首页 > 文献资料
-
药用霍山石斛原球茎的液体悬浮培养
目的:考察霍山石斛原球茎在液体培养中增殖、水溶性多糖与总生物碱积累的特征.方法:在霍山石斛试管苗茎段原球茎诱导与继代培养的基础上,进行原球茎的液体悬浮培养,分析原球茎生长动态,用比色法测定水溶性多糖与总生物碱的含量.结果:霍山石斛茎段在NAA或NAA与KT组合的MS培养基上可诱导出原球茎,MS基本培养基适合原球茎继代培养增殖;原球茎在液体悬浮培养中大比生长速率0.044 * d-1,倍增时间15.8 d,适生长周期为4周,水溶性多糖和总生物碱含量分别是3.75%和0.0261%.结论:霍山石斛原球茎液体培养生长良好,具有目的化学成分的合成能力,为发酵培养开发霍山石斛资源提供可能.
-
杜鹃兰人工种子技术研究
目的:建立杜鹃兰人工种子制作方法.方法:以杜鹃兰为实验材料,通过液体悬浮培养建立原球茎悬浮系,并以原球茎为人工种子的繁殖体,研究了人工种皮基质、人工胚乳组分、贮藏条件、萌发基质等对人工种子萌发率和成苗率的影响.结果:以4%海藻酸钠+2% CaCl_2+2%壳聚糖为人工种皮基质,1/2 MS液体培养基+0.2 mg·L~(-1) NAA+0.1 mg·L~(-1)GA_3+0.5 mg·L~(-1) BA+0.4 mg·L~(-1)青霉素+10.0 mg·L~(-1)内生真菌提取物+0.3%多菌灵粉剂+0.2%苯甲酸钠+1.0%蔗糖作为人工胚乳成分制作的人工种子,其萌发率和成苗率高.这样的人工种子在4℃条件下贮藏20 d后的萌发率及成苗率分别为68%,65%左右,随着贮藏温度的升高和贮藏时间的延长,人工种子的萌发率和成苗率均大幅度下降.结论:通过研究确立了杜鹃兰人工种子制作基本技术.
-
白及种子萌发及原球茎发育过程的细胞组织学观察
为探讨白及种子发育成苗的机制,对组织培养条件下种子萌发过程和原球茎发育过程进行了形态学和石蜡切片细胞组织学观察.结果表明:白及种子吸水膨胀后,出现极性,远离胚柄端分化出绿色芽点,芽点发育成子叶,同时种胚突破种皮形成原球茎,另一端则出现成群的白色绒毛状假根.原球茎顶端分生组织的发育遵循原套-原体学说,内部分化出多束维管束后,白及由原球茎过渡到根状茎阶段.其中根原基的发育始于根状茎维管束,为内起源.当根状茎逐渐膨大,内部基本分生组织分化为成熟薄壁组织后,假鳞茎开始形成.白及种子的发育共经过种胚、原球茎、根状茎和假鳞茎4个阶段.
-
铁皮石斛原球茎与活体真菌液体悬浮共培养研究
目的:建立铁皮石斛原球茎与活体真菌MF24液体悬浮共培养体系,为原球茎产业化生产提供科学依据.方法:研究原球茎的培养体系是否适用于MF24真菌的生长,对光照和黑暗条件下单独培养的原球茎及与真菌共培养的原球茎的生长状况进行研究,测定生物量及增殖倍数,用HPLC分析比较原球茎中11个特征峰面积的变化.结果:MF24真菌在培养原球茎的6,7-V液体培养基中能正常生长,以1 500 lx光照8～10h·d-1会延缓真菌的生长速度.原球茎在光照或暗培养条件下都能正常生长,在原球茎培养初期加入MF24真菌,两者相互抑制生长.在原球茎的生长稳定期接入5块直径9 mm真菌菌块,对原球茎的生长和化学成分的种类无显著影响,但光照条件下共培养5d的原球茎中有10个化合物含量比对照降低13.64％～ 138.47％,暗培养条件下共培养5d的原球茎中有7个化合物含量比对照提高0.71％～12.82％,4个化合物含量比对照小幅降低3.03％ ～ 14.14％.结论:在适宜的条件下,活体真菌MF24可与铁皮石斛原球茎共培养,并影响其次生代谢水平.
-
天麻生长特性及其在栽培中的应用
天麻Gastrodia elata BL.是高度进化的兰科药用植物，在其整个生活史中需要与两种真菌共生，才能完成生长发育［1］。天麻种子非常细小，只有胚，无胚乳；因此天麻种子萌发需要小菇属Mycena 一类真菌为其提供营养［2］，种子萌发后形成的原球茎需要另一种真菌——蜜环菌Armillaria mellea Vahl.Fr.ouel的侵入为其提供营养，天麻才能完成由种子到米麻、白麻以及箭麻的整个生长发育过程。因此，天麻种子萌发菌、蜜环菌菌种的优劣直接影响天麻产品的质量和产量；除此之外，天麻的生长特性也是决定天麻优质高产不可忽视的一个重要因素。掌握了天麻的生长特性，就可在天麻栽培中更好地利用天麻的生长的特性，从而提高天麻产品的产量和质量。我们在十几年的科研和生产中发现，天麻在生长中主要有以下几个方面的特性：避光性、向气性、向湿性。根据这3种特性，在天麻人工栽培中具备优良天麻种子萌发菌和蜜环菌基础上，只有满足这3种特性，天麻才能获得优质高产。
-
铁皮石斛促分裂原活化蛋白激酶基因DoMPK4的分离和差异表达分析
促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是所有真核生物中普遍存在的一种重要的信号转导组分,在植物生理代谢、生长发育和激素反应等多项途径中起重要调控作用.本研究利用RT-PCR、RACE方法,从珍稀濒危兰科药用铁皮石斛中分离到一个新的促分裂原活化蛋白激酶基因,命名为DoMPK4 (GenBank注册号JX297597).DoMPK4基因cDNA全长1518 bp,编码一条由369个氨基酸组成的肽链,相对分子质量42.42 kD,等电点为5.55.推定的DoMPK4蛋白不含信号肽,具有一个跨膜域(214～232),包含MAPK蛋白家族保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性位点(158～170)和MAP激酶的保守位点(71～174).多序列比对表明,DoMPK4与多种植物MAPKs蛋白一致性较高(74.9％～80.6％).进化树结果显示,DoMPK4隶属于植物MAPKs蛋白的GroupA分支,与单子叶植物亲缘关系较近.实时定量PCR分析表明,DoMPK4在石斛根、茎、叶、种子和原球茎等5种器官中的相对表达量有显著差异.DoMPK4转录本在原球茎中的表达量为叶中的17.65倍,种子、根和茎等次之,分别为5.84、2.28和1.64倍.DoMPK4在原球茎较萌发种子中的高表达量特征,提示该基因在原球茎发育过程中起一定作用.
-
铁皮石斛原球茎的化学成分研究
目的 研究铁皮石斛原球茎的化学成分.方法 应用色谱技术分离铁皮石斛原球茎中的化学成分,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构.结果 从乙醇提取物的丙酮、三氯甲烷和95％乙醇三部分分离得到8个化合物,分别鉴定为;1-O-p-阿魏酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ),arillatose B(Ⅱ),4-(β-D-吡喃葡萄糖基)苄醇(Ⅲ),4-羟甲基-2,6-二甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ),三十六烷酸(Ⅴ),二十七烷醇(Ⅵ),β-谷甾醇(Ⅶ),3β,25-二羟基-23-烯-环菠萝蜜烷(Ⅷ).结论 以上化合物均为首次从铁皮石斛原球茎中分得.其中,化合物I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ为首次从石斛属中分得.
-
福建金线莲种子萌发及幼苗培养研究
目的 了解不同培养基对福建金线莲种子萌发以及幼苗生长的影响.方法 比较6种基本培养基对福建金线莲种子萌发的影响,观察并统计种子萌发率；利用正交设计研究萘乙酸(NAA)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)对福建金线莲种子萌发形成的幼苗叶片数、茎节数、根数、根长度、株高、鲜重等的影响.结果 不同基本培养基对福建金线莲种子萌发及原球茎分化效果不同,种子在MS培养基上萌发率高,达60.38％,原球茎在1/2MS培养基上分化成幼苗效果好；不同植物激素组合对福建金线莲幼苗生长影响无显著性差异,1/2MS+ NAA 1.0 mg·L-1 +6-BA 2.0 mg·L-1效果较好.结论 适宜的培养基能够促进福建金线莲种子的萌发与幼苗生长.
-
铁皮石斛原球茎/类原球茎的研究与应用
目的 总结近10多年来国内外铁皮石斛原球茎/类原球茎的研究进展,探讨其开发应用前景.方法 查阅国内外文献,从铁皮石斛原球茎/类原球茎的培养技术、化学成分和药理作用等方面对其研究进展进行归纳和分析.结果与结论 近年来与铁皮石斛原球茎/类原球茎培养技术相关的研究文献居多.铁皮石斛原球茎/类原球茎可用于资源再生和生产活性多糖,但其物质基础和药理活性仍需深入研究.
-
铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究
目的研究铁皮石斛Dendrobium candidum原球茎液体悬浮培养的可行性以及接种量和培养液体积对原球茎生长的影响.方法利用完全随机实验设计和正交试验设计研究不同基本培养基、接种量和培养液体积对原球茎生长的影响.结果无论鲜重还是干重,铁皮石斛原球茎在液体培养基上均极显著好于固体培养基(P＜0.001).不同基本培养基对铁皮石斛原球茎生长影响的研究表明,培养天数为30 d时,对于鲜重:67-V极显著好于B5(P＜0.01),B5极显著好于1/2 MS(P＜0.01),1/2 MS显著好于MS(P＜0.05);对于干重:67-V与B5没有显著性差异(P＞0.05),B5极显著好于1/2 MS(P＜0.01),1/2 MS极显著好于MS(P＜0.01).接种量和培养液体积对原球茎生长影响的研究表明,接种量影响大,体积其次,互作小,若不考虑互作,对于鲜重和干重,佳处理为:接种量6.194 g/瓶+培养液体积150 mL/瓶或100 mL/瓶;对于干重,若考虑互作,接种量为6.194 g/瓶时,应选培养液体积150 mL/瓶或100 mL/瓶,接种量为3.102 g/瓶时,应选培养液体积150 mL/瓶或100 mL/瓶,接种量为1.693 g/瓶时,应选150 mL/瓶或50 mL/瓶.结论液体悬浮培养对铁皮石斛原球茎的生长有利,获得了佳基本培养基、接种量和培养液体积的佳搭配方案,表明通过液体悬浮培养生产铁皮石斛原球茎具有较好的开发应用前景.
-
天麻节料高产栽培技术的研究
目的研究天麻节料高产的栽培技术.方法采用田间栽培法.结果在天麻有性繁殖中,(1)用短菌枝代替菌材播种,两层菌枝,播种4层种子,可使天麻种子萌发后形成的原球茎接蜜环菌率达50%以上,播种半年后,白麻米麻的产量高;(2)长菌捧播种,两层菌捧,播种4层种子,可使产量翻倍.在天麻无性繁殖中,改用短菌棒伴栽天麻,不仅可以节约木材和种麻,还可保证天麻的产量.结论新的栽培方法在节料的同时,不但可保证天麻的产量,而且使天麻高产.
-
天麻的组织培养及快速繁殖
目的利用组织培养方法快速繁殖成米麻作为种麻,为寻找出一条简便可行的快繁天麻种麻的新途径提供理论依据.方法天麻块茎或茎尖无菌离体培养,米麻块茎诱导培养基为1/2 MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.5 mg/ L+香蕉50 mg/L;箭麻茎尖诱导培养基为1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L.结果小米麻经50 d无菌培养后开始生长出新米麻,70 d后原小米麻块茎上生长出多个分枝的新米麻;箭麻茎尖超过140 d组织培养,茎尖分化、诱导形成原球茎,超过160 d 培养原球茎长大并开花.结论天麻可以用组织培养方法快速繁殖成米麻作为种麻.
-
铁皮石斛原球茎多糖粗品与纯品的体外抗氧活性研究
目的:研究铁皮石斛原球茎多糖粗品(DCPP)和纯品(DCPP3c-1)的体外抗氧活性.方法:利用邻二氮菲-Fe2+氧化法、AP-TEMED法、硫代巴比妥酸法(TBA)及分光光度法分析原球茎多糖清除自由基及抗脂质过氧化作用.结果:铁皮石斛原球茎多糖DCPP和DCPP3c-1能显著地清除·OH和O2-,对·OH清除作用具有较好的量效关系,抑制率达50%的浓度(IC50)分别为0.982 mg/mL和0.930mg/mL;DCPP清除O2-的IC50为0.619 mg/mL;而DCPP3c-1在浓度为0.615mg/mL时,有较强的清除效果,而后随着浓度的增大,清除率呈下降趋势.DCPP和DCPP3c-1能抑制小鼠肝组织自发性氧化和Fe2+、H2O2诱导的脂质过氧化,其中DCPP的抑制作用强;2种多糖可抑制小鼠肝线粒体脂质过氧化物MDA的产生以及减轻肝线粒体肿胀度.结论:铁皮石斛原球茎多糖粗品和纯品具有抗氧化活性.
-
铁皮石斛种胚原球茎液体悬浮培养研究
目的建立铁皮石斛原球茎液体悬浮培养体系,为大规模生产石斛奠定基础.方法对铁皮石斛原球茎悬浮培养条件进行比较选择,并测定生长增殖量.结果液体悬浮培养的原球茎分散性好、整齐均一.悬浮培养的适培养基为1/4MS+40mg/L VC,pH5.6,摇床转速为50r/min,15d继代一次,黑暗培养.培养基中添加0.5mg/L ABA预培养30d,原球茎的质量更高、同步性更好.结论获得了快速增殖原球茎的液体悬浮培养的佳条件,为铁皮石斛开发利用创造条件.
-
铁皮石斛原球茎悬浮培养研究
目的建立铁皮石斛原球茎悬浮系,作为人工种子繁殖体.方法对铁皮石斛原球茎悬浮培养条件进行比较选择,并测定生长增殖状况.结果悬浮培养的原球茎分散性好、整齐均一.悬浮培养的适培养基为1/4MS+40 mg/L Vc,pH5.6,摇床转速为50 r/min,15 d继代一次,黑暗培养.培养基中添加0.5 mg/L ABA预培养30 d,原球茎的质量提高、同步性更好.结论首次报道了铁皮石斛原球茎悬浮系的建立,为铁皮石斛大规模培养开创了新途径.
-
铁皮石斛原球茎多糖D-02C的结构特征及其抗补体活性
目的 对一个从铁皮石斛原球茎中分得的均一多糖D-02C进行结构解析,并考察抗补体活性.方法 使用高效凝胶排阻色谱法测定分子量与纯度,通过GC-MS测定糖组成,甲基化与核磁等分析手段确定糖残基连接方式,利用细胞溶血法测定其CH50值.结果 D-02C为一含有56.36％半乳糖醛酸的分子量为1.55×104 Da的半乳聚糖,其中半乳糖以D-半乳糖存在,主链由1,4-Galp与1,4-GalAp组成,其抑制补体活性的经典途径的CH50为1.573 mg/mL.结论 从铁皮石斛原球茎中分离得到一个酸性半乳聚糖,且具有一定的抗补体活性.
-
紫花羊耳蒜原球茎诱导与分化研究
目的 研究基本培养基与添加物及植物激素对紫花羊耳蒜种子原球茎诱导与分化.方法 比较不同培养基与添加物对原球茎生长分化的作用,用正交实验探索不同激素对原球茎生长分化佳浓度配比.结果 在1/2MS、MS、KC培养基中,1/2MS适于紫花羊耳蒜种子萌发;添加椰乳100 ml/L、AC 0.05％对萌发及分化均有促进作用;植物激素6-BA、NAA对原球茎生长分化有显著影响,KT无明显效果.结论 紫花羊耳蒜种子原球茎诱导分化适宜基本培养基为1/2MS,佳激素组合为6-BA3.0 mg/L+ NAA0.5mg/L.
-
基于响应面法优化白及原球茎液体培养基
目的 采用响应面优化(Box-Behnken design,BBD)法优选白及原球茎液体培养基,提高白及种子萌发形成原球茎的诱导率.方法 采用3水平4因素设计BBD实验,在30 g/L的蔗糖溶液中添加大量元素(MS)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)和玉米素(ZT)作为白及原球茎液体培养基,并通过响应面法优选4种添加物浓度配比.结果 BBD实验模型设计成功可用于响应面结果优化,经响应面优化后,在1 mg/L MS、2 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA、0.07 mg/L ZT条件下,白及原球茎诱导率可达(93.13±0.34)％,与预测值95.38％差异无统计学意义(P>0.05).白及原球茎直播种苗存活率良好,长出的叶片数、植株高度、茎长及茎宽均超过种子直播种苗的数值.结论 在基本液体培养基中合理配比4种天然添加物可提高白及原球茎诱导率,进而提高种子萌发率.
-
不同来源铁皮石斛中多糖、氨基酸和生物碱含量比较
目的:比较3种不同来源的铁皮石斛中多糖、氨基酸、生物碱的含量差异.方法:用苯酚-浓硫酸法进行多糖含量测定;将铁皮石斛中氨基酸经盐酸水解为游离氨基酸,并经氨基酸自动分析仪离子交换柱分离,与茚三酮显色,再利用外标法测定各氨基酸含量;用碱性氯仿提取生物碱,用溴甲酚绿酸性染料比色法测定其含量.结果:不同来源的铁皮石斛中多糖的含量顺序为:野生品＞人工栽培品＞组培品;总氨基酸含量顺序为:野生品＞组培品＞人工栽培品;总生物碱含量顺序为:组培品＞野生品＞人工栽培品.结论:人工栽培品和组培品的主要化学成分含量与野生铁皮石斛较接近,多糖含量均已达到2010年版中国药典标准.该研究结果为铁皮石斛次生代谢产物的工业化生产开辟了新途径并提供了基础数据.
-
独蒜兰组培快繁技术体系的优化
目的:优化独蒜兰组培快繁技术体系,缩短组培周期.方法:以独蒜兰种子为外植体,进行不同采收期种子萌发、壮苗生根的培养基筛选.在初步筛选出的佳配方基础上,进行培养基配方改良优化.结果:授粉后200 d的种子萌发率高,萌发快;B5+0.5 mg/L NAA适合种子萌发和生长;改良配方MSN+ 1.2 mg/L NAA+100 g/L土豆汁能较好地促进独蒜兰幼苗生长.结论:该优化的独蒜兰组培快繁技术体系,能缩短组培周期,降低种苗生产成本.
