)法测定口腔唾液腺AQP5、结肠AQP4、肾脏AQP2 mRNA的表达.结果 与模型组比较,补骨脂生品和盐炙品组大鼠血清中的ALT、AST量显著升高,Alb量显著降低(P＜0.05);补骨脂盐炙品组ALT、AST水平低于生品组;各给药组BUN及Scr水平显著高于模型组(JP＜0.05).qRT-PCR结果显示,与对照组比较,模型组大鼠AQP2、AQP4 mRNA表达明显降低(P＜0.05),AQP5的mRNA表达明显增加(P＜0.05);与模型组比较,补骨脂生品组大鼠AQP4 mRNA表达显著升高(P＜0.05),AQP5 mRNA表达显著降低(JP＜0.05);与补骨脂生品组比较,补骨脂盐炙品组AQP2、AQP5 mRNA表达明显升高(P＜0.05),AQP4 mRNA表达明显降低(P＜0.05).结论 补骨脂盐炙后可缓解药物对肾阳虚大鼠肝肾功能的副作用;同时缓解生品的燥性,盐炙对药物燥性的缓解作用可能与其对体内AQP的基因表达调控有关.
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HPLC-MS法测定知母盐炙前后8种成分量变化
目的 建立HPLC-MS法同时测定知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷Ⅰ、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ 8种化学成分量的方法,分析炮制前后各成分量的变化.方法 色谱柱为Agilent SB-C18柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温30℃,进样量10μL.质谱采用大气压电喷雾离子源,选择性负离子模式监测.结果 所测定的8种成分在各自的线性范围内均具有良好的线性关系(r≥0.999 7);平均回收率在97.55％～103.01％,RSD＜2.80％.不同产地知母8种成分的量差异较大,其中芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ的量较高.知母盐炙后新芒果苷、芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ量变化不明显,知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷Ⅰ量下降,知母皂苷BⅢ量上升.结论 该方法简单、灵敏、准确,知母盐炙前后多种成分量发生变化.
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川牛膝酒炙和盐炙前后HPLC化学指纹图谱及其主要药效成分量变化研究
目的 揭示川牛膝药材经酒炙和盐炙前后的化学成分变化规律,为修订和完善川牛膝质量标准提供参考.方法 采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,0.1％磷酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,检测波长266 nm,体积流量0.5 mL/min,建立HPLC指纹图谱,记录各色谱峰的保留时间和峰面积数据.采用对照品指认主要色谱峰物质,采用向量夹角法计算指纹图谱相似系数,采用主成分分析和聚类分析方法进行模式识别.结果 从24批次样品中一共提取出25个主要色谱峰,指认了其中的葛根素、杯苋甾酮、大豆苷元3个色谱峰.主成分分析、聚类分析以及相似度结果显示,酒炙和盐炙对川牛膝化学成分的整体组成与其量水平具有显著影响.葛根素、杯苋甾酮、大豆苷元3个已知的药效成分在经酒炙后其量均未得到显著提升,经盐炙后仅有葛根素的量得到一定程度地提升.结论 现行药效指标成分对于川牛膝酒炙品和盐炙品的质控作用较弱,有关川牛膝炮制品的质控指标成分还需进一步筛选.实验所建立的HPLC化学指纹图谱及其分析方法可以用于川牛膝生品、酒炙品、盐炙品之间的鉴定及其质量控制.
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炮制时间对盐补骨脂中10种化学成分的影响
目的 建立同时测定补骨脂Psoralea corylifolia中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查耳酮、补骨脂宁、新补骨脂异黄酮和补骨脂酚10种化学成分的方法,并探讨炒制时间对盐补骨脂中10种成分的影响.方法 采用UPLC法,色谱条件:C18柱(50 mm×4.6 mm,1.8μm),流动相为乙腈-水,采用梯度洗脱,体积流量1 mL/min,检测波长250 nm,柱温30℃.结果 被测定的10种成分色谱峰在15min分析时间内均有良好的分离度,精密度RSD均小于3％;在室温条件下24h内稳定;各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系(r≥0.997 0);平均加样回收率96％～105％,RSD均小于3％.结论 本方法操作简便,快速,测定结果准确可靠,可用于补骨脂的质量控制.随炒制时间的延长,香豆素类成分呈现先降后升再降趋势,黄酮类、补骨脂酚及10种成分总量有降低趋势.
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“入盐走肾”理论的现代研究
“入盐走肾”理论是指导中药炮制的基本理论之一.近些年来,学者围绕盐炙中药做了大量研究工作,有力地推动了对“入盐走肾”炮制理论的科学阐释.从“入盐走肾”角度就近些年来盐炙中药研究进展进行综述,并对目前研究中存在问题进行分析,提出了盐炙中药的研究思路.
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HPLC法测定盐炙前后知母中新芒果苷、芒果苷和异芒果苷
目的：建立HPLC法同时测定盐炙前后知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷，并比较盐炙前后3种成分的差异。方法采用HPLC法，Ecosil色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm），流动相乙腈–0.2%冰醋酸，梯度洗脱，体积流量1.0 mL/min，检测波长258 nm，柱温室温，进样量10μL。结果新芒果苷、芒果苷、异芒果苷分别在0.8600～17.2000μg、0.8065～16.1300 μg、0.0390～0.7800 μg与峰面积的线性关系良好；平均回收率分别为98.32%、98.30%、97.27%，RSD值分别为0.87%、0.74%、0.71%（n=6）。知母盐炙后新芒果苷、异芒果苷的量减少，而芒果苷的量增加。结论该方法准确、专属性强、灵敏度高，可用于知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的质量控制方法。新芒果苷、芒果苷之间可能在炮制过程中发生了转化，可为进一步研究盐知母炮制机制提供参考。
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不同炮制方式对杜仲品质的影响
目的 对盐炙、酒炙、蜜炙、清炒、土炒等多种杜仲炮制方法进行比较,考察不同辅料炮制对杜仲品质的影响.方法 以松脂醇二葡萄糖苷等6种有效成分、醇溶性浸出物量和损耗率作为评价指标,采用权重系数综合评分比较不同辅料炮制对杜仲品质的影响.结果 辅料对杜仲炮制品的质量有显著影响,盐炙、清炒、酒炙和糯米炙法所得杜仲成品综合评分高于杜仲原药材,指标成分含量高、损耗少、浸出物得率高.结论 杜仲炮炙采用多的盐炙法、清炒法和制炭炮制方法所得炮制品质量较优,现今使用的炮制方法合理.
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不同产地泽泻盐炙前后水提液中成分及其利尿作用分析
目的：探讨不同产地泽泻盐炙前后水提液中成分及其利尿作用的差异。方法：抽选福建、江西、四川、广西四个地方的泽泻为研究材料，使用薄层色谱法定性实验以及高效液相色谱法定量试验分析上述产地的泽泻在盐炙前后水提液成分的差异。同时本次研究以SD系列大鼠为研究对象，将其随机分为4组使用不同产地的泽泻生品、炙品对大鼠进行代谢笼法实验，测定大鼠尿量变化差异。结果：相较于空白对照组，同一时间广西生品给药后1～3h、6h可促使大鼠排尿量明显增加（P＜0.05），而四川生品只是在给药之后的1h促使大鼠排尿量增加，江西生品对大鼠排尿量没有明显的影响（P＞0.05），福建生品给药1～2h后可促使大鼠排尿量明显减少（P＜0.05）。广西泽泻盐炙品可促使大鼠排尿量增加，四川泽泻盐炙品可促使大鼠排尿量明显增加，而江西与福建泽泻盐炙品可促使大鼠排尿量明显减少（P＜0.05）。结论：不同产地的泽泻生品均无长时间的利尿效果，但不同产地的泽泻盐炙品则具有不同的利尿效果。
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盐炙前后关黄柏多糖基本含量测定及对免疫功能的影响
目的:比较盐炙前后关黄柏多糖中总糖、蛋白及糖醛酸含量,考察对小鼠免疫功能的影响,以探讨关黄柏多糖组分的盐炙机理.方法:采用苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、硫酸-咔唑法分别测定总糖、蛋白及糖醛酸含量,采用经典小鼠免疫实验以检测盐炙前后总多糖对小鼠免疫功能的影响.结果:盐炙前后关黄柏多糖总糖、蛋白及糖醛酸含量具有一定差异,关黄柏多糖中剂量及盐炙品多糖中、高剂量能降低小鼠碳粒廓清指数;盐炙关黄柏多糖中、高剂量对DNFB所致迟发型超敏反应有明显的抑制作用;盐炙关黄柏多糖中、高剂量能明显降低小鼠溶血素抗体生成能力且呈量效关系.结论:关黄柏经盐炙后多糖类成分发生明显变化,且盐炙前后关黄柏多糖能从非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫方面抑制小鼠的免疫功能,盐炙后效果更显著,说明关黄柏方法中盐炙对于发挥免疫抑制功能有较重要的作用.
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车前子盐炙工艺的优选
目的:对车前子盐炙工艺进行优化.方法:利用正交实验设计L9(34)优化炮制工艺.评价指标选用京尼平苷酸、毛蕊花糖苷.结果:车前子佳盐炙工艺是取净车前子,炮制温度160～ 180℃,有爆鸣声,香气溢出时喷洒浓度5％盐水,加其重量40％(mL/100 g)的盐水,炮制7 min,取出,自然放干,放凉.结论:本实验方法更具体、完善、为车前子盐炙工艺的优化奠定了基础.
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正交法优选盐炙泽泻的佳炮制工艺
目的:优选盐炙泽泻的佳炮制工艺,制定合理的炮制工艺参数.方法:以24-乙酰泽泻醇A及23-乙酰泽泻醇B的含量为指标,分别选择盐用量,炒制温度和炒制时间作为考察因素,采用正交实验法,对泽泻的炙制工艺进行优选.结果:炒制温度对泽泻中两种泽泻醇的含量有显著性影响,佳炮制工艺为每30g药材,用12mL盐水(含0.6g盐),闷润5h,在110℃2下炒制35min.结论:盐炙泽泻的佳炮制工艺合理可行.
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盐炙对关黄柏化学成分溶出的影响
目的 考察盐炙对关黄柏水煎液中主要生物碱类及柠檬苦素类成分溶出的影响.方法 采用HPLC法比较用分析纯NaCl、MgCl2、KCI和食盐炮制的关黄柏样品中3种主要生物碱小檗碱、药根碱、巴马汀的峰面积.色谱柱:Diamonsil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈(A)-体积分数为0.1％的磷酸溶液(B)(梯度洗脱程序:0～20 min:90％ B～65％B,20～35min:65％ B～50％ B),流速:0.8 mL ·min-1,检测波长:345 nm.同时采用分光光度法测定水煎后药渣中柠檬苦素类成分的含量.结果 不同种类的盐炮制的关黄柏中生物碱类成分的峰面积均有变化.药液中的柠檬苦素成分含量也均有变化.结论 盐炙对关黄柏中主要成分的水中溶出有较大影响,为阐明盐炙的炮制机理提供一定的依据.
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杜仲生品及盐炙品HPLC指纹图谱比较研究
目的:比较研究杜仲盐炙前后HPLC指纹图谱的变化规律.方法:采用HPLC法研究杜仲盐炙前后的指纹图谱.色谱柱为SP-120-5-ODS-AP(150mm×4.60mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水线性梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,检测波长为230nm,进样量为5μL,柱温为25℃.结果:杜仲生品指纹图谱中标出共有指纹峰15个,杜仲盐炙品则标示出16个共有峰.结论:杜仲经盐炙后HPLC指纹图谱指纹峰数有所增加,且大部分峰面积亦有增加趋势,可以认为杜仲盐炙后化学成分发生了一定的质变和量变.
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益智盐炙前后挥发油化学成分及抗氧化活性的比较研究
目的:比较益智盐炙前后挥发油化学成分及抗氧化活性的差异,探讨盐炙对益智挥发油成分及抗氧化活性的影响.方法:采用水蒸气蒸馏法提取益智挥发油,气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对其定性分析,气相色谱(GC)对其中的有效成分圆柚酮进行含量测定,DPPH法测定其抗氧化活性.结果:益智生品检出77个峰,鉴定了其中的38个峰,盐炙品检出94个峰,鉴定了34个峰,生品与盐炙品有36个共有峰;生品和盐炙品挥发油中圆柚酮的含量分别为0.9659mg/g和0.6498mg/g,清除DPPH自由基的IC50分别为0.195g/ml和0.147g/ml(相当于生药量).结论:益智盐炙后,药材中挥发油含量、组成和组分的相对含量,圆柚酮的含量均发生了较大的变化,抗氧化活性增加,研究为揭示其盐炙机理提供了一定的依据.
