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基于“组分结构”理论的8种墨旱莲乙酸乙酯提取物对NHBE细胞保护作用的比较
基于“组分结构”理论对来源不同的墨旱莲乙酸乙酯提取物(EAEEP)中活性成分进行分析比较,研究其保护正常人支气管上皮(normal human bronchial epithelial,NHBE)细胞的物质基础构成.以MTT法比较不同EAEEP对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的NHBE细胞保护作用,并采用UPLC分析不同EAEEP中酚酸、香豆草醚及黄酮类组分的含量.结果发现,8种EAEEP(0～ 200 mg·L-1)对NHBE细胞均有一定保护作用,并存在统计差异.其中,保护作用较强的是EAEEPⅦ和EAEEPⅧ,其EC5o分别为46.97,56.29 mg·L-1.UPLC分析显示,8种EAEEP中酚酸、香豆草醚及黄酮类组分的含量存在显著差异.而作用强的EAEEPⅦ(89.15 mg·L-1)和EAEEPⅧ(57.44mg·L-1)质量总量却并非高,高的为EAEEPⅢ(132.25 mg·L-1).结合“组分结构”理论,分析发现EAEEPⅦ和EAEEPⅧ中酚酸、香豆草醚及黄酮类组分的质量结构与其他样品显著不同,分别为1.0∶1.0∶0.5和1.0∶1.9∶0.8.提示EAEEP中可能存在特定的优“组分结构”关系,可为其物质基础研究及质量控制提供参考.
关键词： 墨旱莲 组分结构 超高效液相色谱(UPLC) 烟雾提取物 -
血红素加氧酶-1对烟草烟雾提取物诱导健康人支气管上皮细胞凋亡的作用
COPD是严重危害人类健康的常见疾病,其主要的病理特征为气流受限不完全可逆并呈进行性发展.烟草中含有4000多种化学物质,是导致COPD的主要元凶之一.我们在前期的研究中发现,过度的内质网应激可启动细胞凋亡[1].分子伴侣葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein,GRP78)与生长停滞DNA损伤可诱导基因153( C/EBP homologous protein/growth arrest-and DNA damage-inducible gene 153,CHOP/GADD153)表达显著增多是发生内质网应激的2个经典标志物[2-3].内质网应激时,CHOP是由抵抗细胞凋亡向促进细胞凋亡转换的重要信号分子[3-4].血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)是广泛存在的抗氧化酶,具有抗炎、抗氧化、抗凋亡和抗增生的细胞保护效应.
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香烟烟雾提取物对培养的人皮肤成纤维细胞生长和增殖的影响
目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)对原代培养的皮肤成纤维细胞生长和增殖的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测体外皮肤成纤维细胞存活力的影响,观察染毒后细胞形态和结构变化.β-半乳糖苷酶染色方法检测染毒后多次传代后成纤维细胞β-半乳糖苷酶的变化情况.用分光光度法检测胞质内活性氧自由基(ROS)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 染毒后细胞呈典型的损伤形态,随着CSE浓度的增大和作用时间的延长,细胞存活力下降.长期染毒的细胞经5次传代后,β-半乳糖苷酶呈显著阳性;生长曲线示CSE作用后的细胞生长速度明显减慢.CSE作用于细胞后,细胞质内ROS含量升高(P＜0.05),SOD活性降低(P＜0.05).结论 CSE对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖和生长有一定的抑制作用.低浓度CSE长期作用,可以促使原代培养的成纤维细胞迅速衰老.
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烟草烟雾提取物通过TGF-β1/Smad2通路诱导RLE-6TN细胞凋亡
目的 研究烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对体外培养的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响,探究其潜在机制.方法 体外培养大鼠肺泡上皮RLE-6TN细胞株24 h,分别加入0.5％、1.0％、2.0％ CSE共培养48 h;转化生长因子-β1 (TGF-β1)受体抑制剂(SB431542) 500 nmol/L作用RLE-6TN细胞株24 h后,加入2.0％ CSE共培养48 h.Hoechst染色后观察细胞核的形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测TGF-β1、p-Smad2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3裂解片段(Cleaved Caspase-3)的表达.结果 经不同浓度(0.5％、1.0％、2.0％)的CSE作用48 h后,Hoechst染色可见部分凋亡细胞,核发白、固缩、染色质边集等现象;细胞早期凋亡率由(5.270 ±0.526)％增加至(32.580±0.413)％ (P＜0.01);TGF-β1、p-Smad2和Cleaved Caspase-3蛋白表达量增加;TGF-β1受体抑制剂(SB431542)干预后,Smad2和Cleaved Caspase-3表达量明显降低(P＜0.05).结论 CSE通过激活TGF-β1/Smad2信号通路,参与调节Cleaved Caspase-3的表达,从而诱导大鼠肺泡上皮细胞的凋亡.
