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离子对RP-HPLC法检测肝匀浆中的槟榔碱
目的 探讨肝组织匀浆中槟榔碱合适的提取与测定方法.方法 肝组织匀浆槟榔碱用等体积15%(w/v)的高氯酸提取后,在碱性条件下用乙醚萃取,岛津LC-20AT色谱仪测定.流动相由40:60的乙腈与1%SDS溶液(含0.1%三乙胺,磷酸调pH至2.7)组成.结果 在本实验条件下,在0.5～40 ng的剂量范围内,峰面积与槟榔碱含量呈明显的正相关.等体积的15%高氯酸能有效的沉淀肝匀浆蛋白(98.3%±0.92%)与抽提槟榔碱(90.6%±2.1%),在碱性条件下,乙醚萃取3次.样品回收率达80%以上.结论 离子对RP-HPLC法可作为槟榔碱测定的敏感方法,低检出限度可达1 ng;15%高氯酸沉淀匀浆蛋白、氨水碱化后乙醚萃取的样品处理适合于组织匀浆等生物材料中槟榔碱的提取.
关键词： 肝组织匀浆 槟榔碱 离子对RP-HPLC法 -
槟榔系列2槟榔的正、负面生理效应
槟榔(Semen Arecae)是棕榈科植物(Areca Catechu L)的成熟种子,主要产于我国海南、广东、广西、云南、福建、台湾、印度和马来西亚等国.
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氢溴酸槟榔碱与氯硝柳胺合用灭钉螺增效作用的研究
目的证明合成氢溴酸槟榔碱(arecoline,Are)与氯硝柳胺(Niclosamide,Nic)合用有显著的灭钉螺增效作用.方法室内浸泡试验,试验分为4组,每组30只钉螺.分别于3、6、24 h观察钉螺开厣率和上爬附壁率和死亡率.现场实验,设计浓度为0.1 mg/L的槟榔碱与0.2 mg/L的氯硝柳胺复配的样品组和2 mg/L的氯硝柳胺组及非施药去氯水组为对照组,分别进行浸泡法(选择10 m ×2 m×1 m的水沟3条)和滩地喷洒法(选择10 m×5 m的滩地3块)灭钉螺,同时观察鱼类死亡情况.结果室内实验:在0.1 mg/L、0.2 mg/L的氯硝柳胺溶液中分别加入0.1 mg/L的槟榔碱,其6 h钉螺开厣率分别由20%和12%升高至100%和95%;上爬率分别由17%和53%下降至3%和5%;24 h钉螺的死亡率分别由25%和40%增加至90%和100%.现场实验:浸泡法、滩地喷洒法的样品组和对照组72 h后钉螺死亡率分别为95.9%、93.3%和100%、95.8%;复配药组仅有1条鱼苗(体长2 cm)死亡,而氯硝柳胺组的鱼类全部死亡,未施药的去氯水对照组中无死亡.结论证明了槟榔碱与氯硝柳胺联合灭钉螺,确实具有降低灭钉螺药的剂量、减少化学药物对水生物毒性、增强灭钉螺效果的作用.
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HPLC同时测定四磨汤口服液中辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定的含量
目的:建立同时测定四磨汤口服液中辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱Agilent SCX(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.2％磷酸(2～1 000 mL水,氨水调pH 3.8)(65∶ 35),检测波长215 nm,流速1 mL· min-1,柱温35℃.结果:辛弗林在0.05～2.55 μg线性良好(r=0.999 9),槟榔碱在0.13 ～2.59 μg线性良好(r =0.999 8),去甲异波尔定在0.04～2.01 μg线性良好(r=0.999 9).辛弗林、槟榔碱和去甲异波尔定平均加样回收率分别为99.8％,100.6％,100.61％.结论:该方法简便、准确、可靠,对四磨汤口服液质量标准提高具有一定参考价值.
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槟榔不同工艺处理品中3种生物碱的含量比较
目的:建立测定槟榔中槟榔碱、槟榔次碱、去甲基槟榔次碱的HPLC-DAD方法,并比较不同处理工艺对3种生物碱含量的影响.方法:采用Partisil 10 SCX阳离子色谱柱(4.6 mm ×250 mm,10 μm),流动相乙腈-0.5％磷酸(三乙胺试液调pH 3.8)(50∶50),流速1 mL· min-1,检测波长215 nm,柱温25℃.考察不同烘烤时间和不同煮沸时间条件下,槟榔皮、核中3种生物碱含量的变化.结果:生物碱的含量随烘烤或者煎煮时间的延长而降低,在不同工艺条件下降低程度不同,100℃烘烤8h后生物碱的损失率约50％,煮沸0.5h后损失率高达80％,说明煎煮对槟榔皮、核中生物碱含量的影响较烘烤要大.结论:所建立的HPLC-DAD方法适用于槟榔生物碱的定量分析,为开发槟榔药食两用的安全剂量标准提供实验依据.
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LC-MRM-MS法同时测定香槟方10个成分的含量
目的:建立运用液相色谱-多反应监测扫描模式-质谱法(LC-MRM-MS)同时测定香槟方中10个成分(人参皂苷Rc,人参皂苷Rd,人参皂苷Rg1,槲皮素,槲皮苷,异槲皮苷,乌药醚内酯,槟榔碱,去甲异波尔定,苦杏仁苷)含量的分析方法.方法:采用Waters BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm),以0.5‰甲酸-水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.2mL/min,柱温为室温;采用电喷雾离子源(ESI),正负离子检测,多反应监测扫描模式(MRM)分析,毛细管电压为3.5kV,去溶剂化温度600℃,去溶剂化气流量为550L/Hr,雾化器压力为6.2Bar.结果:10个成分在质量浓度范围内线性良好,平均加样回收率为94.52％-111.15％,RSD均小于3.01％.结论:该分析方法特异、快速、灵敏,重复性好,可为香槟方的质量控制提供依据.
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HPLC同时测定大腹皮中4种生物碱含量
目的:建立同时测定大腹皮中4种生物碱含量的HPLC方法,为控制大腹皮及其制剂质量提供依据.方法:采用Thermo SCX色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈-0.1％磷酸溶液(浓氨试液调节pH值为3.3)(73:27)为流动相,等度洗脱;检测波长215nm;流速1.0mL/min;柱温30℃.结果:上述色谱条件下,4种成分分离较好,在一定范围内,氢溴酸槟榔碱、盐酸槟榔次碱、氢溴酸去甲槟榔碱、盐酸去甲槟榔次碱线性关系良好,加样回收率分别为96.9％、103.0％、102.8％、102.3％,RSD分别为1.82％、1.45％、1.75％、1.12％.结论:本法准确、简便,重复性好,可用于大腹皮中4种生物碱含量测定,可作为大腹皮及其制剂多指标质量评价和控制体系的参考依据.
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基于多元统计分析的食用槟榔及药用槟榔主要化学成分的含量对比研究
目的:研究食用槟榔及药用槟榔中主要化学成分的含量差异.方法:采用高效液相色谱法(HPLC)和磷钼钨酸/干酪素紫外一可见分光光度法(UV)分别测定药用槟榔饮片、食用槟榔中槟榔碱和鞣质的含量,并采用方差分析和主成分分析法对主要成分的含量进行多元统计分析.结果:针对槟榔碱和鞣质的含量,药用槟榔3种制品均与食用槟榔存在显著差异(P＜0.05),且食用槟榔中槟榔碱和鞣质含量均明显低于药用槟榔.食用槟榔及药用槟榔可以进行区分,但无法对药用槟榔的不同炮制组进行区分.结论:被认定为一级致癌物的食用槟榔中槟榔碱和鞣质成分的含量明显低于药用槟榔,因此,针对毒效成分含量更高的药用槟榔饮片,其是否会对人体造成潜在性损害的问题应得到重视.
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RP-HPLC法测定胃通颗粒中槟榔碱的含量
胃通颗粒由乌药、槟榔等药组成,具理气消胀、和胃清热的功效,主治功能性消化不良,是即将批准的三类中药新药.其中,槟榔中所合成分槟榔碱,具有兴奋胆碱受体的作用,使消化液分泌旺盛,增加食欲,是槟榔中的特征性及主要活性成分.文献报道槟榔药材中槟榔碱的含量测定,方法主要有水蒸气蒸馏后酸碱滴定法、非水滴定法、电位滴定法、极谱法、酸性离子比色法、薄层扫描法,液相色谱法主要为离子交换色谱法[1].
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槟榔及其活性物质的研究进展
大量的临床实践及研究表明槟榔具有驱虫、消积、利气利水、利湿除疸等功效.槟榔碱是其从棕榈科植物槟榔中提取的主要的保健和药理活性成分,对人体功能也有着广泛的影响.近年来国内外学者对槟榔及槟榔碱的药理、生理作用、免疫等方面进行了大量的研究,现将槟榔及其活性成分研究进展进行综述.
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同源中药大腹皮与槟榔中4种生物碱的含量比较研究
该研究建立了大腹皮(槟榔果皮)及槟榔(槟榔种子)药材中4种生物碱类成分(槟榔碱、去甲槟榔碱、槟榔次碱、去甲槟榔次碱)HPLC同步测定方法,并对槟榔不同药用部位的生物碱含量进行比较.色谱条件为:Welch SCX (4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液(浓氨水调节pH 3.85～3.90)50∶50,流速0.5 mL· min-1,柱温35℃,检测波长215 nm.通过对7批槟榔及10批大腹皮进行含量测定结果分析,显示槟榔种子(即槟榔药材)部位的4种生物碱质量分数(槟榔次碱0.020％～0.045％,去甲槟榔次碱0.031％～0.086％,槟榔碱0.194％～0.346％,去甲槟榔碱0.065％～0.094％)均高于槟榔果皮(即大腹皮)部位(槟榔次碱0.010％ ～0.032％,去甲槟榔次碱0.006％～0.029％,槟榔碱0.00％～0.070％,去甲槟榔碱0.00％～0.020％).果皮中大部分不含槟榔碱和槟榔次碱.提示不同的生物碱种类和含量限度可用于区分槟榔的不同药用部位,槟榔碱、去甲槟榔碱、槟榔次碱、去甲槟榔次碱可作为槟榔药材的质量控制指标,而大腹皮则应控制槟榔次碱及去甲槟榔次碱的含量.
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槟榔碱对大鼠门静脉和钙通道电流的剂量与效应关系
目的探讨槟榔碱(Arecoline,Are)对大鼠门静脉和钙通道电流(Ica)的剂量与效应的关系,阐明Are灭螺增效的作用机制.方法采用离体大鼠门静脉自发性收缩活动的实验方法和全细胞膜片钳记录技术,研究Are的剂量与效应关系,及其对Ca2+和Ic.的影响.结果不同浓度的Are对大鼠门静脉的收缩力呈双相反应.10-7～3×10-7mol/LAre使门静脉的收缩力增强;10-5～10-4mol/L则使收缩力逐渐抑制,均呈浓度依赖性.Are 3×10-8～10-4mol/L对单个心室肌细胞钙通道电流的作用与门静脉一致,亦呈浓度依赖性的双相反应.门静脉收缩活动和全细胞记录钙通道电流的结果证明,不同浓度的Are对Ca2+和Ica均显示有剂量与效应关系,低浓度有促Ca2+及增加Ica作用,高浓度有阻Ca2+内流及降低Ica作用.结论阻钙作用可能是Are降低钉螺上爬附壁率、灭螺增效作用的理论依据.
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槟榔碱与杀螺药物合用对钉螺足跖肌及神经节细胞影响的透射电镜观察
为研究槟榔碱(Arecoline,ARE)与杀螺药物合用对钉螺足跖肌和神经节细胞超微结构的影响,探索其灭螺增效的作用机制.用加入和未加入ARE的灭螺药物分别浸泡钉螺24 h后,运用透射电镜观察25 mg/L ARE单用或与杀螺药合用对钉螺足跖肌及神经节细胞超微结构的影响.结果25 mg/L ARE、0.625 mg/L五氯酚钠(NAPCP)、0.0625 mg/L氯硝柳胺(NIC)单用时,用药组钉螺足跖肌及神经节细胞超微结构与正常钉螺基本相同.而25 mg/L ARE分别与0.625 mg/L NAPCP、0.0625 mg/L NIC合用时,钉螺足跖肌及神经节细胞均发生明显改变.足跖肌纤维的肌丝被破坏,细胞器消失,核膜残缺,染色质凝集成团;神经节细胞高度变性坏死,成为一团低电子密度与高电子密度均匀混合的物质.结果表明,ARE能增强灭螺药对钉螺足跖肌和神经节细胞的破坏作用.
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低浓度槟榔碱杀螺作用的实验观察
采用WHO推荐的"杀螺剂实验室终筛法"中的浸泡法,将受试钉螺分为6组,分别投入浓度为0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L的槟榔碱溶液中,对照组溶液分别为2.0 mg/L的氯硝柳胺以及去氯自来水.经上述浓度槟榔碱作用1 h,钉螺的开厣率依次为55.6%、90.0%、92.2%、95.6%,附壁率均为0,氯硝柳胺对照组开厣率为13.3%,附壁率为1.1%,去氯水组开厣率及附壁率均为77.8%;槟榔碱作用24 h钉螺死亡率依次为91.2%、95.6%、84.4%、73.3%,氯硝柳胺对照组为100%,去氯水组为0.24 h内不同浓度槟榔碱组钉螺头足部软体均肿胀明显,对照组无肿胀.表明槟榔碱在极低浓度时即具有显著的杀灭钉螺作用,且能够抑止钉螺上爬附壁.
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健行颗粒对3种拟帕金森病震颤模型小鼠的干预作用
目的建立肌肉震颤及线粒体功能障碍致3种拟帕金森病震颤小鼠模型,并在此3种模型上观察健行颗粒的药效学作用,探讨其可能的作用机理.方法经氧化震颤素和槟榔碱单次腹腔注射建立小鼠肌肉震颤模型;经MPTP 20mg/kg连续8天腹腔注射建立线粒体损伤致震颤小鼠模型.记录震颤素和槟榔碱模型小鼠震颤持续时间;观察MPTP模型小鼠爬杆行为及自主活动次数的改变,经高效液相色谱测定MPTP模型小鼠纹状体内多巴胺及其代谢产物含量的改变.结果模型组小鼠在给予震颤素或槟榔碱腹腔注射后出现明显震颤,健行颗粒用药组小鼠震颤持续时间较模型组明显缩短;对于MPTP小鼠模型,模型组小鼠爬杆时间延长,运动协调性降低,纹状体内多巴胺含量明显降低,健行颗粒用药组小鼠爬杆时间较模型组明显缩短,自主活动数增加,纹状体内多巴胺含量增高.结论槟榔碱及氧化震颤素均能制备良好的肌肉震颤小鼠模型,健行颗粒能明显减少模型动物肌肉震颤持续时间;对于MPTP腹腔注射拟帕金森小鼠模型,健行颗粒能明显缩短其爬杆时间,增强小鼠自主活动能力,提升小鼠脑纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量.
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环氧合酶-2在口腔黏膜下纤维性变癌变过程中作用研究
目的探讨环氧合酶-2(COX-2)在口腔黏膜下纤维性变(OSF)癌变组织中的表达,观察槟榔碱对人口腔角质形成细胞(KC)COX-2表达的影响.方法应用免疫组化SP法检测15例OSF癌变组织,30例OSF组织,10例正常口腔黏膜中COX-2蛋白表达,Western-blot法检测不同浓度槟榔碱(30、60、90 ug/mL)对KC COX-2蛋白表达的影响.结果 COX-2在正常黏膜组织中无明显表达,在OSF组织及OSF癌变组织中阳性表达率分别是36.7%(11/30)、80.0%(12/15),且癌变组织中表达强度明显高于OSF组织(P＜0.05);槟榔碱呈剂量依赖性增加KC COX-2蛋白表达,不同浓度槟榔碱组均高于空白对照组(P＜0.05).结论 COX-2在OSF癌变组织中表达异常增高,槟榔碱能增加KC COX-2表达,COX-2过度表达可能在OSF癌变过程中起一定作用.
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槟榔碱促结肠平滑肌细胞收缩及对胞内钙离子浓度的影响
目的:观察氢溴酸槟榔碱(Ah)促进培养的结肠平滑肌细胞收缩作用及对胞内游离Ca2+浓度的影响.方法:培养大鼠结肠平滑肌细胞,分为4组:正常对照组、Ah刺激组、乙酰胆碱(Ach)刺激组、阿托品预处理组.应用特异性Ca2+荧光批示剂Fluo-3/AM负载细胞,激光共聚焦显微镜检测游离Ca2+浓度和细胞收缩率.结果:正常对照组细胞未发生自主性收缩,因指示剂的衰减,荧光强度(FI)有递减的趋势;Ah刺激组在加药后短时间内胞内钙离子浓度迅速升高,出现一个波峰,FI平均基础值与峰值有差异(P＜0.05),而后胞内钙离子浓度再缓慢攀升,在484.0±47.6 s达到高峰,而后有一个较长时间的平台期,在1 400s左右恢复至静息水平,FI基础值与峰值有显著差异(P＜0.01),细胞收缩百分数为20.70%±0.07%;Ach刺激组在加药后胞内钙离子浓度升高,形成一个小波峰,FI基础值和峰值差异有显著性(P＜0.01).随后胞内钙离子浓度缓慢攀升,在600 s左右达到高峰,而后有一个较长时间的平台期.FI基础值与峰值差异有显著性(P＜0.001);经阿托品预孵育处理后的细胞,加入Ah后,其收缩效应被完全抑制.结论:Ah可引起结肠平滑肌细胞收缩,升高细胞内游离Ca2+浓度.其收缩效应可以被M受体阻断剂阿托品所抑制.
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槟榔碱对脂质过氧化内皮细胞炎性因子表达的影响
动脉粥样硬化(AS)是严重危害人类健康的常见多发病,血管内皮细胞活化是AS发生发展的始动环节.体外条件下,ox-LDL作用于内皮细胞,可导致单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)和细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达异常增高,类似于AS的早期病理学变化.本实验观察了槟榔碱对ox-LDL致培养的内皮细胞损伤的保护作用,并为建立适于大量筛选具有内皮活性的抗AS化合物的体外模型提供实验依据.
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槟榔碱对口腔黏膜肌成纤维细胞分化的影响
目的 探讨口腔黏膜下纤维性变组织中肌成纤维细胞的来源.方法 通过体外口腔黏膜角质形成细胞和成纤维细胞共培养,用免疫组化、反转录聚合酶链反应等方法观察α-平滑肌肌动蛋白的表达.结果 体外培养的口腔黏膜下纤维性变成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的阳性率为(85.80±3.56)%,正常口腔黏膜成纤维细胞中阳性率为(3.82±0.76)%.槟榔碱直接干预成纤维细胞后α-平滑肌肌动蛋白的表达与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);角质形成细胞与成纤维细胞共同培养组成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的表达增强;角质形成细胞经槟榔碱预处理后与成纤维细胞共同培养组α-平滑肌肌动蛋白的表达强于无干预共同培养组.结论 口腔黏膜下纤维性变组织中成纤维细胞向肌成纤维细胞分化可能是槟榔成分与角质形成细胞共同作用的结果.
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槟榔碱及尼古丁对口腔角质形成细胞端粒酶逆转录酶表达的影响
目的 观察槟榔碱及尼古丁对人口腔角质形成细胞(keratinocyte,KC)端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA及蛋白表达的影响.方法 实验分为0.030、0.060、0.090 g/L槟榔碱组、相应浓度槟榔碱+0.025 g/L尼古丁组和空白对照组.采用Western blot和RT-PCR法观察槟榔碱、尼古丁对KC hTERT mRNA及蛋白表达的影响.结果 槟榔碱呈剂量依赖性增加KC hTERT mRNA及蛋白的表达,0.030、0.060、0.090 g/L槟榔碱组hTERT mRNA及蛋白表达均高于空白对照组(P＜0.001),0.025 g/L尼古丁能增加槟榔碱诱导的KC hTERT mRNA及蛋白的表达,对槟榔碱有协同作用.结论 槟榔碱对KChTERT mRNA与蛋白表达有明显的诱导作用,尼古丁对槟榔碱具有协同作用.槟榔碱和尼古丁诱导KC hTERT过表达可能在口腔黏膜下纤维化癌变过程中起重要作用.
