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肾康注射液调控ERK1/2/MMPs信号通路促进肾衰竭模型鼠细胞外基质降解的作用和机制
探讨肾康注射液(Shenkang injection,SKI)在体内调控细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated protein kinase,ERK) 1/2/基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)信号通路而改善肾衰竭模型鼠细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解的作用和机制.将20只大鼠随机分为假手术组、模型组、SKI组、马来酸依那普利(enalapril maleate,EM)组.采用腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管结扎术(unilateral ureteral obstruction,UUO)建立肾衰竭模型.造模后,SKI组和EM组大鼠分别经腹腔注射或灌胃给予SKI或EM悬浊液,其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水,共3周;其间,检测各组大鼠24 h尿蛋白排泄量(urinary protein excretion,U pro)和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(urinary N-acety1-β-D-glueosaminidase,UNAG);给药3周后,处死全部大鼠,抽取血液,摘除双肾,观察肾组织形态特征,检测血清生化指标和肾组织Ⅳ型胶原(collagen type Ⅳ,CIV),MMP-2,MMP-9,金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinase,TIMP)-1,ERK1/2以及磷酸化ERK1/2(phosphorylated-ERKl/2,p-ERK1/2)蛋白表达量.结果表明,经SKI干预后,模型鼠血清肌酐(serum creatinine,Scr),血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),尿酸(uric acid,UA),白蛋白(albumin,Alb),Upro,UNAG以及肾脏组织形态均得到不同程度的改善,这些作用与EM相仿;SKI还可以调节模型鼠肾组织MMP-2,MMP-9,TIMP-1蛋白表达,下调p-ERK1/2蛋白表达,这些作用不同于EM.总之,SKI在体内可能是通过调控肾组织ERK1/2信号通路活性,干预MMPs/TIMP-1表达,促进ECM降解,延缓肾衰竭进展.
关键词： 肾康注射液 肾衰竭 细胞外基质 基质金属蛋白酶 细胞外信号调节激酶1/2信号通路 -
二肽基肽酶4通过ERK1/2信号通路促进人血管平滑肌细胞钙化
目的 探讨二肽基肽酶4(DPP4)在人血管平滑肌细胞(HVSMC)中的钙化作用及其机制.方法 通过茜素红观察DPP-4对人血管平滑肌细胞(HVSMC)钙化的影响,并以Western印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK)1/2通路是否涉及DPP4诱导HVSMC相关钙化蛋白的表达.结果 茜素红染色结果显示,DPP4组钙化结节较阴性对照组明显增多,与阳性对照组相当;且DPP4剂量和时间依赖性地促进钙化相关蛋白骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和骨形态发生蛋白2(BMP2)的表达.DPP4干预15 min明显刺激ERK1/2的磷酸化(P<0.05),ERK1/2抑制剂可明显降低DPP4刺激的相关钙化蛋白表达 (P<0.05).结论 DPP4可能是通过ERK1/2信号通路促进HVSMC的钙化.
关键词： 二肽基肽酶4 血管平滑肌细胞 钙化 细胞外信号调节激酶1/2信号通路 -
针刺对脑缺血大鼠血管生成和细胞外信号调节激酶1/2信号通路的影响
目的:观察针刺对脑缺血大鼠血管生成和细胞外信号调节激酶1/2信号通路的影响.方法:将30只健康SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、针刺组各10只.模型对照组以及针刺组给予Bannister's颈动脉引流法以建立大鼠脑缺血的动物模型.针刺组造模7d后,在大鼠保持清醒的状况下,固定于自制鼠架上,予以百会穴平刺2 mm,捻转1 min增强针感,留针20 min;水沟穴点刺1 mm,捻转1 min增强针感,不留针;每日1次,每周6次,2周为1个疗程,共治疗1个疗程.其余两组不予以任何干预措施,至实验结束.比较各组大鼠情况、神经功能缺损量表评分、海马脑细胞凋亡百分率、椎体细胞数、血管内生长因子表达水平、血管密度、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-Jun N-ternuial kinase,p-JNK)以及磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extacellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)蛋白表达比较.结果:治疗后,与模型对照组比较,针刺组治疗后7d、治疗后14 d的神经功能缺损量表分数较低;与治疗后7d比较,治疗后14 d针刺组神经功能缺损量表评分较低(P＜0.05).治疗后,与正常对照组比较,模型对照组和针刺组海马神经细胞凋亡率较高,锥体细胞存活数较低(P＜0.05);与模型对照组比较,针刺组海马神经细胞凋亡率较低,锥体细胞存活数较高(P＜0.05).治疗后,与正常对照组比较,模型对照组以及针刺组血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达以及血管密度较低(P＜0.05);与模型对照组比较,针刺组VEGF蛋白表达以及血管密度较高(P＜0.05).治疗后,与正常对照组比较,模型对照组以及针刺组p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达较高(P＜0.05);与模型对照组比较,针刺组p-JNK蛋白表达较低,p-ERK1/2蛋白表达较高(P＜0.05).结论:针刺能够上调脑缺血大鼠VEGF表达水平,下调海马神经细胞凋亡率,提高促进组织脑血管形成,调节p-JNK以及p-ERK1/2表达水平,从而减轻脑损害程度,显著促进脑缺血后神经功能修复,这可能是针刺治疗脑缺血损伤的机制之一.
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细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路介导丙酮酸乙酯抗大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的研究
目的:研究细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (extracellular regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)信号通路在丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)抗大鼠离体心脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中的作用.方法:采用离体大鼠心脏Langendoff逆行灌注模型,缺血45 min,再灌注60 min.实验分为3组(每组8只),分别为IRI组、EP(2 mmol/L) +IRI组、EP(2 mmol/L) +PD98059(ERK1/2阻断剂,20 μmol/L) +IRI组.记录各组处理后血流动力学指标,包括:左心室发展压(LVDP)、左心室内压大变化速率(+dp/dtmax)、心率(HR)、冠脉流量(CF);ELISA法检测冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量;TTC法测定各组心肌梗死面积(infarct size,MI);Western法检测ERK1/2通路相关分子表达(p-ERK1/2、total-ERK1/2、p-p70S6K、total-p70S6K).结果:与IRI组相比,EP+IRI组心脏IRI后各项血流动力学指标(LVDP、+dp/dtmax、HR、CF)显著改善,其数值分别为(68.1.4±4.5) mmHg,(1 130±93)mmHg/s,(253.6±6.5)次/min和(9.37±0.65)ml/min(P＜0.05),冠脉流出液中LDH显著减少到(55.8±4.3)％(P＜0.05),心肌MI显著减少到(57.1±4.8)％(P＜0.05),p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达分别显著增加到(308.90±17.81)％和(375.04±20.60)％(P＜0.05).与EP+ IRI组比较,PD98059处理可以显著逆转EP对离体心脏血流动力学(P＜0.05)、LDH释放量(P＜0.05)和心肌MI(P＜0.05)的保护作用,同时可以有效下调p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达(P＜0.05).结论:EP对大鼠离体心脏IRI损伤有明确的保护作用,该作用与激活ERK1/2通路有关.
