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3种复方中药含药血清对NCI-H460细胞抑制作用的研究
目的:观察3种复方中药含药血清对体外培养的NCI-H460细胞的抑制作用.方法:选用健康成熟SD大鼠,将大鼠随机分为5组,分别为空白组、A复方组、B复方组、C复方组、环磷酰胺组,给药后分离血清,56C灭活30 min,用MTT法检测含药血清在24、48 h时对细胞的抑制作用.结果:24、48 h,三种复方中药含药血清的5％、10％、20％、30％浓度对NCI-H460细胞均有不同程度的抑制作用(P＜0.01),尤以B复方组对NCI-H460细胞作用明显,并呈一定的剂量依赖性.结论:3种复方中药含药血清对体外培养的NCI-H460细胞具有明显的抑制作用.
关键词： 复方中药 NCI-H460细胞 血清药理学 -
半边旗活性物质5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞Iκ Kβ、IκB、p65及p50 mRNA表达的影响
目的 从NF-κB信号通路着手探讨半边旗活性物质5F诱导非小细胞肺癌NCI-H460细胞凋亡发生的机制.方法 MTT法检测5F对NCI-H460细胞的生长抑制作用;用半定量RT-PCR方法检测NCI-H460细胞Iκ Kβ、IκB、p65及p50 mRNA表达水平的变化.结果 5F抑制NCI-H460细胞的生长,其效果与5F的质量浓度和作用时间相关,24、48、72 h的IC_(50)分别为:21.40、4.52、1.02μg/mL;100μg/mL 5F作用NCI-H460细胞6 h后能引起Iκ Kβ和IκB mRNA表达水平显著降低(P<0.05);p65和p50 mRNA水平在作用3 h就发生明显减少(P<0.05).结论 5F诱导NCI-H460细胞凋亡的机制可能是通过抑制核因子-κB(NF-κB)信号通路来实现的.
关键词： 半边旗 5F NCI-H460细胞 核因子-κB(NF-κB) -
黄芪多糖水提工艺的优化及其体外抗肿瘤活性
目的 优化黄芪Astragali Radix多糖水提工艺,并评价其体外抗肿瘤活性.方法 以提取温度、提取时间、料液比为影响因素,多糖提取率为评价指标,均匀设计优化提取工艺.MTT法检测多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖的影响,流式细胞仪检测NCI-H460细胞的凋亡率和细胞周期,Western blot法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达.结果 佳条件为提取温度100℃,提取时间1h,料液比1∶35,多糖提取率3.62％.与对照组相比,多糖组中NCI-H1460细胞的增殖被显著抑制(P＜0.01),并呈浓度依赖性;S期比例、早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率均显著增加(P ＜0.01);Caspase-3表达、Bax/Bcl-2比例均明显提高(P＜0.01).结论 该优化水提黄芪多糖的方法快捷、稳定可靠;黄芪多糖能显著抑制NCI-H460细胞增殖和诱导细胞凋亡.
关键词： 黄芪多糖 水提 体外抗肿瘤活性 NCI-H460细胞 -
鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制
目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制.方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72 h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性.结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72 h时的抑制率达(91.07±1.60)%.鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40 μg/ml鸦胆子油乳作用48 h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14 +3.09)%和(61.57±7.28)%(P＜0.01).鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40 μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P＜0.01).结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖.
关键词： 肺癌 NCI-H460细胞 鸦胆子油乳 凋亡 Caspase-3 -
bcl-2反义寡核苷酸增强NCI-H460细胞对紫杉特尔和放射线的敏感性
目的:研究bcl-2反义寡核苷酸作用于非小细胞肺癌细胞株NCI-H460后,细胞对紫杉特尔、放射线敏感性的变化.方法:紫杉特尔与bcl-2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸联合作用NCI-H460细胞后,MTT法测紫杉特尔半数抑制率(IC50);NCI-H460经bcl-2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸作用后,再用放射线照射,MTT法测定细胞生长抑制率;免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平.结果:靶向bcl-2 mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸与紫杉特尔联合作用于NCI-H460细胞后紫杉特尔的IC50值为(0.101±0.009) μmol/L,与不加寡核苷酸组紫杉特尔的IC50值[(0.183±0.018) μmol/L]或无义寡核苷酸联用紫杉特尔的IC50值[(0.179±0.016) μmol/L]相比,统计学上具有显著性差异(P＜0.05).bcl-2反义寡核苷酸与放射线联合作用NCI-H460细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,分别与单用放射线及bcl-2无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P＜0.05).bcl-2反义寡核苷酸分别与紫杉特尔、放射线作用于NCI-H460细胞后显著抑制Bcl-2蛋白表达,分别与单用紫杉特尔、放射线或无义寡核苷酸联用紫杉特尔、放射线相比,统计学上具有显著性差异(P＜0.05).结论:靶向bcl-2 mRNA的反义寡核苷酸能增强NCI-H460细胞对紫杉特尔、放射线的敏感性.
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花青素对肺癌细胞NCI-H460的体内外抗肿瘤效应
目的 研究花青素对肺癌细胞NCI-H460的体内外抗肿瘤效应.方法 采用细胞记数和台盼蓝拒染法观察对细胞增殖和活力的影响;用MTT比色分析法测定细胞生长抑制率,计算出IC 50值; DNA琼脂糖凝胶电泳测细胞的凋亡; 利用裸鼠肺癌细胞移植瘤模型观察花青素对裸鼠肿瘤生长的抑制作用.结果 花青素可以使NCI-H460细胞的活力明显下降,对NCI-H460细胞具有抑制作用,并有时间和剂量依赖性,IC50值为90.8 mg/ml;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带;花青素对裸鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用.结论 花青素能明显抑制NCI-H460细胞的增殖、诱导细胞凋亡和抑制裸鼠肿瘤的生长.
关键词： 花青素 NCI-H460细胞 细胞增殖 裸鼠 抑制作用 -
周氏克金岩方有效成分槲皮素促进肺癌细胞NCI -H460凋亡的相关机制研究
目的 观察周氏克金岩方有效成分槲皮素诱导肺癌细胞NCI-H460凋亡的相关作用机制.方法 采用Hoechst33258染色及透射电镜(TEM)观察槲皮素诱导细胞凋亡的形态学变化,结合Western blot法检测槲皮素对细胞内EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2及凋亡相关通路的影响.结果 各浓度的槲皮素处理细胞24 h后,以25、50μmol/L 2个药物浓度处理组的凋亡特征更为显著,荧光显微镜下可见细胞核或细胞质内浓染致密的颗粒块状荧光；在25 μmol/L槲皮素处理细胞48h后在透射电镜的观察图片中也呈现出了细胞凋亡的特征;Western blot法对信号通路相关蛋白的检测结果表明,12.5μmol/L的槲皮素能显著抑制c-Raf的活化,而在25μmol/L下能促进caspase-3和caspase-7的活化.结论 槲皮素能通过抑制c-Raf的激活,抑制EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2信号通路,同时诱导肺癌细胞凋亡.
关键词： 周氏克金岩方 槲皮素 NCI-H460细胞 ras通路 凋亡 -
新化合物D261抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖及其作用机制
肺癌是当今恶性肿瘤死亡率高的癌症[1].早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗.但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现.因此,亟需新的抗肿瘤药物[2].天然产物是小分子新药的主要来源.我们在对天然小分子化合物的筛选过程中发现D261(从固体发酵物中提取,纯度大于95%)具有潜在的抗肿瘤活性,且对非小细胞肺癌的抑制作用显著.因此,本文对D261影响非小细胞肺癌NCI-H460及其相关机制作了初步探讨.
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4种中药注射液逆转NCI-H460细胞对吉非替尼耐药作用影响的研究
目的 研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)吉非替尼(gefitinib)分别联合中药注射液(艾迪、消癌平、榄香烯、华蟾素注射液)对非小细胞肺癌(NSCLC)耐药细胞株NCI-H460生长、凋亡的影响,进一步从分子生物学水平研究中药注射液逆转gefitinib耐药的作用.方法 gefitinib与各中药注射液单药或联合用药作用于NCI-H460,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白表达水平.结果 gefitinib与各中药注射液单药处理组均可明显抑制NCI-H460细胞的生长,诱导其凋亡;与单药处理组相比,联合用药组可不同程度提高NCI-H460对gefitinib的敏感性,降低gefitinib对NCI-H460细胞的IC50,促进细胞凋亡,并明显抑制PI3K/Akt/mTOR通路的活化.结论 艾迪、消癌平、榄香烯、华蟾素注射液分别与gefitinib联用可逆转NCI-H460细胞对gefitinib的耐药.
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CD40信号通过TNFR I途径抑制肺癌细胞增殖的研究
背景与目的:CD40活化信号可抑制多种肿瘤细胞体外生长,但其分子机制尚不明确,本研究旨在探讨激发CD40信号对肺癌细胞株NC1-H460、A549的增殖及肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)、膜型TNF-α(mTNF-α)表达的影响及相关机制.方法:免疫荧光标记和流式细胞术检测肺癌细胞表面CD40的表达以及激发CD40对细胞表面TNFR和mTNF-α表达谱的影响;Western blot检测激发CD40对细胞TNFR和mTNF-α蛋白含量表达的影响;采用四氮唑盐(MTTr)比色法抗体中和实验分析阻断TNFR I及TNF-α对CD40激发效应的影响:酶联免疫吸附(ELISA)法检测激发CD40对肺癌细胞培养上清中可溶性TNF-α(sTNF-α)含量的影响.结果:(1)肺癌细胞株NCI-H460、A549表面CD40表达分别为(89.0±3.2)%、(62.2±4.5)%.(2)免疫荧光和流式细胞术示,激发NCI-H460和A549细胞表面CD40分子48 h后.其表面TNFRI表达率分别为(36.2±4.6)%、(38.5±5.9)%,较对照组分别为(7.2±1.9)%、(15.2±3.1)%明显升高(P＜0.05);而其表面TNFRⅡ表达率分别为(5.8±1.2)%、(18.0±1.6)%,较对照组分别为(38.8±4.3)%、(58.1±3.6)%明显降低(P＜0.05);其表面TNF-α表达率分别为(7.0±0.9)%、(8.7±1.1)%,较对照组分别为(15.0±2.1)%、(26.5±3.2)%也明显降低(P＜0.05).(3)Western blot示,激发CD40可使NCI-H460和A549细胞TNFR I蛋白表达增强,TNFRⅡ蛋白表达减弱,而mTNF-α 蛋白表达无明显变化.(4)CD40激发前后肺癌细胞培养上清中未检测到sTNF-α的存在.(5)激发CD40能明显抑制NCI-H460、A549细胞的增殖(P＜0.05).而阻断TNFR I后CIM0信号的细胞增殖抑制效应消失.(6)阻断TNF-α亦可明显抑制两肺癌细胞株增殖(P＜0.05).而同时激发CD40未见两者存在协同效应.结论:CD40信号是通过mTNF-α/TNFR I途径抑制CD40表达阳性肺癌细胞株的体外增殖.
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桂产藿香蓟乙醇提取物的体外抗肿瘤活性研究
[目的]研究桂产藿香蓟乙醇提取物对人肺癌NCI-H460细胞、 人宫颈癌Hela细胞和人肝癌SMMC-7721细胞的体外抗肿瘤活性.[方法]采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法测定不同浓度的藿香蓟乙醇提取物对人肺癌NCI-H460细胞、人宫颈癌Hela细胞和人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,以半数抑制浓度(IC50)评价藿香蓟乙醇提取物抗肿瘤活性.[结果]①抑制率方面:藿香蓟乙醇提取物对NCI-H460细胞表现出高浓度抑制作用,浓度为400μg/ml时抑制作用明显,对NCI-H460细胞24 h、36 h和48 h的抑制率分别为90.0％、91.9％和92.2％;对Hela细胞呈浓度依赖性,藿香蓟提取物浓度为800μg/ml、400μg/ml和200μg/ml时,处理24 h后的抑制率为76.5％、76.5％和56.9％;对人肝癌SMMC-7721表现为高浓度抑制作用,浓度为500μg/ml时对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用明显,24 h、36 h和48 h的抑制率分别为88.0％、89.8％和89.6％.②IC50方面:人肺癌NCI-H460细胞在藿香蓟乙醇提取物分别处理24 h、36 h、48 h的IC50依次为118.26μg/ml、99.15μg/ml、92.24μg/ml;人宫颈癌Hela细胞在藿香蓟乙醇提取物分别处理24 h、36 h、48 h的IC50依次为174.72μg/ml、155.42μg/ml、120.72μg/ml;人肝癌SMMC-7721细胞在藿香蓟乙醇提取物分别处理24 h、36 h、48 h的IC50依次为168.3μg/ml、137.68μg/ml、128.9μg/ml.[结论]藿香蓟乙醇提取物对人肺癌NCI-H460细胞、 人宫颈癌Hela细胞和人肝癌SMMC-7721细胞均有不同程度的抑制作用,对人肺癌NCI-H460细胞的抑制效果更明显.
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青藤碱通过线粒体途径诱导肺癌 NCI －H460细胞凋亡的初步研究
目的：研究青藤碱（sinomenine，SIN）对人肺癌 NCI －H460细胞株的生长抑制及诱导凋亡作用及其机制。方法：四甲基偶氮噻蓝（MTT）法检测细胞增殖的抑制作用，流式细胞仪 AnnexinV ／PI 双染法检测细胞凋亡，TdT 酶介导的 dUTP 缺口末端标记（TUNNEL）方法观察细胞的凋亡，罗丹明123（Rhodamine123）染色流式细胞仪检测线粒体膜电位（ΔΨm）。结果：SIN 对 NCI －H460细胞株生长具有抑制作用并诱导凋亡。Annex-inV ／PI 双染检测细胞的凋亡可见随 SIN 浓度增加，细胞凋亡增加呈浓度依赖性。TUNNEL 阳性的凋亡细胞呈棕黄色，细胞核片段化改变。罗丹明染色检测线粒体膜电位的结果提示在 SIN 作用于 NCI －H460细胞48h后，线粒体膜电位下降，SIN 浓度越高，膜电位下降越显著。结论：SIN 具有明显的细胞毒作用，能诱导 NCI －H460细胞凋亡，SIN 通过线粒体途径诱导 NCI －H460细胞凋亡。
关键词： 青藤碱 NCI-H460细胞 凋亡 线粒体途径 -
三氧化二砷对人大细胞肺癌NCI-H460细胞凋亡影响的研究
目的：研究在临床上，三氧化二砷（As2O3）对人大细胞肺癌（NCI-H460细胞）细胞增殖、凋亡的影响，以探讨新的肺癌治疗方法。方法配制NCI-H460细胞的细胞悬液（浓度为5×104个/mL），给予不同浓度的As2O3干预，并将其分为4组浓度分别为：10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L ，各组干预时间分别为24、48、72 h。细胞增殖抑制率通过MTT法检测，各组细胞形态学的改变通过镜下观察；细胞凋亡的形态学的变化通过原位末端标记法（TUNEL）检测，并与阴性对照组进行比较；按上述干预浓度及干预时间，使用流式细胞仪检测细胞凋亡指数。结果 As2O3对NCI-H460细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加（P＜0.05），凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加（P＜0.05）。结论 As2O3可抑制NCI-H460细胞增殖，诱导其凋亡，且呈时间、剂量依赖性。
关键词： 三氧化二砷 大细胞肺癌 NCI-H460细胞 细胞增殖 细胞凋亡
