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吴茱萸次碱通过抑制Notch1/eIF3a信号通路保护博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化
研究吴茱萸次碱(Rut)是否通过抑制Notch1/真核翻译起始因子3a(eIF3a)信号通路保护博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,以及作用是否与促进降钙素基因相关肽(CGRP)合成与释放,进而抑制肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)有关.雄性SD大鼠随机分为5组:对照组,博莱霉素组,Rut不同(100,300 mg· kg-1)剂量组及辣椒素(Cap)+ Rut(300 mg· kg-1)剂量组,每组12只.采用博莱霉素(5 mg·kg-1)气管滴注诱导肺纤维化大鼠模型.Cap+ Rut组于造模前1天和造模后第7,14,21天分别皮下注射Cap(50 mg·kg-1)耗竭内源性CGRP.造模后第29天处死动物,颈动脉采血ELISA法测定血浆CGRP含量.HE染色和Masson染色观察肺组织病理学及胶原沉积的变化.免疫组化、qPCR和(或)Western blot法检测肺组织CGRP,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E钙粘蛋白(E-cadherin),紧密连接蛋白-1(ZO-1),波形蛋白(vimentin),I型胶原(collagen I),Notch1,eIF3a mRNA及蛋白表达.结果显示,与对照组相比,博莱霉素组大鼠肺组织结构破坏,肺泡间隔增宽,大量炎性细胞浸润以及成纤维细胞明显增殖,胶原沉积明显增多,同时collagen I,α-SMA,vimentin,Notch1,eIF3a的表达明显升高,而E-cadherin,ZO-1,CGRP的表达及血浆CGRP的水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01).与博莱霉素组相比,不同剂量Rut连续给药4周后能明显改善肺组织损伤,显著降低肺组织胶原的沉积,明显提高E-cadherin,ZO-1,CGRP的表达及血浆CGRP的水平,同时降低col-lagen I,α-SMA,vimentin,Notch1,eIF3a的表达(P＜0.05或P＜0.01).而用辣椒素耗竭内源性CGRR后能够取消吴茱萸次碱的这些作用.由此推测,吴茱萸次碱可能通过抑制Notch1/eIF3a信号通路,减缓肺泡上皮细胞EMT的进程,从而缓解博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,此作用与促进CGRP的合成与释放有关.
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IL-33诱导气道上皮细胞发生间质转分化样改变
目的：探讨白细胞介素-33（IL-33）对小鼠气道上皮细胞细胞间质样转分化（EMT）的影响。方法体外培养小鼠上皮细胞，将小鼠气道上皮细胞分为三组，分别为 IL-33组、抗 IL-33组及对照组。IL-33组、抗 IL-33组分别给予0.04 mg/ml 的 IL-33抗体和抗 IL-33抗体刺激小鼠气道上皮细胞48 h，对照组不做处理；采用 Western blot 方法分别检测三组 EMT 标志物 E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原（collagen-Ⅰ）表达水平；应用实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）测定 EMT 标志物 E-钙黏蛋白、α-SMA 及Ⅰ型胶原 mRNA 水平的表达，应用 SPSS 17.0软件进行统计处理，两组间比较采用 t 检验。结果与对照组相比，IL-33组α-SMA及Ⅰ型胶原在蛋白水平的表达明显增高（1.45±0.12，P＜0.05；1.52±0.10，P＜0.01）；IL-33组α-SMA及Ⅰ型胶原的基因表达比对照组增高（79.1±4.62 vs.50.2±3.59，P＜0.05；69.8±5.89 vs.48.2±3.56， P＜0.05）；IL-33组 E-钙黏蛋白在蛋白水平的表达比对照组低（0.82±0.08，P＜0.05），IL-33组 E-钙黏蛋白的基因表达比对照组降低（80.4±4.39 vs.145.9±7.82）。抗 IL-33组与对照组 E-钙黏蛋白、α-SMA 及Ⅰ型胶原在蛋白和基因水平表达无统计学差异（P＞0.05）。结论 IL-33能刺激小鼠气道上皮细胞发生间质转分化样改变。
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IL-33诱导气道上皮细胞发生间质转分化样改变
目的：探讨白细胞介素-33（IL-33）对小鼠气道上皮细胞细胞间质样转分化（EMT）的影响。方法体外培养小鼠上皮细胞，将小鼠气道上皮细胞分为三组，分别为 IL-33组、抗 IL-33组及对照组。IL-33组、抗 IL-33组分别给予0.04 mg/ml 的 IL-33抗体和抗 IL-33抗体刺激小鼠气道上皮细胞48 h，对照组不做处理；采用 Western blot 方法分别检测三组 EMT 标志物 E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原（collagen-Ⅰ）表达水平；应用实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）测定 EMT 标志物 E-钙黏蛋白、α-SMA 及Ⅰ型胶原 mRNA 水平的表达，应用 SPSS17.0软件进行统计处理，两组间比较采用 t 检验。结果与对照组相比，IL-33组α-SMA及Ⅰ型胶原在蛋白水平的表达明显增高（1.45±0.12，P＜0.05；1.52±0.10，P＜0.01）；IL-33组α-SMA及Ⅰ型胶原的基因表达比对照组增高（79.1±4.62vs.50.2±3.59，P＜0.05；69.8±5.89vs.48.2±3.56， P＜0.05）；IL-33组 E-钙黏蛋白在蛋白水平的表达比对照组低（0.82±0.08，P＜0.05），IL-33组 E-钙黏蛋白的基因表达比对照组降低（80.4±4.39vs.145.9±7.82）。抗 IL-33组与对照组 E-钙黏蛋白、α-SMA 及Ⅰ型胶原在蛋白和基因水平表达无统计学差异（P＞0.05）。结论 IL-33能刺激小鼠气道上皮细胞发生间质转分化样改变。
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Numb与上皮细胞间质转分化相关蛋白在胰腺癌中表达的相关性及其临床病理学意义
目的：探讨胰腺癌组织及细胞中Numb与上皮细胞间质转分化相关蛋白表达的相关性及其临床病理学意义。方法收集2005年1月至2012年12月中国医科大学附属第一医院胃肠外科保存的具有完整临床资料的胰腺癌手术切除标本63例，所有患者术后病理证实均为导管腺癌。应用免疫组化方法检测63例胰腺癌标本中Numb、E钙黏蛋白（ E?cad）和波形蛋白（ Vimentin）表达情况，应用免疫印迹法和real?time PCR检测Numb、E?cad和Vimentin在胰腺癌细胞株BxPC?3和PANC?1中的表达情况。采用χ2检验及Pearson相关分析比较蛋白表达相关性及与患者临床病理学参数的关系，采用Kaplan?Meier单因素分析计算累积生存率，并行Log?Rank检验。结果免疫组化结果显示， Numb、E?cad和Vimentin在胰腺癌组织中阳性表达率分别为46?0％、41?3％和28?6％。 Numb表达与胰腺癌大小、分化程度及UICC分期呈负相关（ r＝－0?310，P＝0?010；r＝－0?359，P＝0?004；r＝－0?228， P＝0?020），E?cad表达与肿瘤分化程度呈负相关（ r＝－0?316，P＝0?012），Vimentin表达与肿瘤分化程度和淋巴结转移呈正相关（ r＝0?264，P＝0?036；r＝0?274，P＝0?030）。相关性分析结果显示，Numb表达与E?cad呈正相关（r＝0?325，P＝0?010），与Vimentin表达无相关性。单因素分析结果显示，Numb和E?cad共表达胰腺癌患者预后更好（ P＝0?046）。细胞水平免疫印迹法和real?time PCR结果显示， Numb蛋白和mRNA高表达的胰腺癌BxPC?3细胞株中E?cad高表达、Vimentin低表达；Numb蛋白和mRNA低表达的胰腺癌PANC?1细胞株中E?cad低表达、Vimentin高表达。结论 Numb和E?cad在胰腺癌组织及细胞中表达呈正相关，可能共同参与胰腺癌上皮细胞间质转分化的发生进展。
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降钙素基因相关肽对大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞间质转分化的作用及机制
目的:观察降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)的作用并探讨其机制.方法:实验设Control组、TGF-β1(5 ng/ml)、CGRP(1、10、100 nmol/L)组、CGRP8-37(1μmol/L)+CGRP(100 nmol/L)组.每组设9个复孔.细胞分别用CGRP或加CGRP8-37预处理1h,再用转化生长因子β1(TGF-β31)处理48h.MTT法检测大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞(RLE-6TN细胞)活性.分别采用Real-time PCR和Western blot检测细胞E-cadherin、α-SMA、eIF3a、Notch1和collagen Ⅲ mRNA及蛋白表达.结果:与TGF-β1(5 ng/ml)相比,不同剂量CGRP(1、10、100 nmol/L)均可明显提高RLE-6TN细胞活性,显著抑制eIF3a、Notch1、α-SMA及collagen Ⅲ胶原的表达,上调E-cadherin的表达,而CGRP的这些作用可以被CGRP阻断剂CGRP8-37所取消.结论:CGRP对EMT具有一定的抑制作用,其机制可能与其抑制Notch1、eIF3a表达有关.
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Rho激酶信号转导通路对醛固酮诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响?
目的：探讨Rho激酶对醛固酮( ALD)诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法人肾小管上皮细胞( HK-2)培养于含15%FBS的 RPMI-1640培养液中,依普利酮(10μmol/L )和 Rho激酶抑制剂Y27632(1μmol/L)预处理细胞30 min后,100 nmol/L ALD作用HK-2细胞24或48 h, ELISA法测定培养上清液中Rho激酶蛋白的含量,实时定量PCR检测细胞α-SMA、E-cadherin mRNA的表达,Western blot测定细胞α-SMA、E-cadherin蛋白的表达。结果 ALD显著上调HK-2细胞Rho激酶蛋白的表达及α-SMA mRNA和蛋白的表达,减低E-cadherin mRNA和蛋白的表达。 Rho激酶抑制剂Y27632及依普利酮可拮抗上述效应。结论ALD可激活HK-2细胞Rho激酶的活化,并通过Rho激酶诱导HK-2细胞间质转分化而加速肾小管间质纤维化的进展。
关键词： 醛固酮 上皮细胞间质转分化 Rho激酶 人近端肾小管上皮细胞 小管间质纤维化 -
姜黄素对缺氧诱导肝癌细胞HepG2上皮细胞间质转分化(EMT)的逆转作用
目的:探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间质转分化的影响和可能机制.方法:将HepG2细胞分为3组:正常对照组、CoCl2组、CoGl2+姜黄素组.分组干预48小时后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力,相差显微镜观察细胞形态变化,划痕试验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测HIF1-αmRNA的表达变化,Western blot检测HIF1-α蛋白,上皮细胞表面标志E-Cadherin和间质细胞表面标志vimentin的变化.结果:分组干预48h,CoCl2组细胞增殖较对照组增高,而CoCl2+姜黄素组增殖较正常组降低;CoCl2组较正常对照组迁移能力显著增强,CoCl2+姜黄素组细胞迁移能力与CoCl2组相比明显下降;Real-time RT-PCR显示3组细胞HIF1-α mRNA的表达无明显差异;但是Western blot结果发现,相对于正常对照组,CoGl2组HIF1-α蛋白明显上调,CoCl2+姜黄素组HIF1-α蛋白变化不大;同时,CoCl2组E-cadherin表达水平下降而vimentin表达水平上升,CoCl2+姜黄素组无明显变化.结论:姜黄素可逆转缺氧诱导的肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力增加,可能与其抑制缺氧诱导的HIF1-α蛋白上调和上皮细胞间质转分化有关.
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Hedgehog信号通路通过上皮细胞间质转分化调控乳腺癌细胞侵袭
目的：研究 Hedgehog信号通路对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及其可能机制。方法通过 Western blot 和Real-time RT-PCR,检测人乳腺癌细胞 MDA-231和人正常乳腺上皮细胞 MCF-10A 中 SHH、SMO 和 Gli-1蛋白和mRNA表达。通过小干扰 RNA转染 MDA-231,以未转染细胞为正常对照组,转染 siRNA Control 为阴性对照组, Western blot和RT-PCR法检测靶向沉默SMO基因的效果,Transwell小室侵袭试验检测各组MDA-231细胞的侵袭能力,Western blot检测 Gli-1、Snail、MMP-9、E-cadherin和 Vimentin的表达变化。结果人乳腺癌细胞 MDA-231高表达 SHH、SMO和 Gli-1。通过 RNA干扰技术靶向沉默 MDA-231细胞 SMO 基因,其细胞侵袭能力显著下调,其Gli-1、Snail、MMP-9、Vimentin表达下调,E-cadherin表达增强。结论 Hedgehog 通路的异常激活与乳腺癌细胞侵袭相关,其机制可能与诱导乳腺癌上皮细胞间质转分化有关。
关键词： 乳腺癌 侵袭 肿瘤 Hedgehog通路 上皮细胞间质转分化
