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不同剂量亚砷酸钠染毒大鼠多药耐药相关蛋白2表达水平的变化
目的观察不同剂量亚砷酸钠染毒大鼠肝细胞膜转运蛋白-多药耐药相关蛋白2(multidrugresistance-associatedprotein2,MRP2)表达水平的变化及与砷代谢的关系.
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茵黄合剂对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症大鼠胆汁酸转运蛋白MRP2与BSEP表达的影响
目的:观察茵黄合剂对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)大鼠胆汁酸转运蛋白多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)与胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)表达的影响,探讨茵黄合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症可能的分子机制.方法:运用雌孕激素联合的方法建立孕鼠妊娠肝内胆汁淤积症模型,随机分为正常组、模型组、茵黄合剂低剂量组(9 g·kg-1·d-1,ig)和茵黄合剂高剂量组(18 g·kg-1 ·d-1,ig),分别给予生理盐水、低剂量与高剂量的茵黄合剂5d,取血,检测血清总胆汁酸(total bile acid,TBA)、总胆红素(total bilirubin,TBil)、丙氨酸转氨酶(alanine transarninase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性,留取肝脏组织,置于液氮中保存,分别运用实时定量PCR法及蛋白免疫印迹法检测胆汁酸转运蛋白MRP2 BSEP mRNA与蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TBA,TBil水平增加,MRP2,BSEP mRNA与蛋白表达水平降低(P＜0.01),模型组ALT,AST含量与正常组比较虽有增加,但差异无统计学意义.与模型组比较,茵黄合剂低、高剂量均能降低妊娠肝内胆汁淤积症模型大鼠血清TBA,TBil水平(P＜0.01),并且可明显增加肝脏组织MRP2,BSEPmRNA与蛋白表达水平,P＜0.01.结论:茵黄合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症的分子机制可能是通过增加肝脏组织胆汁酸转运蛋白MRP2,BSEP,mRNA与蛋白表达水平实现的.
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京尼平苷酸对siRNA介导BRL-3A细胞中FXR基因沉默后MRP2和BSEP表达的影响
目的:通过siRNA干扰法尼酯衍生物X受体(FXR)基因沉默与否考察京尼平苷酸(GPA)对BRL-3A细胞中多药耐药相关蛋白2(MRP2)和胆汁酸转运体胆盐输出泵(BSEP)的影响.方法:运用RT-PCR检测siRNA介导FXR沉默结果和GPA对BRL-3A细胞中FXR、MRP2和BSEP基因水平的影响;Western blot检测FXR被沉默后、以及GPA对BRL-3A细胞中FXR沉默与否,对FXR、MRP2和BSEP蛋白水平的影响.结果:4mmol/L和1mmol/L浓度的GPA可以上调BRL-3A细胞中FXR、MRP2和BSEP基因和蛋白的表达水平,且与GPA的剂量呈正相关,在统计学上有显著性差异(P＜0.01,P＜O.05);4mmol/L和lmmol/L浓度的GPA可以逆转因siRNA-FXR沉默引起的FXR、MRP2和BSEP基因和蛋白水平降低,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),且以GPA呈剂量正相关.结论:FXR的沉默可下调胆汁酸转运体MRP2和BSEP基因和蛋白的表达,GPA在体外可通过上调FXR来上调MRP2和BSEP基因和蛋白的水平.
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NRF2与MRP2在原发性胆囊癌中的表达
目的 检测核因子E2 p45相关因子2(Nuclear factor-erythroid 2 p45-related factor 2,NRF2)与多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)在原发性胆囊癌组织中的表达,探讨其在胆囊癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化SP法检测59例原发性胆囊癌组织中NRF2和MRP2的蛋白表达水平.结果 原发胆囊癌组织中NRF2和MRP2表达的强阳性率分别为76.3%和74.6%.随着转移程度、Nevin分级以及病理分级的增加,NRF2和MRP2的强阳性表达率增加,且差异具有统计学意义(P＜0.05);两者的强阳性表达与年龄、性别等临床特征无相关性;NRF2和MRP2表达之间具有相关性(r=0.589,P＜0.05).结论 NRF2和MRP2在原发性胆囊癌组织存在高表达且具有相关性,在胆囊癌的发生、发展中发挥作用.
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rhGH上调Mrp2表达及促胆红素转运的作用
目的研究rhGH上调胆道再通大鼠肝脏Mrp2表达及促进胆红素排泄的作用机制.方法对胆道梗阻及再通大鼠动物模型的72份血清样本进行放免检测GH;144份肝组织样本进行间接免疫荧光染色和RT-PCR,在肝细胞毛细胆管面上染色定位Mrp2,计算机图像分析测定,半定量比较肝细胞毛细胆管面上Mrp2表达情况,并与血清生长激素、胆红素作相关分析.结果在胆道梗阻时机体存在GH分泌、释放不足从正常时的6.54±1.09下降到14 d的1.97±0.64,Mrp2转运蛋白特异性定位于肝细胞膜的毛细胆管面,荧光染色呈线条形勾勒出毛细胆管轮廓,给予rhGH的胆道再通大鼠肝脏Mrp2表达水平明显增高,恢复加快.分别由143±8.1、177±12.4和212±15.4升高为159±9.3、209±13.1和221±15.4,并且随着血清GH、胆红素的升高或降低而发生变化.结论胆道梗阻大鼠行再通术后,Mrp2的蛋白表达水平恢复缓慢,时间长.可能是由于胆道梗阻时GH显著下降所致.rhGH促进胆红素的转运的作用机制可能是通过直接上调Mrp2表达来实现.
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基于RNA干扰技术的外排转运体体外模型及评价
为建立多药耐药相关蛋白2 (MRP2)和P-糖蛋白(P-gp)的体外RNA干扰模型,应用化学合成的siRNA转染HepG2细胞,并用实时PCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达变化,应用MRP2和P-gp底物罗丹明和甲氨蝶呤进行功能评价确定模型是否成功.siRNA筛选结果显示,MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2能够显著地抑制MRP2或P-gp的mRNA表达,抑制率分别为68％和84％;MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2 (80 nmol·L-1)作用48 h能够明显地抑制MRP2或P-gp的蛋白表达,抑制率分别为62％和70％,同时不影响其他转运蛋白的表达;给予MRP2或P-gp底物甲氨蝶呤或罗丹明孵育,发现MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2 (80 nmol·L-1)作用48 h能够显著增加甲氨蝶呤或罗丹明的细胞内浓度,表明其外排受到抑制.以上结果表明利用化学合成的siRNA能够显著地抑制细胞MRP2和P-gp的表达和功能,提示细胞干扰模型建立成功.
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基于多药耐药相关蛋白2(Abcc2/Mrp2)在大鼠肾脏表达性别差异的氧氟沙星药动学变化
本研究旨在探讨基于多药耐药相关蛋白2 (Abcc2/Mrp2)在大鼠肾脏表达性别差异的氧氟沙星的药代动力学变化.采用高效液相色谱法(HPLC)分别测定经尾静脉注射给予氧氟沙星(30 mg·kg-1)后大鼠血浆和尿液中氧氟沙星的浓度;通过免疫组化法和流式细胞术分别对雄性和雌性大鼠肾脏Mrp2的表达进行定性和定量分析.结果表明在雄性大鼠体内,氧氟沙星药时曲线下面积(AUC)明显小于雌性大鼠,而尿排总量明显大于雌性大鼠；Mrp2在雄性大鼠肾脏中的表达显著高于雌性大鼠.因此,氧氟沙星药动学性别差异可能是由Mrp2在雄性和雌性大鼠肾脏中的表达差异所引起的.
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异烟肼对小鼠肝细胞膜转运体Mrp2,Bsep,P-gp和Ntcp表达的影响
目的 考察异烟肼(isoniazid)对小鼠肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,Mrp2),胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep),P-糖蛋白(P-glycoproteins,P-gp)和Na+-牛磺酸钠共转运体(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,Ntcp)表达的影响,为从转运体水平阐释异烟肼药物性肝损伤(drug-induced liver injury,DILI)机制奠定基础.方法 分别给予小鼠高、中、低剂量异烟肼(120,60,30mg·kg-1·d-1,ig)1、2、3个月后,眼球采血,通过血清生化指标和肝组织病理学评价异烟肼的肝损伤程度;采用Western Blotting技术检测肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2、胆盐输出泵、P-糖蛋白和Na+-牛磺酸钠共转运体的表达变化.结果 用高、中、低剂量异烟肼干预小鼠后,其转运体多药耐药相关蛋白2、胆盐输出泵、P-糖蛋白和Na+-牛磺酸钠共转运体的表达均发生了变化,且在高、中剂量下呈现显著性差异(P＜0.05).此外,本实验还发现异烟肼干预小鼠的血清生化指标和组织病理学的变化明显滞后于转运体的显著变化.结论 异烟肼肝毒性可能与肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2、胆盐输出泵、P-糖蛋白和Na+-牛磺酸钠共转运体介导的内、外源性物质的过度蓄积有关.
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多药耐药相关蛋白2与谷胱甘肽共转运体系对肝脏砷代谢的影响
目的用谷胱甘肽(GSH)合成酶抑制剂丁硫氨酸亚甲矾胺(BSO)抑制大鼠GSH合成,探讨多药耐药相关蛋白2(MRP2)与GSH共转运体系在肝脏砷代谢过程中的作用.方法30只健康Wistar大鼠随机分为5组:第1组为对照组,给予生理盐水;第2～4组为染砷组,分别给予4、10和20mg/kg体重的亚砷酸钠溶液,隔天染毒1次,2周后将动物处死.第5组为BSO干预组,在实验结束的前3 d,每天大鼠预先腹腔注射2 mmol/kg体重BSO溶液,4 h后再经口给予20 mg/kg体重的亚砷酸钠溶液,其他处理同上.原子吸收分光光度法测定胆汁、肝组织和全血中的总砷含量.蛋白印记法测定肝细胞膜上MRP2的含量改变.结果和对照组比较,各砷染毒组胆汁、肝脏和血砷含量均明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);而3个染毒组间血砷差异无统计学意义(P＞0.05).随着染砷剂量增加,MRP2表达有增加的趋势,且MRP2表达量与胆汁砷的含量呈正相关(r=0.986,P＜0.05).大鼠经BSO预处理后再给予20 mg/kg体重的亚砷酸钠溶液,胆汁砷含量明显高于对照组,而低于高剂量组;肝脏和血砷水平明显高于对照组和高剂量组,差异有统计学意义(P＜0.05);MPR2表达量比高剂量组减少.结论亚砷酸钠可以诱导MRP2的表达,随染砷剂量增加,MRP2表达量增加.MRP2在砷及其代谢产物的胆汁排泄过程中发挥了重要作用.MRP2转运砷及其代谢产物的作用与细胞内GSH水平相关,BSO通过抑制GSH合成,导致MRP2-GSH共转运功能减弱,砷在肝脏内蓄积增加.
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外周血细胞P-gp、MRP2 mRNA检测在IgA肾病免疫抑制剂临床应用中的意义
目的:探讨糖皮质激素(glucocorticoid,GC)、免疫抑制剂在IgA肾病应用中的耐药机制,以提高临床诊治水平和判断预后的综合能力.方法:经肾活检诊断为IgA肾病(综合临床排除继发性IgA肾病)患者作为研究对象,按临床诊断和临床标准接受GC、免疫抑制剂治疗,观察疗效.治疗前留取外周血,提取细胞总RNA,通过实时荧光定量FCR(Real-Time RT-PCR)技术,测定IgA肾病患者外周血P-糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白2(multidrug resistanceasscciated protein 2.MRP2)mRNA表达,分析P-gP、MRP2 mRNA水平与GC、免疫抑制剂临床疗效和24 h蛋白尿(24 h UP)、肾小球滤过率(GFR)的相关性.结果:缓解组、显效组IgA肾病患者外周血P-gp mRNA平均显著低于有效组和无效组,有效组又显著低于无效组.患者外周血P-gp mRNA与治疗前24 h UP、GFR均无显著相关性,而与治疗后24 h UP呈显著正相关,与GFR呈显著负相关.缓解组患者MRP2 mRNA显著低于有效组和无效组,显效组显著低于无效组.MRP2 mRNA与治疗前24 hUP、GFR均无显著相关性,与治疗后24 h UP呈显著正相关,与GFR无显著相关.结论:IgA肾病患者外周血细胞P-gp、MRP2的高水平表达可能参与了GC、免疫抑制剂的耐药机制,影响了临床疗效.治疗前测定IgA肾病患者外周血P-gp、MRP2 mRNA表达对预测激素、免疫抑制剂的疗效有一定的参考价值.抑制IgA肾病患者外周血P-gp、MRP2的高表达则可能为提高临床疗效开辟另一途径.
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慢性肾衰竭大鼠血清对P-gP和MRP2在肾小管上皮细胞中表达的影响
目的:通过慢性肾衰竭大鼠血清对肾小管上皮细胞多药耐药蛋白表达影响的研究,探讨慢性肾衰竭肾小管上皮细胞功能改变的部分分子机制.方法:体外培养小鼠原代肾小管上皮细胞,分别用含1.0%,2.5%,5.0%的5/6肾切除的慢性肾衰竭大鼠血清和正常对照大鼠血清的培养液培养,72 h后收集细胞,提取膜蛋白.用Western-blotting检测多药耐药蛋白(P-glycopmtein,P-gp)、多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)和内参5'-nucleotidase的蛋白表达.用Bio-Rad Quantity One凝胶分析系统对条带进行半定量分析.结果:(1)血清浓度相同的情况下,慢性肾衰竭大鼠血清刺激可较对照血清增强肾小管上皮细胞P-gp的表达,在血清为1.0%时,有统计学意义;而各个浓度的肾衰竭血清刺激细胞MRP2的表达均较正常对照血清显著增高,具有统计学意义.(2)无论对照血清还是慢性肾衰竭血清,随着血清浓度的降低,两种耐药蛋白的表达均逐渐增高.P-gp表达在1.0%血清干预的细胞和5.0%、2.5%血清之间,有统计学意义;而MRP2的表达在各个浓度之间均有统计学意义.结论:血清成分或浓度可改变肾小管上皮细胞P-gp和MRP2的表达,其机制和作用有待进一步研究.
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退黄汤联合熊去氧胆酸对α-萘异硫氰酸酯诱导的大鼠急性肝损的保护作用
目的:探讨退黄汤(THT)联合熊去氧胆酸(UDCA)对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导大鼠肝损过程保护作用及机制.方法:选取Sprague-Dawley (SD)大鼠84只,设立空白组6只,对剩余78只在0h时间点均以ANIT 100 mg/kg予以灌胃造成急性肝损伤,在肝损后24 h取6只处死留取标本(肝损24h组),然后分为生理盐水组(18只,9 mL/kg体重的生理盐水灌胃)、UDCA组(18只,20 mg/kg体重的UDCA溶液灌胃)、THT组(18只,20 mL/kg体重的THT灌胃)、UDCA/THT组(18只,20 mg/kg体重的UDCA和20 mL/kg体重的THT联合灌胃),各组分别在肝损造模后48 h、72 h、96 h处死6只大鼠.所有大鼠处死留取血清和肝组织,生化仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBI)、总胆汁酸(TBA),酶联免疫吸附法(ELlSA)检测血清白介素-10(IL-10)白介素-6(IL-6)肿瘤坏死因子-α(TNF-α),实时荧光定量PCR检测肝组织多药耐药相关蛋白2(Mrp2)mRNA,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织炎症活动度.结果:UDCA和THT在降低血清ALT、AST、TBI、TBA、IL-6、TNF-α和提升血清IL-10及肝组织Mrp2 mRNA均存在明显的主效应(P＜0.01),两药在调控血清TBI、IL-6、TNF-α、IL-10及肝脏Mrp2mRNA均存在明显交互协同作用(P＜0.01或P＜0.05).HE染色显示联合用药组96 h肝组织炎性程度轻于单药组及生理盐水组.结论:UDCA和THT联合降低了ANIT诱导的肝损作用可能和两药联合作用调控血清细胞因子及肝脏Mrp2表达有关.
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运用Ussing chamber技术建立大鼠肠道内MRP2转运模型的实验研究
目的:建立研究药物与肠道内多药耐药相关蛋白2之间相互作用的Ussing chamber实验验证模型.方法:运用Ussing chamber技术评价存在于大鼠肠道内多药耐药相关蛋白中主要亚型MRP2的抑制剂环孢素A对底物普伐他汀经肠转运吸收方向(M-S)与分泌方向(S-M)的外排转运率及表观渗透系数的影响.采取LC-MS/MS法测定样品中普伐他汀含量,通过计算,比较对照组与抑制剂组之间的差异.结果:建模实验表明,对照组中普伐他汀经大鼠十二指肠、空肠、回肠外排转运率分别为1.06±0.31、1.73±0.41、2.10±0.67,加入50μg·mL-环孢素A之后减少了普伐他汀在各肠段的外排转运率,其中空肠(0.89±0.30)与回肠(0.81±0.13)段具有显著统计学差异;加入100 μg·mL-1环孢素A后也同样减少了普伐他汀在各肠段的外排转运率,其中空肠(0.82±0.24)段具有显著统计学差异.结论:运用Ussing chamber技术建立了研究肠道内MRP2与药物间相互作用的实验验证模型,为此后研究肠道内转运蛋白与药物两者之间的相互关系奠定了基础.
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茵陈蒿汤对梗阻性黄疸大鼠多药耐药相关蛋白表达的影响及意义
目的：探讨茵陈蒿汤对梗阻性黄疸（OJ）大鼠胆红素主要因子多药耐药相关蛋白2（MRP2）表达的影响及意义。方法选取50只清洁级SD大鼠，其中10只作为假手术（ SHAM）组，40只为OJ组。采用肝外胆管结扎法建立大鼠OJ模型，造模后大鼠随机平均分为 OJ对照组和 OJ实验组，OJ对照组给予生理盐水灌胃，OJ实验组给予陈蒿汤灌胃。生化分析仪检测各组谷草转氨酶（ AST）、白蛋白（ ALB）、总胆红素（ TB）、总胆汁酸（ TBA）水平；免疫组化观察肝组织MRP2转运蛋白表达及肝组织病理变化。结果 OJ组大鼠肝血管充血，肝细胞肿胀，气球样变性，出现点状坏死，肝内胆管扩张，小叶周边可见新生小胆管样上皮细胞，以汇管区明显，有少量炎性细胞浸润。 OJ实验组和OJ对照组中AST、ALB、TB、TBA均明显高于SHAM组（P＜0．05）；而OJ实验组各指标均显著低于OJ对照组（P＜0．05）。 OJ实验组和OJ对照组肝组织MRP2的表达阳性率显著低于SHAM组；而OJ实验组肝组织MRP2的表达阳性率显著高于OJ对照组（均P＜0．05）。结论茵陈蒿汤对 OJ大鼠具有显著的保肝作用，而上调肝组织中MRP2蛋白表达是其可能作用机制，提示茵陈蒿汤可作为治疗OJ的有效药物。
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MRP2蛋白在食管鳞癌中的表达及其与化疗耐药的相关性
目的:探讨MRP2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其与食管癌化疗耐药的关系.方法:收集原发性食管鳞癌手术标本70例,采用免疫组织化学Envision法检测食管鳞癌组织及其癌旁组织中MRP2蛋白的表达情况,并采用MTT法检测食管鳞癌组织对临床常用化疗药物的敏感性,分析其表达与食管癌化疗耐药的关系.结果:70例食管鳞癌组织及其癌旁正常组织中的阳性表达率分别为58.6％及5.0％.MRP2蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常食管组织(P＜0.01).食管鳞癌组织对环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、顺铂、卡铂、阿霉素、长春瑞滨、羟喜树碱等化疗药物的敏感性与其相应癌组织中MRP2表达明显相关(P＜0.01).结论:MRP2的表达与食管鳞癌对多种化疗药物耐药有较好的相关性,推测食管鳞癌组织中MRP2的高表达可能对化疗耐药性的发生发展具有促进作用.
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茵栀黄颗粒对胆管结扎大鼠肝细胞膜转运体Mrp2、Ntcp及Bsep表达的影响
目的 通过考察茵栀黄颗粒(茵陈、栀子、金银花和黄芩)对肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2( Multidrug resistance-associated protein 2,Mrp2/ABCC2)、Na+-牛黄胆酸共转运多肽(Na +/taurocholate cotransporter,Ntcp/SLC10A1)及胆盐输出泵(Bile salt export pump,Bsep/ABCB 11)表达的影响.方法 胆管结扎术制备胆汁淤积大鼠模型；生化检测和HE染色,观察茵栀黄颗粒的干预效果；流式细胞仪测定肝脏转运体Ntcp、Bsep和Mrp2的表达.结果 与模型组相比,茵栀黄组肝细胞的脂肪病变和水肿较模型组显著减轻(P＜0.05),Mrp2的表达显著升高(P＜0.01)；但Ntcp、Bsep的表达无明显变化.结论 肝细胞膜转运体Mrp2的表达升高可能是茵栀黄颗粒的退黄利胆分子机制之一.
关键词： 茵栀黄颗粒 胆管结扎 多药耐药相关蛋白2 Na+-牛黄胆酸共转运多肽 胆盐输出泵 -
远志、厚朴配伍对其活性成分在大鼠肠段吸收的影响
目的 研究远志和厚朴配伍对其活性成分细叶远志岛苷,远志口山酮Ⅲ,和厚朴酚,厚朴酚在大鼠不同肠段的吸收影响.方法 采用在体单向肠灌流模型,用重量法校正灌流液体积,通过HPLC-DAD测定肠灌流液中的被测成分质量浓度,以及P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)抑制剂对吸收的影响.结果 配伍组细叶远志皂苷在空肠、结肠的Ka、Papp值均显著低于远志组(P ＜0.05,P＜0.01),远志口山酮Ⅲ在各肠段的Ka、Papp值与远志组比较均有减小趋势;配伍组和厚朴酚、厚朴酚的Ka、Papp值与厚朴组比较均有增大趋势.加入不同P-gp抑制剂盐酸维拉帕米后,各组中细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ和厚朴酚的Ka值和中、高浓度组中厚朴酚的Ka值均显著高于空白组(P ＜0.05,P＜0.01).加入MRP2抑制剂吲哚美辛后,各组中细叶远志皂苷及中、高浓度组中远志口山酮Ⅲ的Ka、Papp值均极显著高于空白组(P＜0.01),和厚朴酚与厚朴酚的Ka、Papp值均有高于空白组的趋势.结论 厚朴能抑制远志中细叶远志皂苷、远志口出酮Ⅲ在空肠和结肠的吸收,但受P-gp和MRP2外排影响,提示两成分可能是P-gp和MRP2的底物;而远志能促进厚朴中和厚朴酚、厚朴酚的吸收,但均不是P-gp和MRP2的底物,远志和厚朴配伍不宜与P-gp和MRP2酶抑制剂同用.
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人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证
目的 构建人源有机阴离子转运多肽1B1 (human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的转运特性.方法 采用基因工程手段获得hOATP1 B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1 B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Realtime PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运.结果 经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1 B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运佳;在0～500 μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性.1-MT在该细胞模型上无明显转运.结论 成功构建人源MDCK-OATP1 B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1 B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究.
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MRP2在妇科恶性肿瘤耐药中的作用研究进展
妇科恶性肿瘤严重威胁女性健康,除手术治疗外,化疗目前仍然是许多妇科恶性肿瘤术前及术后的主要治疗手段,然而耐药现象的产生成为疾病治愈的绊脚石.耐药的产生机制众多,其中包括多药耐药相关蛋白(MRP)2、肺耐药相关蛋白(LRP)等外排蛋白表达过度,谷胱甘肽s-转移酶(GSTs)解毒功能增强,DNA损伤修复功能加强,细胞凋亡受阻及细胞信号系统的改变等.其中,MRPs属于ATP结合的盒式转运蛋白超家族(ATP binding cassette transporter superfamily),生理情况下,广泛存在于各组织器官[1],主要介导物质的跨膜转运.
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头孢妥仑测定方法的建立及胆汁排泄机制研究
目的:建立高效液相色谱内标法测定大鼠血浆、胆汁、尿液中头孢妥仑含量,阐明多药耐药相关蛋白2(Mrp2)是否与头孢妥仑胆汁排泄有关.方法:用4-二甲氨基安替比林作内标.色谱柱为Capcell pak C_(18) UG120(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1%醋酸铵-甲醇(67:33,V/V),流速为0.8 mL/min,进样量为25μL;用肝灌流法探讨头孢妥仑是否经Mrp2转运.设立对照组(头孢妥仑1μmol/L)和实验组(头孢妥仑1μmol/L加Mrp2抑制剂丙磺舒20μmol/L),在设定时间点于灌流的大鼠肝脏收集出口灌流液和胆汁样品,高效液相色谱法测定样品中头孢妥仑含量,考察实验组和对照组中肝摄取率和胆汁累积排泄率的差异.结果:血浆样品中头孢妥仑在0.1～4μg/mL范围内、胆汁样品中头孢妥仑在0.1～5μg/mL范围内、尿液样品中头孢妥仑在0.1～5μg/mL范围内线性关系良好.回收率为85%～115%,日内、日间RSD均小于13.5%.实验组和对照组相比,肝摄取率变化无统计学意义上的差别;实验组中,肝灌流25 min后,头孢妥仑胆汁累积排泄率减少至对照组的40.0%.结论:本方法经济、简单、灵敏、快速,可用于头孢妥仑血浆、胆汁、尿液样品中药物浓度检测和药物代谢动力学研究;头孢妥仑是Mrp2的底物,Mrp2与头孢妥仑的胆汁排泄有关.
