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周氏克金岩方抗肺癌A549细胞有效部位Ⅰ成分分析研究
目的 对周氏克金岩方有效部位Ⅰ的成分进行定性定量分析,为深入研究周氏克金岩方抗肺癌有效部位群物质基础奠定基础.方法 通过试管反应和TLC方法定性鉴别有效部位成分,建立亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量、香兰素-冰醋酸-高氯酸比色法测定总皂苷的含量.结果 周氏克金岩方有效部位Ⅰ中主要含黄酮、皂苷类成分,含量分别为0.85%、1.07%,纯度分别为29.7%、37.4%.结论 周氏克金岩方有效部位Ⅰ中主要含有黄酮和皂苷类成分,总纯度为67.1%.
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周氏克金岩方抗A549肺癌细胞多糖组分的研究
目的 研究周氏克金岩方治疗肺癌的物质基础.方法 用醇沉法提取周氏克金岩方多糖,采用Sevag法纯化,DEAE纤维素阴离子交换树脂制备多糖组分,紫外光谱检测蛋白存留情况,红外光谱分析组方药的归属,采用蒽酮-硫酸比色法测定多糖组分含量.结果 该有效多糖组分在240 am和260 nm处无吸收,其红外光谱图与组方药玉竹、猫爪草和仙鹤草的红外光谱图有很大的相似性,周氏克金岩方中该多糖组分含量为1.41%.结论 抗A549肺癌细胞多糖组分不含蛋白和核酸,来源于组方药玉竹,猫爪草和仙鹤草,周氏克金岩方中含有一定量的多糖组分.
关键词： 周氏克金岩方 多糖 抗肺癌A549细胞活性 -
周氏克金岩方有效部位中黄酮皂苷的分离工艺研究
目的:对周氏克金岩方有效部位中黄酮皂苷类成分进行分离纯化工艺研究,为深入研究周氏克金岩方抗肺癌物质基础、开发新药奠定基础.方法:应用溶剂法分离,以黄酮、皂苷的含量为指标,采用正交设计优选提取物浓度、PH值、静置条件的佳分离工艺条件.结果:有效部位提取物的浓度为0.5g·mL-1,PH=7,常温静置24h,黄酮和皂苷提取物的纯度分别为70.25%和71.32%;结论:用溶剂法分离周氏克金岩方有效部位中的黄酮皂苷部位,分离工艺简单,操作容易,能达到较好的分离效果.
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GC法同时测定周氏克金岩方挥发油配伍前后变化
目的 建立周氏克金岩方(红花、麦冬、苏木、仙鹤草、鱼腥草、猫爪草等)中5个挥发油成分定量测定方法,比较配伍前后含有量变化特征.方法 利用GC法测定5种挥发油成分.HP-innowax型色谱柱(15 m×0.25 mm×0.25 μm)；程序升温,初始为70℃,保持10min,以10℃/min速率升至160℃,保持5 min,以0.5℃/min升至165℃,保持5 min,再以10℃/min速率升至225℃.结果 樟脑、甲基正壬酮、乙酸龙脑酯、癸酸及月桂酸分别在0.007 9 ～0.197 5μg、0.013 6～0.339 5 μg、0.363 4 ～9.085 5μg、0.039 0～0.975 0 μg及0.050 2～1.255 0 μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.17％、98.81％、98.58％、99.40％、100.13％.周氏方挥发油指标性成分量在配伍前后有明显变化,配伍后甲基正壬酮、癸酸、月桂酸量增加为配伍前的274.62％、437.73％、112.63％,樟脑、乙酸龙脑酯量降为配伍前的48.97％、58.86％.结论 此方法操作快速简便、稳定可行,初步反映了该方配伍减毒增效的合理性.
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周氏克金岩方有效成分槲皮素促进肺癌细胞NCI -H460凋亡的相关机制研究
目的 观察周氏克金岩方有效成分槲皮素诱导肺癌细胞NCI-H460凋亡的相关作用机制.方法 采用Hoechst33258染色及透射电镜(TEM)观察槲皮素诱导细胞凋亡的形态学变化,结合Western blot法检测槲皮素对细胞内EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2及凋亡相关通路的影响.结果 各浓度的槲皮素处理细胞24 h后,以25、50μmol/L 2个药物浓度处理组的凋亡特征更为显著,荧光显微镜下可见细胞核或细胞质内浓染致密的颗粒块状荧光；在25 μmol/L槲皮素处理细胞48h后在透射电镜的观察图片中也呈现出了细胞凋亡的特征;Western blot法对信号通路相关蛋白的检测结果表明,12.5μmol/L的槲皮素能显著抑制c-Raf的活化,而在25μmol/L下能促进caspase-3和caspase-7的活化.结论 槲皮素能通过抑制c-Raf的激活,抑制EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2信号通路,同时诱导肺癌细胞凋亡.
关键词： 周氏克金岩方 槲皮素 NCI-H460细胞 ras通路 凋亡 -
周氏克金岩方提取部位抗A549细胞增殖的研究
目的 观察周氏克金岩方提取部位对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响.方法 MTT法观察不同浓度的克金岩方提取部位对肺癌A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞HFL-I生长增殖的影响.Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察A549细胞凋亡的形态变化,同时用流式细胞仪进行细胞周期检测分析.结果 不同浓度提取部位E对A549细胞有不同程度的生长抑制作用;作用48 h后,荧光显微镜下可见A549细胞核固缩,染色质凝聚等凋亡形态学特征;流式检测显示Go/G1期细胞增多,并有凋亡细胞出现.结论 周氏克金岩方提取部位E能够显著抑制肺癌细胞的生长,并对人体正常细胞(胚肺成纤维细胞)无显著影响.
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周氏克金岩方促进舌苔形成相关细胞凋亡作用机制
目的 探讨周氏克金岩方促进舌苔形成相关细胞凋亡的作用机制.方法 体外培养SAS和TCA-8113舌鳞癌细胞,撤除血清模拟舌苔形成相关细胞凋亡环境,周氏克金岩方正丁醇部位作用舌鳞癌细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,ELISA检测细胞培养上清PGE2含量.结果 与对照组相比,周氏克金岩方丁醇部位能够降低舌鳞癌细胞的增殖活性,促进SAS和TCA-8113细胞凋亡率升高,抑制细胞分泌PGE2,且具有剂量和时间依赖性.结论 周氏克金岩方正丁醇部位促进舌苔形成相关细胞凋亡与抑制PGE2合成相关.
