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胡萝卜与柴胡的体细胞杂交及其再生愈伤组织的同工酶鉴别
目的:用体细胞杂交技术将中药柴胡的药效成分基因转入胡萝卜,为中药材的种质资源开发、优化和良种选育提供理论与实验数据.方法:取狭叶柴胡的原生质体经300μW@(cm2)-1照射0,1,2 min后分别与胡萝卜原生质体用PEG(聚乙二醇)法进行体细胞杂交,对获得的再生愈伤组织进行形态学、同工酶分析.结果:初步确正9个克隆为狭叶柴胡与胡萝卜的体细胞杂种.结论:为进一步分析杂种中柴胡药效成分的含量及筛选出高药效成分含量的细胞系奠定基础.
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精神分裂症基因研究的现状
精神分裂症患者约占住院精神疾病患者的80％。据1991年北京市16个区县精神分裂症流行学调查资料显示，总患病率为7.12‰［1］，比1982年的5.69‰明显上升；其中有阳性家族史者约占10％～30％。国外学者关于精神分裂症遗传倾向的研究结果显示，双亲均患精神分裂症者的子女患病相对危险度为60％［2］。Moldin等［3］总结1920～1982年的有关精神分裂症家系及双生子的文献得出结果：在复发风险方面，同卵双生子>一级亲属>二级亲属>三级亲属；即使是在不同的家庭环境中教养的双生子，同卵双生子的患病一致性平均为46％，而异卵双生子的患病一致性仅为14％。由此可见，遗传因素在精神分裂症的病因中占很大比重。现就精神分裂症基因研究的现状综述于下。 一、染色体定位 自80年代以来，研究者不仅从受体、神经递质角度探索精神分裂症的发病机制，更趋向于寻找诊断方面的生物学标志，尤其是基因诊断及基因治疗技术。近年来，由于聚合酶链反应(PCR) 技术的应用，从分子生物学水平探索精神分裂症遗传学基础的研究受到重视。同时，在PCR 的基础上发展起多项检测基因突变的新技术，如序列特异性引物扩增(PCR/SSP)、PCR产物的限制性片段多态性分析(PCR/RFLP)、聚合酶链反应单链构象分析(PCR/SSCP)、核酸分子杂交(NAMH)等。 大量的临床及基础研究显示，精神分裂症属于非经典孟德尔遗传，可能是由几个中度效应基因遗传或多个轻度微效基因遗传。Kohler等［4］报道人脑中存在弱传导钙激活的钾通道蛋白家族(small-conductance calcium-activated potassium channels，SK)，分别命名为SK1、SK2和SK3。Chandy等［5］发现SK3基因的编码区靠近氨基端存在2个三核苷酸(CAG)重复序列(编码多聚谷氨酰胺)，其中第2 个CAG重复序列存在高度多态性；精神分裂症患者的CAG重复次数与对照组的差异有显著性。据此可推测，该蛋白内多聚谷氨酰胺长度的变化可能精细调节离子通道的功能，从而影响脑内神经元的功能而导致精神分裂症发病。Wittekindt等［6］和Navon等［7］同时应用体细胞杂交及荧光原位杂交法将SK3基因定位于1q21.3，且确认 2个CAG重复序列位于该基因的第一个外显子内。这与Chandy的结论相同。而在双相情感性精神障碍患者及正常对照者中未发现类似的SK3基因的CAG重复序列。
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可诱导性Bax基因的过表达诱导HCC-9204细胞凋亡
Bax基因是Bcl-2家族中的一员,与Bcl-2家族的广泛氨基酸同源性主要表现在高度保守的BH1和BH2结构域[1].通过对人-仓鼠体细胞杂交DNA和对中期染色体的原位杂的分析,证实人类Bax基因定位于19q13.3～q13.4内[2].并已证实Bax能够形成同源二聚体,且在体内与Bcl-2形成异源二聚体;Bax过表达加速了IL-3依赖的细胞系因去除细胞因子而诱导的凋亡性细胞死亡[3].另外,Bax过表达也能够对抗Bcl-2抑制细胞死亡的活性,在促凋亡因素的刺激下Bcl-2/Bax的比值将决定细胞的生与死[4].本工作中我们旨在研究Bax基因转染HCC-9204细胞是否能诱导该细胞发生凋亡,从而探索Bax基因成为肿瘤基因治疗靶基因的潜在可能性.
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分子标记技术在獐牙菜属植物研究中的应用进展
獐牙菜属植物主产于中国,以其重要的药用价值而被研究者所青睐.分子标记技术近年来发展迅速,作为一种有效的现代手段被广泛用于药用植物的各个研究领域.首次系统综述了随机扩增多态性DNA (RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)、简单重复序列区间(SSR)、ISSR和DNA条形码在獐牙菜属植物体细胞杂交、遗传多样性、种质资源鉴定和系统发育构建等方面研究的应用现状,以期为獐牙菜属植物及相关属植物的研究提供一定的参考.
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人参与胡萝卜体细胞杂交杂种愈伤的鉴定
贵重中药人参与胡萝卜亲缘关系较远，药用植物的优良性状如产量、品质等均由多基因控制，通过部分基因转移不能反映中药的全部物质基础．由于双亲的核基因和胞质基因都参与了融合事件，因而会发生核基因和胞质基因的重组，产生大量多样化的遗传变异个体，筛选获得的体细胞杂种群，可进一步获得我们所期望的新的种质资源，培育创新品种，达到改良物种的目的。用电容合法对人参与胡萝卜进行体细胞融合，对融合再生的25块杂种愈伤从形态学，细胞学，同工酶电泳，SDS-PAGE电泳进行鉴定分析。结果表明有8块为杂种愈伤无性系。测定生理生化指标与有效成分。结果表明获得的8个杂种愈伤组织无性系均含有皂苷．5个比人参含量高．说明人参与胡萝b体细胞杂种提高了人参次生代谢产物含量，体现了杂种优势。
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人参与胡萝卜原生质体PEG融合和电融合研究的比较
由于人参与胡萝卜的双亲的核基因和胞质基因都可能参与融合事件，发生核基因和胞质基因重组，产生大量多样化的遗传变异个体，以期获得新的种质资源。以人参和胡萝卜原生质体为实验材料，筛选出适宜人参胡萝卜悬浮细胞原生质体PEG融合的PEG质量分数为50％，CaCe．2H,．O浓度为2mmol／L，PH值为10。适合人参与胡萝卜叶肉原生质体融合的电融合参数为AC强度40／cm、AC作用时间为40s，DC强度为1000V、作用时间50tzs，脉冲4次，循环2次。
