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杜仲中松脂素二葡萄糖苷和松脂素对成骨细胞中OPG和RANKL表达的影响
目的:观察杜仲中松脂素二葡萄糖苷及其苷元松脂素对体外培养的小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 MC3T3-E1的影响.方法:采用质量浓度为1×10 -7～1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷与松脂素体外干预MC3T3-E1成骨细胞48,72 h,采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞分化情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞骨保护素(OPG)与核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达的水平.结果:与空白组相比,培养48 h,1×10 -4～100μg·L-1松脂素二葡萄糖苷及1×10 -4～1μg·L-1松脂素均能促进成骨细胞增殖(P<0.05,P<0.01);培养72 h,1 ×10 -3～100μg·L-1松脂素二葡萄糖苷及0.1μg·L-1松脂素能促进成骨细胞增殖(P<0.05,P<0.01).与空白组相比,培养48 h时,质量浓度为1×10 -4～1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷、松脂素均能够显著促进成骨细胞ALP分泌(P<0.01);培养72 h时,质量浓度为0.1～1×103μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷和1×10 -4～1×103μg·L-1松脂素均能显著促进成骨细胞ALP分泌(P<0.05,P<0.01).与空白组相比,培养48 h,1×10 -5～10μg·L-1的松脂素二葡萄糖苷和松脂素均能促进细OPG蛋白分泌(P<0.05,P<0.01);只有松脂素在1×10 -5,1×10 -3μg·L-1时能明显抑制RANKL蛋白的分泌(P<0.01),在1×10 -5～0.1μg·L-1时提高OPG/RANKL(P<0.01).结论:松脂素二葡萄糖苷与松脂素均能通过促进成骨细胞的增殖和分化达到抗骨质疏松作用,但其作用机制不同,松脂素二葡萄糖苷主要通过促进OPG分泌来发挥,而松脂素则既能通过促进OPG分泌又能通过抑制RANKL表达来发挥作用.
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二甲基乙二酰基甘氨酸对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞增殖和分化的影响
目的:探讨低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、成骨分化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法:将MC3T3-E1细胞接种到培养板24h后,实验组培养基中分别加入50μM (50μM组)和200μM(200μM组)的DMOG,对照组加入完全培养液.分别于培养1、3、5d时采用MTT法检测MC3T3-E1细胞增殖情况,5、10d行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及ALP活性检测成骨细胞分化,21d用茜素红染色检测MC3T3-E1细胞钙结节的形成并进行定量分析,采用ELISA法检测MC3T3-E1培养3d情况时上清液中的VEGF蛋白含量,并用实时荧光定量PCR法检测MC3T3-E1细胞VEGF mRNA的相对表达量.结果:培养ld时对照组、50μM组和200μM组的MC3T3-E1的光密度(optical density,OD)值分别为0.041 ±0.009、0.074±0.019、0.086±0.044,3d时分别为0.123 ±0.027、0.148 ±).020、0.224±0.061,5d时分别为0.297±0.044、0.325±0.084、0.354±0.038,1d、3d时50μM组和200μM组与同时间点对照组比较均有显著性差异(P＜0.05),3d时50μM组与200μM组有显著性差异(P＜0.05).培养5d和10d时对照组ALP染色颜色较深,50μM组颜色中等,200μM组颜色较浅;5d时对照组ALP活性为1.943±0.072,50μM组为1.632±0.051,200μM组为1.319±0.065;10d时对照组ALP活性为3.734±0.067,50μM组为3.381±0.070,200μM组为2.831±0.086.三组间同时间点比较均有统计学差异(P＜0.05),同组10d时与5d时比较均有统计学差异(P＜0.05).茜素红染色200μM组可见少量红色结节,50μM组可见中等量红色结节,对照组可见大量红色结节;对照组茜素红含量(μg/ml)为56.178±7.940,50μM组为41.922±2.438,200μM组为31.929± 1.922,三组间比较均有统计学差异(P＜0.05).培养3d时对照组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量(ng/孔)为9.063±0.603,50μM组为12.123±0.870,200μM组为15.540±0.581,三组间比较均有统计学差异(P＜0.05);50μM组VEGF mRNA表达量为对照组的1.792±0.067,200μM组为对照组的3.963±0.092,三组间比较均有统计学差异(P＜0.05).结论:低氧模拟剂DMOG可促进MC3T3-E1细胞增殖和VEGF表达,抑制其成骨分化.
