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土荆皮酸诱导卵巢癌细胞系SKOV3凋亡的实验研究
目的:研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的SKOV3细胞的生物学效应和作用机制.方法:用MTT法、流式细胞术、电镜检测体外培养的SKOV3细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测P53/Bcl-2/B8x的表达水平.结果:①PAB对SKOV3细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC50约10μmol/L.②流式细胞术证实PAB呈浓度依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G0G1期的细胞比例,另一方面增高G2/M期细胞的比例.③RT-PCR法显示SKOV3细胞在10μmol/LPAB作用12、24、48h均显示Bax上调和Bcl-2的下调,P53则未检测到表达.结论:在体外PAB能抑制SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与Bax的上调和Bcl-2的下调相关.
关键词： 卵巢癌SKOV3细胞系 土荆皮酸 细胞凋亡 -
卵巢癌细胞系SKOV3冻融抗原诱导CTL特异性杀瘤效应的研究
目的探讨卵巢癌冻融抗原对T淋巴细胞的增殖作用及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在体外杀伤卵巢癌细胞的抗原特异性细胞毒性效应.方法采用免疫磁珠分离法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离纯化正常人外周血CD+3 T细胞,体外以SKOV3卵巢癌细胞中提取的可溶性肿瘤抗原加以刺激.溴标法检测肿瘤抗原对T细胞增殖的影响;MTT法测定肿瘤抗原诱导的CTL体外杀伤卵巢癌细胞的能力;利用绒毛膜癌细胞抗原对比观察肿瘤抗原诱导CTL杀伤肿瘤细胞的抗原特异性.结果卵巢癌细胞抗原有很强的促进T淋巴细胞增殖的作用,且存在时间依赖性,在24 h时促进作用强.SKOV3抗原诱导的CTL在体外对SKOV3细胞的杀伤率为68.38%,显著高于它对JAR绒毛膜癌细胞的杀伤率(18.31%);而JAR细胞抗原诱导的CTL对JAR和SKOV3细胞的杀伤率分别为61.02%和14.79%,有显著的抗原特异性(P=0.0001).结论卵巢癌细胞冻融抗原诱导的CTL在体外具有很强的增殖能力和抗原特异性杀伤卵巢癌细胞的作用.
关键词： 卵巢癌SKOV3细胞系 可溶性肿瘤抗原 细胞毒性T淋巴细胞 抗原特异性 -
RNA干扰PI3K基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响
目的 采用RNA干扰技术沉默人卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/AKT信号转导通路中PI3Kp110α基因,观察其对SKOV3细胞增殖的影响,以期为卵巢癌的基因治疗提供可靠的理论依据.方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,脂质体介导靶向P13Kp110α基因的小干扰RNA(siRNA)转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用免疫荧光双标法观察RNA干扰48h后对PCNA蛋白、CyclinD1蛋白的影响.结果 RNA干扰组PCNA蛋白、CyclinD1蛋白阳性率较对照组与空白载体组明显减少,而对照组与空白载体组相比无明显差别.结论 RNA干扰P13Kp110α基因可下调PCNA蛋白、CyclinD1蛋白的表达,抑制细胞增殖,这种调控可能是通过PI3K/AKT信号通路及其下游靶分子进行的.以PI3Kp110α为靶点的RNA干扰技术有望成为卵巢癌基因治疗的新策略.
关键词： RNA干扰 卵巢癌SKOV3细胞系 PI3K PCNA CyclinD1 -
体外靶向PI3K基因RNA干扰对卵巢癌SKOV3细胞Akt表达的影响
目的 采用RNA干扰技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中PI3K/Akt信号转导通路中关键基因PI3Kp110 α,观察其对PI3K/Akt信号通路下游信号蛋白Akt的影响,以期为卵巢癌的基因治疗提供可靠的理论依据.方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,脂质体介导靶向P13Kp110 α基因的小干扰RNA(siRNA)转染卵巢癌SKOV3细胞,采用荧光定量PCR法检测干扰后PI3K、Akt mRNA的表达,免疫荧光双标法观察RNA干扰48 h后对PI3K、Akt蛋白的影响.结果 Real-time PCR结果示RNA干扰组PI3K、Akt mRNA相对含量显著低于空白载体组和对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05),而空白载体组与对照组表达差异无统计学意义(P＞0.05);免疫荧光细胞化学结果示RNA干扰组的PI3K、Akt蛋白阳性率较对照组与空白载体组明显减少,而对照组与空白载体组比较无明显差异.结论 siRNA可沉默卵巢癌SKOV3细胞P13Kp 110α基因的表达,同时减轻PI3K蛋白及下游信号蛋白Akt的表达,以PI3Kp110α为靶点的RNA干扰技术可望成为卵巢癌基因治疗的新策略.
关键词： RNA干扰 卵巢癌SKOV3细胞系 PI3K AKT
