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四藤方对人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长及凋亡作用
目的:观察清热解毒中药四藤方对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤生长及凋亡影响.方法:人胃癌SGC-7901细胞BALB/C裸小鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组、四藤方组、5-Fu组3组,每组10只;对照组予0.9％氯化钠溶液0.3mL灌胃,1次/d;四藤方组予四藤方煎剂0.3mL灌胃,1次/d;5-Fu组予5-Fu 1mg腹腔注射,每周1次,每次1mg;观察各组裸小鼠移植瘤生长情况.TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白半胱天冬酶-8(Caspase-8)、Caspase-9表达情况.结果:四藤方组、5-Fu组肿瘤生长变缓,裸小鼠移植瘤体积、质量与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);TUNEL检测显示四藤方组、5-Fu组移植瘤细胞凋亡率高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);四藤方组与5-Fu组治疗后移植瘤组织Caspase-8、9蛋白表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论:四藤方可以抑制SGC-7901胃癌肿瘤生长,可能与促进细胞凋亡,上调凋亡相关蛋白Caspsse-8、9表达相关.
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可溶性CD40配体对白血病HL-60细胞Caspase-3及Caspase-8表达的影响
目的 Caspase-3和Caspase-8在多种肿瘤中异常表达,与白血病的疗效等密切相关.本研究分析可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,sCD40L)对人白血病HL-60细胞Caspase-3及Caspase-8表达的影响,探讨其对HL-60细胞的作用机制.方法 2.0、4.0和6.0 mg/L的sCD40L作用HL-60细胞48 h,采用流式细胞术检测HL-60细胞凋亡水平及细胞周期,RT-PCR检测HL-60细胞中Caspase-3和Caspase-8基因的表达水平,蛋白质免疫印迹法检测HL-60细胞中Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达.结果 2.0、4.0和6.0 mg/L的sCD40L作用HL-60细胞48 h后,浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡,凋亡率分别为(48.17±3.22)％、(60.73±5.46)％及(71.26±5.83)％,与对照组(36.42±2.75)％比较,差异有统计学意义,F=36.373,P=0.003.sCD40L阻滞HL-60细胞在G0/G1期,RT-PCR结果显示,Caspase-3和Caspase-8 mRNA的表达上调;蛋白质印迹法结果显示,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达增强.结论 sCD40L在体外能够以浓度依赖性促进HL-60细胞凋亡,阻滞细胞在G0/G1期,其可能机制是通过激活Caspase-3和Caspase-8.
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Fas通路在扇贝多肽抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡中的作用
目的 从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角质形成细胞株(immortalized human keratino,HaCaT)细胞凋亡的作用机制.方法 实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68 mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69 mmol·L-1PCF组、UVB+2.84 mmol·L-1PCF组、UVB+1.42 mmol·L-1PCF组.以正交实验设计确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳和荧光染色(Hoechst 33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测FADD及caspase-8蛋白的表达.结果 PCF能明显抑制UVB引起的HacaT细胞凋亡;z-IETD-fmk对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有明显抑制作用;1.42～5.69 mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas,FADD的表达增加及caspase-8的活化.结论 PCF可剂量依赖性抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas,FADD的表达及caspase-8的活化有关.
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Caspase-8 和Caspase-3在大鼠急性心肌损伤中的作用及药物预处理对其影响
目的:研究半胱天冬酶-8(caspase-8 )、半胱天冬酶-3(caspase-3)在异丙基肾上腺素(isoprenaline,Iso)致大鼠急性心肌损伤心肌细胞凋亡中的作用及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)预处理对其影响.方法:将Wistar大鼠随机分成三组:对照组、Iso损伤组和bFGF预处理组,光镜观察心肌组织病理变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化和RT-PCR法检测caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平,底物降解法测定酶活性.结果:损伤组心肌坏死较重,心肌细胞凋亡显著,且caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平明显升高,酶活性增加;预处理组心肌坏死明显减轻,细胞凋亡减少,caspase-8 、caspase-3蛋白及mRNA的表达水平明显下降,酶活性受抑制.结论:bFGF预处理可能通过抑制caspase-8 、caspase-3的表达及酶活性以减少心肌细胞凋亡从而减轻大鼠心肌损伤.
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抗肿瘤药物新靶点半胱天冬酶-10
细胞凋亡过程是依赖天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶(半胱天冬酶)产生的级联反应.半胱天冬酶-10是凋亡途径中关键的启动子,能够通过寡聚而自身切割活化,并能激活下游其他半胱天冬酶,参与细胞凋亡过程.半胱天冬酶-10基因突变及其它表达异常可导致细胞凋亡和增殖失调,从而参与某些肿瘤和免疫系统疾病的发生和发展.半胱天冬酶-10有可能是抗肿瘤药物的新靶点.
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蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的作用及其机制
蓝萼甲素(glaucocalyxin A)是由唇形科香茶菜属植物香茶菜Rabdosia amethystoieds (Benth)Ham中分离提取出的二萜化合物,可抑制SiHa、Hela、HL-60等细胞株增殖[1].本文研究了蓝萼甲素对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,并初步探讨其机制.
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肾透明细胞癌易感性与半胱天冬酶8基因-652 6N ins/del多态性的关系
目的 探讨中国汉族人群半胱天冬酶8(CASP8)基因-652 6N ins/del多态性与肾透明细胞癌(CCRCC)易感性的相关性.方法 采用以医院为基础的病例-对照研究,通过问卷调查获取并采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测年龄和性别匹配的中国汉族300例患者和300例正常人群的CASP8-652 ins/del基因型.并采用分层分析进一步探讨与罹患CCRCC相关的可能因素.结果 与ins/ins基因型携带者比较,ins/del基因型(OR =0.78,95％CI=0.55 ～1.09)或del/del基因型(0.34,0.14～0.83)携带者发生CCRCC的危险性明显降低.分层分析显示性别、体质量指数及饮酒与CCRCC危险性之间无明显相关,携带ins/del或del/del基因型的年轻非吸烟患者发生CCRCC的危险性明显降低(年龄:0.56,0.35～0.88;非吸烟:0.56,0.37～0.85).结论 CASP8-652 ins/del多态性可能与我国汉族人群CCRCC易感性有关,ins/del基因型或del/del基因型携带者发生CCRCC的危险性要明显低于ins/ins基因型携带者.
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中药复方PRD对OLETF大鼠视网膜细胞凋亡的干预作用
目的:探讨中药复方菩人丹(PRD)对OLETF大鼠视网膜中自杀相关因子(fas)和半胱天冬酶-8(caspase-8)表达的干预作用.方法:将24只成模的OLETF大鼠随机分为PRD治疗组、糖尿病模型组,每组均为12只,同周龄12只雄性LETO大鼠为正常对照组,PRD治疗组大鼠连续灌胃PRD,1.8 g/kg,1次/d,2个月.HE染色观察大鼠视网膜的形态结构改变;TUNEL法检测OLETF大鼠视网膜神经细胞的凋亡情况;免疫组化法和Western Blot方法检测OLETF大鼠视网膜fas和caspase-8表达的蛋白;RT-PCR方法检测各组大鼠视网膜中fas和caspase-8 mRNA的表达情况.结果:与正常对照组LETO大鼠相比,OLETF模型组的大鼠视网膜出现了明显的病理变化,神经细胞的凋亡指数、fas、caspase-8的蛋白及mRNA表达明显升高(P＜0.01).与模型组大鼠相比,PRD治疗组大鼠视网膜的病理变化明显减轻,神经细胞的凋亡指数、fas、caspase-8蛋白及mRNA表达明显降低(P＜0.01).结论:PRD可通过抑制fas、caspase-8的表达,减少糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,从而起到保护糖尿病视网膜神经组织的作用.
