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强直性脊柱炎患者外周血中IL-18、IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平变化的初步研究
白细胞介素(interleukin,IL)18,原名IFN-γ诱导因子,可诱导Th1反应,在各种过敏性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病及感染性疾病中起免疫调节作用[1].但强直性脊柱炎(AS)患者有无IL-18的表达,IL-18的促Th1反应及促炎性损伤方面的作用是否与AS的病理过程有关,是否参与了AS患者Th1/Th2细胞因子平衡的调节,均有待明确.本文以β-actin为内参照,以IL-4、IFN-γ分别作为Th1、Th2细胞因子的指标,用半定量反转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定AS患者、正常对照者外周血单个核细胞(PBMC)中IL-18、IL-4、IFN-γmRNA水平,观察IL-18与IL-4、IFN-γ及疾病活动指标红细胞沉降率(ESR)和C反应蛋白(CRP)的相关性.试图从细胞因子及其平衡调节这一角度了解AS的发病机制,为AS的诊断与治疗提供新的思路.
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荧光实时定量 PCR 检测 STAT 6圈套寡核苷酸对支气管哮喘小鼠脾淋巴细胞转录IL-4 mRNA 的影响
目的：研究STAT6圈套寡核苷酸（ODN）对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠脾淋巴细胞转录IL‐4 mRNA的影响作用。方法实验细胞分组：空白组（A组）、哮喘OVA组（B组）、治疗哮喘OVA组（C组）、干扰哮喘OVA组（D组）、脂质体哮喘OVA组（E组）。设计并人工合成STAT6圈套ODN及无序ODN ，全硫代修饰的ODN。用OVA和氢氧化铝复制哮喘模型，用淋巴细胞分离液分离小鼠脾淋巴细胞，体外培养后，导入由阳离子脂质体2000转染剂携带的圈套ODN进入淋巴细胞培养，抽提RNA进行反转录，建立实时荧光聚合酶链反应（PCR）反应条件，通过比较ct进行基因表达的相对定量分析。观察圈套ODN的转染对脾淋巴细胞转录IL‐4 mRNA的影响。结果 A、B、C、D、E组的IL‐4 mRNA分别表达为：0．02545±0．00433，0．06742±0．00128，0．03151±0．00530，0．06504±0．00775，0．05952±0．00561。A组和C组低于B组、D组和E组，其差异有统计学意义（ t＝6．204，P＜0．01），C组和A组间差异无统计学意义（t ＝1．310，P ＞0．05），B组和D组、E组之间的差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论熔解曲线分析结果证明了PCR反应的特异性，应用SYBRG reen I实时荧光PCR可以特异、准确地分析STAT6圈套ODN能下调STAT6活性，降低转录IL‐4 mRNA的表达。
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体外循环中T淋巴细胞IL-4 IFN-γmRNA的表达变化及意义
目的研究体外循环(CPB)中T淋巴细胞IL-4、IFN-γmRNA的表达变化及意义.方法随机抽取年龄6～12岁先心病患儿30例,分别于术前24h、CPB开始20min、CPB结束前、术后6 h、术后24h抽取静脉血,分离T淋巴细胞,提取RNA,RT-PCR测定IL-4、IFN-γmRNA表达.结果CPB开始20min,T淋巴细胞IL-4 mRNA表达明显升高,在CPB结束前达到峰值,术后24 h逐渐恢复至术前水平;IFN-γmRNA表达在CPB开始20min下调,CPB结束前达到谷底,术后24 h逐渐恢复至术前水平.结论CPB引起T淋巴细胞IL-4 mRNA表达上调、IFN-γmRNA下调,说明CPB可导致Th1/Th2失衡,在CPB创伤、炎性反应中可能起重要作用.
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卡介菌多糖核酸和地塞米松对哮喘大鼠IFN-γ/IL-4 mRNA表达的对比研究
从分子水平探讨卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对哮喘大鼠Th1、Th2型细胞因子IFN-γmRNA和IL-4 mRNA表达的影响以探讨BCG-PSN治疗哮喘的可能机制,并与地塞米松的作用相对比.SD雄性大鼠32只,随机分成盐水对照组、BCG-PSN组、地塞米松和哮喘组四组,每组8只.BCG-PSN组、地塞米松和哮喘组第1、7、14天均用10%鸡卵清蛋白(OVA)1ml联合10%氢氧化铝[AL(OH)3]1ml腹腔注射,第15天起分别以BCG-PSN、地塞米松、生理盐水腹腔注射治疗哮喘,每次治疗后30 min以10%OVA雾化吸入激发哮喘,持续30 min,持续7 d,盐水对照组则以生理盐水腹腔注射和雾化,四组后一次雾化吸入后24 h,以1%戊巴比妥钠麻醉大鼠,收集右上肺组织100 mg,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量测定卡介菌多糖核酸和地塞米松对哮喘大鼠肺组织中IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA表达的影响.结果:BCG-PSN组哮喘大鼠肺组织中IFN-γmRNA表达明显增加,高于正常组、地塞米松组和哮喘组(P＜0.05、0.05、0.01,IL-4 mRNA表达低于哮喘组和正常组.地塞米松组IL-4 mRNA表达低于正常组和哮喘组,IFN-γmRNA表达低于BCG-PSN组而高于哮喘组.哮喘组IL-4 mRNA明显高于正常组、BCG-PSN组、地塞米松组.IFN-γ mRNA明显低于其余三组(P＜0.05).卡介菌多糖核酸能明显增强哮喘大鼠肺组织中Th1类细胞因子IFN-γ mRNA的表达,同时抑制Th2类细胞因子IL-4 mRNA的表达,通过双向调节作用提高IFN-γ/IL-4的比值从而逆转Th1/Th2失衡.地塞米松能明显抑制Th2类细胞因子IL-4 mRNA的表达,而对Th1类细胞因子IFN-γmRNA的表达无明显改变.
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哮喘大鼠血单个核细胞中STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的表达及布地奈德的影响
目的 研究哮喘大鼠血单个核细胞中信号转导和转录激活因子STAT5b mRNA和IL-4mRNA的转录表达及布地奈德(BUD)对其表达的影响.方法 30只体重为140～200 g清洁级SD雌性大鼠,随机分为3组:哮喘组(A组)、BUD组(B组)、正常对照组(C组).对血中嗜酸性粒细胞(EOS)计数;应用双抗体夹心ELISA测定血浆中IL-4和IFN-γ水平;采用SYBR GREENI荧光定量PCR法测定STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的相对含量.结果 (1)A组血中单个核细胞STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的表达均高于B组和C组(P＜0.01);B组与C组之间差异无统计学意义(P＞0.05).(2)STAT5bmRNA与IL-4mRNA的表达呈正相关(P＜0.01),且两者的表达分别与血浆中的IL-4水平、EOS绝对值呈正相关(P＜0.01),与血浆中IFN-γ水平呈负相关(P＜0.01).结论 哮喘大鼠血中单个核细胞STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的表达增强且呈正相关;布地奈德可以下调STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的表达,可能是其抑制哮喘气道炎症形成的重要机制之一.
关键词： 哮喘 布地奈德 单个核细胞 STAT5b mRNA IL-4 mRNA -
孟鲁司特和卡介苗多糖核酸对哮喘大鼠血单个核细胞中STAT5b mRNA和IL-4 mRNA表达的影响
目的 研究孟鲁司特和卡介苗多糖核酸对哮喘大鼠血单个核细胞中信号转导子和转录激活子5b(STAT5b)mRNA和白细胞介素4(IL-4)mRNA的转录表达的影响.方法 52只体重为140～200 g清洁级Spra-gue-Dawley雄性大鼠,随机分为4组:哮喘组、孟鲁司特组、卡介苗多糖核酸组和正常对照组.用卵白蛋白制备大鼠哮喘模型.计数血中嗜酸性粒细胞(EOS);应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定血浆中IL-4和γ-干扰素(IFN-γ)浓度;采用SYBR GREEN I荧光实时定量PCR法测定STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的相对表达量.结果 ①哮喘组血单个核细胞中STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的表达量高于其他各组(P<0.01);在孟鲁司特组和卡介苗多糖核酸组中两者的表达量相近(P0.05).哮喘组除了IFN-γ水平低外,其余无论是STAT5b mRNA,IL-4mRNA,EOS绝对值等都是4组中高的(P<0.01);除哮喘组外,其余组的各项指标相近(P0.05).②STAT5bmRNA表达量与IL-4 mRNA表达量、IL-4浓度、EOS绝对值呈正相关(P<0.01),与IFN-γ浓度呈负相关(P<0.01).结论 哮喘大鼠血单个核细胞中STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的表达增强且呈正相关;孟鲁司特和卡介苗多糖核酸可以下调STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的表达,可能为其抑制哮喘气道炎症形成的重要机制之一.
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重组干扰素-γ对哮喘患者外周血单核细胞IL-4和IL-10 mRNA表达的调节作用
目的:研究重组干扰素-γ对哮喘患者外周血单核细胞(PBMC)IL-4和IL-10 mRNA表达的调节作用.方法:哮喘患者9例、正常人5例的外周静脉血,ficoll-hypaue密度梯度离心分离PBMC,分为2组进行培养,A组加入rIFN-γ,0.2 U*μl-1 ;B组为不加rIFN-γ的对照组.在37 ℃ ,5%CO2培养箱中培养48 h后,用RT-PCR方法检测PBMC IL-4和IL-10 mRNA表达.结果:哮喘患者PBMC IL-4 mRNA的表达显著高于正常对照组(P<0.05),IL-10 mRNA的表达低于正常对照组(P<0.05).rIFN-γ作用于PBMC 48 h后,哮喘患者PBMC IL-4 mRNA的表达显著降低(P<0.05),IL-10 mRNA的表达明显上升(P<0.05),而健康者PBMC IL-4和IL-10 mRNA的表达均无显著改变(P>0.05).结论:rIFN-γ可能通过下调哮喘患者PBMC IL-4 mRNA的表达、上调IL-10 mRNA的表达而发挥抗炎作用.
