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内生真菌JJ18接种江滩土壤灭螺实验研究
金钱松内生真菌JJ18(Aspergillus)分别接种到固体培养基(A)、灭菌土壤(B)和未灭菌土壤(C)中,按照WHO的杀螺刺浸泡试验法观察各培养基浸出液的发酵产物对钉螺的杀灭作用,以及JJ18在土壤中的存活时间,并设不接种内生真菌JJ18的未灭菌空白土壤组(D)、去氯离子水阴性对照组(E)和氯硝柳胺阳性对照组(F).采用WHO推荐的浸泡法,用卤虫(Anemia salina)模型观察其急性毒性,以人工海水为对照组,观察A～D组对卤虫的杀灭情况.结果 显示,浸泡钉螺24、48、72 h,B组灭螺率分别为(36.67±7.56)%、(63.33±4.65)%、(90±0)%,明显高于D组(30±6.87)%、(33.33±5.68)%、(56.67±8.55)%(P<0.05,P<0.01).内生真菌JJ18在土壤中至少可存活30 d.B组对卤虫的杀虫率为(25.24±3.74)%,显著低于A组(57.15±8.90)%(P<0.01).
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山丘地区密达利灭螺效果及毒性的观察
2008年8月在血吸虫病重疫区江西省玉山县山丘地区,比较密达利和氯硝柳胺药液喷洒灭螺效果及毒性.分别设密达利田埂组(1 g/m2)、密达利田坂组(1 g/m2)、氯硝柳胺组(2g/m2)及空白对照组.施药后3 d、7 d、15 d和2个月,各施药组的钉螺校正死亡率均显著高于空白对照组(P值均<0.05),而密达利田坂组则显著低于密达利田埂组和氯硝柳胺组(P值均<0.05).密达利施药后2个月对非靶生物无明显不良反应,但氯硝柳胺组于施药后1 d,鱼、螺和蛙等全部死亡.
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荆州市2006年血吸虫病疫情抽样调查
为查清荆州市血吸虫病疫情现状以及控制疫情存在的主要难点,于2006年底在荆州市8县122个乡镇场的453村.对人、畜血吸虫病病情和螺情进行了抽样调查.结果 表明人群感染率为3.9%(11 994/310 232),急性血吸虫病病例呈散在发生,无突发疫情.耕牛感染率为10.2%(270/2 651).活螺平均密度为0.67只/0.11 m2,感染性螺密度为0.001 9只,0.11 m2(1 988/1 054 597),感染率为0.28%(1 988/713 4861.与2004年比较,人群感染率下降40.0%,急性血吸虫病例数下降33-3%.钉螺面积增加4.0%,活螺平均密度增加68.5%,感染性钉螺密度增加18.8%,钉螺感染率下降36.4%.耕牛感染率上升22.3%.建议重点加强耕牛血吸虫病防治.
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复配氯硝柳胺杀灭钉螺的研究进展
氯硝柳胺是WHO惟一保留推荐使用的灭螺药物,具有良好的杀螺效果,但同时存在着若干缺陷.因此,如何使氯硝柳胺在杀螺增效的同时减少其缺陷是血防科研的目标与发展方向.本文就复配氯硝柳胺杀灭钉螺的研究进展进行综述,为探索新的复配制剂提供科学参考.
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气候变暖对血吸虫病传播的影响及相关研究技术的应用
钉螺是日本血吸虫的中间宿主,钉螺的分布与血吸虫病的分布一致.温度是钉螺孳生的重要环境因素之一,研究气候变暖对钉螺的孳牛和血吸虫病传播的影响具有重要意义.本文就气候变暖对钉螺的生长繁殖和血吸虫病传播的影响,以及相关研究技术作一综述.
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哨鼠法确定血吸虫病易感地带的观察
通过血吸虫尾蚴调查,可以直接了解尾蚴较多的地点、季节和时间,为预防人、畜受感染提供依据[1].在江苏省血吸虫病重大疫情应急处理预案中明确要求加强钉螺和疫水检测,确定高危易感地带.南京市在2003～2004年对血吸虫病疫区疫水感染性进行了哨鼠现场检测,用以确定血吸虫病易感一带,并指导血吸虫病的预防和控制工作,结果报道如下.
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成都市武侯区血吸虫病流行病学调查
武侯区位于成都市西南部,总面积76.65 km2,总人口为41.48万.区内地势平坦,气候温和,都江堰水系自流灌溉,沟渠纵横,适宜钉螺孳生.
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灌溉沟渠改造灭螺结合人畜化疗控制血吸虫病的效果观察
潜江市为湖沼水网型重度血吸虫病流行区,灌溉沟渠是钉螺的主要孳生地.多年来,采取药物灭螺、土埋灭螺及人畜化疗等防治措施,但由于钉螺的孳生环境没能彻底改变,以致防治效果不理想.1994～1998年,选择幸福村为试点,以农业开发和农田水利建设为契机,在改造灌溉沟渠同时,结合人畜同步扩大化疗等防治措施控制血吸虫病,取得显著的社会效益和经济效益.
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山区薄膜覆盖灭螺法现场试验
土埋灭螺是山丘地区灭螺方法之一,但在石头成份较多的有螺区,若采用土埋灭螺法,土埋厚度难以达到技术要求,且有钉螺沿压实不紧的缝隙上爬的可能,螺情的反复性较大.因此,我们首次采用薄膜覆盖灭螺法进行了现场试验,以探求更加有效的灭螺方法.
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发酵昆布对钉螺的诱杀效果
目的 观察钉螺食物引诱物对钉螺的诱杀效果.方法 以0.1 g发酵昆布(俗称海带,Laminnaria japonica Aresch)为钉螺食物引诱物,于12、24、36和48h,比较15、25和35℃条件的诱螺效果.并将发酵昆布与灭螺植物天南星Arisaema heterophyllum Blume)粉碎物配成颗粒灭螺剂进行灭螺实验,比较25℃,30%和60%土壤湿度下,颗粒灭螺剂的灭螺率.结果 在12、24、36和48 h不同时间点发酵昆布的诱螺率以25℃高,35℃低.25℃48 h海带引诱物诱螺率(80.3%)显著高于对照组(17.0%)(P<0.01).颗粒灭螺剂灭螺率(85.3%)显著高于对照组(不含发酵昆布的颗粒剂,26.8%)(P<0.05).25℃条件下土壤湿度为60%时,颗粒灭螺剂的灭螺率显著高于土壤湿度为30%的(P<0.01).结论 发酵昆布食物引诱物对钉螺具有较强的诱杀效果.
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三地钉螺线粒体DNA两个分子的遗传变异研究
目的 分析广西、云南、湖南三地钉螺线粒体DNA细胞色素C氧化酶Ⅰ(CO1)基因和细胞色素氧化酶b(Cytb)基因的遗传变异.方法 收集广西靖西、云南洱源和湖南岳阳三地钉螺,提取其基因组DNA,PCR法扩增线粒体CO1和Cytb基因并测序.用Clustal W(1.82)软件对所测基因序列排序,用MEGA(3.1)计算其碱基组成、转换及颠换;用Kimura双参数法计算遗传距离,用非加权组平均法(UPGMA)和大简约法(MP)构建系统发生树.结果 PCR扩增获得CO1和Cytb基因大小分别约为700及600 bp(含两侧引物).三地钉螺CO1基因中共检测到106个多态性位点,约占核苷酸总数的15.9%,Cytb基因中多态性位点为165个,约占核苷酸总数的28.5%.广西靖西与湖南岳阳、广西靖西与云南洱源的钉螺CO1基因和Cytb基因的遗传距离分别为0.051、0.158和0.031、0.405.根据CO1和Cytb的基因序列,用上述两种方法构建的系统发生树结果均一致.广西靖西与湖南岳阳的钉螺同属一个支系,云南洱源钉螺单独形成另一支系.结论 广西、湖南和云南的钉螺CO1和Cytb基因总体上具有相对丰富的多态性.
关键词： 钉螺 细胞色素c氧化酶Ⅰ基因 细胞色素氧化酶b基因 遗传变异 -
氯代水杨胺灭螺效果的实验研究
目的 观察氯代水杨胺的灭螺效果和对鱼苗的毒性.方法 配制不同浓度的氯代水杨胺,用浸泡法、喷洒法观察不同浓度和不同作用时间的灭螺效果,并进行鱼苗毒性实验.氯硝柳胺乙醇胺盐作对照.结果 氯代水杨胺的浓度为0.25和0.5 mg/L,浸泡48 h,钉螺死亡率分别为97.8%、100%,半数有效致死浓度(LC50)为0.067 4 mg/L;氯硝柳胺乙醇胺盐浓度为0.25和0.5 mg/L,浸泡48 h,钉螺死亡率分别为22.2%、66.7%,LC50为0.3976 mg/L.药物浓度为0.4mg/L喷洒1、3、7和15d,氯代水杨胺的灭螺率分别为90%、100%、100%和100%;氯硝柳胺乙醇胺盐的灭螺率分别为60%、70%、70%和50%.0.25 mg/L浸泡48 h,氯代水杨胺和氯硝柳胺乙醇胺盐刺激钉螺离水上爬率分别为32.2%和46.7%.0.4 mg/L药物作用72 h,氯代水杨胺和氯硝柳胺乙醇胺盐的鱼苗死亡率分别为50.0%和100%.结论 氯代水杨胺有灭钉螺作用,对鱼苗毒性比氯硝柳胺乙醇胺盐略低,并有抑制钉螺上爬作用.
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钉螺血淋巴细胞及其功能的研究
目的 研究获取钉螺血淋巴细胞的方法,观察其形态结构,研究其免疫等相关功能.方法 参照外周淋巴器官中淋巴细胞的悬浮收集法,获取钉螺血淋巴细胞,经Giemsa染色后显微镜观察其形态.血淋巴细胞经结晶紫染色后分别计数悬浮法、传统压片法及针刺法获取的血淋巴细胞数,并进行方差分析和Dunnett-t检验.取冻融的血淋巴细胞上清进行免疫沉淀、抑菌、吞噬杀菌实验.十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析血淋巴细胞蛋白组份相对分子质量(Mr).结果 钉螺血淋巴细胞分为圆形有丝状伪足、嗜酸性圆形无丝状伪足、嗜碱性圆形无丝状伪足和梭形细胞4种形态,平均直径依次约为10.93、6.13、6.08及11.06 μm,各约占细胞总数的50%、30%、5%及15%.每只钉螺悬浮法、传统压片法及针刺法获取的血淋巴细胞均数分别为1.50、0.66及0.03万/ml.悬浮法与传统压片法、与针刺法差异有统计学意义(F=281.47,P＜0.01).进一步Dunnett-t检验,悬浮法与压片法、与针刺法的血淋巴细胞总体均数差异有统计学意义(t1=15.67,t2=24.50,两组P＜0.01).血淋巴上清与日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)反应出现絮状沉淀,抑菌试验对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌出现明显的抑菌圈,血淋巴细胞对白色念珠菌的吞噬率和杀菌率分别为86%和46%.血淋巴细胞蛋白组份相对分子质量约为Mr 112 300、107 100、97 200、73 500、60 000及12 000.结论 悬浮法可获得大量钉螺血淋巴细胞,其具有沉淀SEA、抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生长,以及吞噬杀灭白色念珠菌等免疫功能.
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银杏外种皮提取物杀灭钉螺效果的研究
目的 观察银杏外种皮石油醚提取物(主要成分为银杏酸,含量为64%)、槟榔碱及两药伍用杀灭钉螺效果及对斑马鱼急性毒性.方法 取7～8螺层、活力强的钉螺,用银杏外种皮干粉、水提取物和石油醚提取物3种制剂以及银杏外种皮石油醚提取物与槟榔碱伍用,采用WHO"杀螺剂实验室终筛方法"中的浸泡法,进行浸杀钉螺试验、钉螺上爬试验以及斑马鱼急性毒性试验.3项试验均以氯硝柳胺为对照.结果 银杏外种皮3种制剂随浸泡时间延长浸杀效果明显提高.其中,石油醚提取物浸杀效果较好,浸泡24 h LC50和LC90分别为0.65 mg/L和5.50 mg/L,48 h分别为0.07 mg/L和0.85 mg/L;72 h钉螺死亡率近100%.与槟榔碱伍用,浸杀效果明显提高,浸泡24 h银杏外种皮石油醚提取物LC50和LC90分别为0.26 mg/L和0.56 mg/L,较银杏外种皮石油醚提取物单药LC50降低60%,LC90降低90%(P值均＜0.05).2.50mg/L银杏外种皮石油醚提取物24 h总上爬率为10%;两药伍用,其银杏外种皮石油醚提取物0.16 mg/L上爬率仅为8%,提高了其抑制钉螺上爬效果.1倍LC90和2倍LC90浓度的银杏外种皮石油醚提取物,斑马鱼存活时间分别为24 h和10 h;伍用后,24 h斑马鱼在2倍LC90浓度中未见死亡,48 h内死亡率为50%,伍用对斑马鱼急性毒性较低.结论 银杏外种皮石油醚提取物有较好的灭螺效果,是具有研究价值的灭螺植物.
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日本血吸虫幼虫在钉螺体内发育起点温度的研究
目的研究环境温度对血吸虫幼虫在钉螺体内生长发育进程的影响程度.方法采集无血吸虫感染的钉螺,以钉螺与毛蚴1:20比例感染,感染后置于30℃、27℃、24℃、21℃和18℃环境中饲养,计算钉螺体内血吸虫的尾蚴开放前期和发育速度,分析尾蚴开放前期和发育速度与环境温度间的相关关系.结果21℃、24℃、27℃、30℃时血吸虫的尾蚴平均开放前期分别为(128.89±16.05)d、(95.00±21.03)d、(71.93±12.74)d和(62.74±14.19)d.尾蚴开放前期与环境温度的回归方程为y=730.68x-0.8918(r=0.9976,P＜0.01).血吸虫发育速度与环境温度的回归方程为y=0.02351n(x)-0.0639(r=0.9973,P＜0.01).从此方程中推算出日本血吸虫幼虫在钉螺体内的发育起点温度为15.17℃±0.43℃.结论环境温度降低,钉螺体内血吸虫幼虫发育速度减慢.
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日本血吸虫信号蛋白编码基因表达质粒的构建
日本血吸虫以钉螺为中间宿主,各种野生和家养动物为保虫宿主,因此防治血吸虫病十分困难且代价昂贵.WHO认为,作为化疗或其他措施的必要补充,应优先考虑人用血吸虫病疫苗的发展[1],但已知的候选疫苗,包括1998年WHO/TDR推出的6个具潜力的疫苗候选分子的减虫率或减卵率低于40%.
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N-吡啶-3-N'-苯基脲盐酸盐杀螺效果及抑制钉螺上爬作用的初步研究
目前国内外广泛使用的灭螺药如五氯酚钠和氯硝柳胺等杀螺效果虽好,但对鱼类毒性均较大[1].我们研制的灭螺药溴乙酰胺,具有杀螺效果好、对鱼类毒性低、易溶于水、使用方便等特点[2-4].但该药在浸杀灭螺浓度均不能有效抑制钉螺上爬,降低了杀螺效果[5].因此,寻找高效低毒又能抑制钉螺上爬的灭螺药为当前研究的一个重要课题.为此,对我们以往合成和筛选出来的对鱼类低毒的杀螺药SM83051进行了杀螺效果、抑制钉螺上爬作用及对鱼类毒性的试验,现将结果报告如下.
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密达利杀灭湖北钉螺效果的研究
目的实验室和现场试验评价密达利(META-Li,40%四聚乙醛水乳剂)杀灭湖北钉螺的效果.方法室内:采用泥缸喷洒法、烧杯浸杀法和三角沉淀杯上爬法,用敲击法观察不同时间、不同浓度密达利对湖北钉螺的杀灭和抑制上爬作用.现场:选择安徽省芜湖县草滩进行现场喷洒试验,密达利剂量为1、2和4 g/m2,设氯硝柳胺药物对照剂量为1g/m2和清水空白对照组,观察施药后3、7和15 d检查钉螺存活情况.结果室内喷洒试验:24、48和72 h的半数致死剂量(LD50)分别为0.78、0.44和0.46 g/m2;室内浸杀试验:24、48、72 h的半数致死浓度(LC50)分别为44.4、27.4和24.8 mg/L;24 h抑制钉螺上爬半数有效浓度(EC50)为5.86 mg/L.现场喷洒试验:密达利2 g/m2喷洒后7 d钉螺死亡率大于90%,灭螺效果和氯硝柳胺1g/m2相当(P＞0.05).结论密达利室内及现场喷洒灭螺效果明显,有抑制钉螺上爬作用.
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钉螺在水中运动状态的观察
目的了解钉螺在水体中的运动状态.方法采用钉螺生物学与水力学以及河流泥沙工程学相结合的方法,观察钉螺运动状态.结果与结论钉螺的爬行能力很低(大爬速每分钟仅2.98 cm),其在江河沟渠中的自身运动可忽略不计,但在阻/灭螺工程中设计沉降池时必须考虑钉螺的自身运动.钉螺在江河沟渠水流中的运动状态主要表现为:①吸附于载体随水漂流;②作为悬移质随水流推动移行,其主要来自湖沼地区大量有螺洲滩随水流启动的、以及沉降在河床床面上的重新启动的钉螺,均为7周龄以下的幼螺,因其吸附力较小而易失散.螺龄较大的野外钉螺平均吸附力为其体重的13倍,不易失散.
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江西省星子县不同空间位置洲滩螺情及与近期水位的关系
目的 研究江西省星子县不同位置钉螺孳生地螺情的纵向变化及与近期水位的关系. 方法 收集江西省星子县西观湖、马家湾、西庙前3个洲滩2001-2010年的螺情资料以及水位资料,探讨螺情的纵向变化,用Spearman秩相关分析钉螺消长与近期水位变化的关系. 结果 马家湾洲滩和西庙前洲滩有螺框出现率和活螺密度高分别为89.66％ (442/493)(2002年)和66.72％ (872/1307)(2007年)、8.33(2001年)和7.39只/框(2006年),低为13.26％ (126/950)(2010年)和4.60％ (55/1195) (2005年)、0.42(2010年)和0.22只/框(2002年),2007年以后均出现下降趋势；西观湖洲滩高为56.77％ (197/347)和2.81只/框(2002年),低为3.52％ (30/852)和0.08只/框(2006年),2007年后呈上升趋势.马家湾洲滩于2005和2009年发现阳性螺,阳性螺密度与阳性螺出现率分别为0.003 3和0.002 5只/框、0.09％ (3/3306)和0.22％ (3/1389)；西庙前洲滩于2001、2003、2005、2009年均发现阳性螺,其中2005年阳性螺密度和阳性螺出现率高,分别为0.005 0只/框和0.88％ (6/684)；西观湖洲滩于2002和2003年发现阳性螺,阳性螺密度和阳性螺出现率分别为0.002 9和0.002 7只/框、0.10％ (1/974)和0.32％ (1/312).Spearman秩相关分析显示,西观湖洲滩有螺框出现率和活螺密度与查螺前1个月(r=0.76,0.82)和查螺前2个月(r=0.71,0.78)平均水位的相关性均具有统计学意义(P＜0.05)；马家湾洲滩有螺框出现率和活螺密度与查螺前近3个月内平均水位的相关性均无统计学意义(P＞0.05)；而西庙前洲滩有螺框出现率和活螺密度与查螺前1个月(r=-0.67,-0.79)和查螺前2个月(r=-0.75,-0.72)平均水位则均呈负相关(P＜0.05). 结论 江西省星子县不同空间位置的洲滩螺情变化趋势不同,查螺前近3个月内水位对不同区域洲滩螺情变化的影响也不相同,洲滩螺情的控制策略应具有针对性.
