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鹿衔草挥发油诱导人软骨肉瘤细胞SW1353凋亡的机制
目的:探讨鹿衔草挥发油诱导人软骨肉瘤细胞SW1353凋亡的作用机制.方法:MTT法检鹿衔草挥发油对人软骨肉瘤细胞SW1353增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-2,Bax基因的表达;Western Blot检测Bcl-2蛋白的表达.结果:鹿衔草挥发油在50 μ g/mL-150μg/mL浓度范围内能明显抑制SW1353细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性,IC50为106μg/mL;流式细胞仪检测的结果显示鹿衔草挥发油能诱SW1353细胞凋亡;RT-PCR结果表明Bcl-2基因表达降低,Bax基因表达增强;Western Blot结果表明Bcl-2蛋白表达降低.结论:鹿衔草挥发油通过诱导细胞凋亡抑制SW1353细胞增殖,可能与其下调Bcl-2表达,上调Bax表达有关.
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梅花入骨丹总黄酮对人软骨肉瘤细胞活性的影响
梅花入骨丹总黄酮是从龙须藤的藤中提取的总黄酮类成分,我们采用MTT法检测不同浓度梅花入骨丹总黄酮干预48 h后的SW1353细胞活性,旨在研究梅花入骨丹总黄酮对SW1353细胞活性的影响,为进一步开发利用梅花入骨丹提供依据.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 药材梅花入骨丹采自福建永春县城郊,经福建中医药大学药学院杨成梓教授鉴定为羊蹄甲属植物龙须藤Bauhinia championi (Benth.)Benth的藤.
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梅花入骨丹多糖对SW1353软骨肉瘤细胞活性的影响
目的 研究梅花入骨丹多糖对SW1353细胞活性的影响. 方法 体外培养SW1353细胞,用MTT法检测其在梅花入骨丹多糖剂量为50、100、200、400、800μg/mL中的细胞活性. 结果 SW1353细胞在50～200μg/mL多糖剂量范围内细胞活性增加,400～800 μg/mL时受抑制.结论 低剂量的梅花入骨丹多糖溶液对SW1353细胞活性有促进作用,高剂量有抑制作用.
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白藜芦醇通过TLR4/MyD88依赖性信号通路对SW1353细胞发挥抗骨关节炎作用的实验研究
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)通过抑制TLR4/MyD88依赖性信号通路发挥抗白细胞介素1β(interleukin -1β,IL-1β)诱导的SW1353细胞骨关节炎(osteoarthritis,OA)作用. 方法 3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑盐法[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfo-phenyl)-2H-tetrazolium,inner salt,MTS]测定RES(0～ 100 μmol/L)及IL-1β(10 ng/ml)对SW1353细胞增殖活力的影响.采用RES(12.5、50 μmol/L)处理经IL-1β(10 ng/ml)诱导的细胞,ELISA法检测培养基上清中白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot法检测软骨细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化蛋白88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)蛋白表达. 结果 IL-1β(10 ng/ml)对细胞增殖活力无明显影响,RES(3.125 ～ 25 μmol/L)可显著增强细胞活力(P＜0.05),RES(100 μmol/L)可显著抑制细胞活力(P＜0.05).IL-1β可显著增加培养基上清IL-6水平(P＜0.05),且具有时间依赖性;同时IL-1β也可显著增加软骨细胞TLR4及MyD88的蛋白表达(P＜0.05).RES处理可显著降低培养基上清IL-6水平(P＜0.05)及软骨细胞的TLR4及MyD88的蛋白表达(P＜0.05). 结论 RES可能通过抑制TLR4/MyD88依赖性信号通路发挥抗IL-1β诱导的SW1353细胞的OA效应,在OA的防治方面有潜在的应用前景.
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腺病毒介导人ATF6基因修饰对体外细胞增殖凋亡的实验研究
目的:构建携带人活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)的重组腺病毒Ad-ATF6和Ad-ATF6 siRNA,并探讨内质网应激(ER Stress,ERS)时其对人软骨肉瘤细胞SW1353增殖凋亡的影响.方法:将ATF6基因序列与靶向ATF6的siRNA序列分别克隆到pAdTrack-cmv和pSES-HUS穿梭质粒上,然后分别与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183感受态中同源重组,得到腺病毒重组质粒pAd-ATF6和pAd-ATF6 siRNA,通过脂质体介导在HEK293细胞中进行包装和扩增.通过RT-PCR和Western blot检测病毒效果.流式细胞仪法(flow cytometry,FCM)、MTT法及Western blot检测ERS状态下ATF6对SW1353细胞增殖凋亡的影响.结果:成功获得了重组腺病毒Ad-ATF6和Ad-ATF6 siRNA.RT-PCR和Western blot结果表明,重组腺病毒能有效的感染细胞.FCM检测结果表明,ERS条件下,ATF6感染组S期细胞比例明显升高,凋亡率明显降低(仁0.000);Ad-ATF6 siRNA感染组S期细胞比例明显降低,凋亡率明显上升(P=0.000).MTT与Western blot实验结果与FCM结果一致.结论:ERS状态下,ATF6能促进SW1353细胞的增殖,抑制其凋亡.
