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蝎毒多肽提取物抑制肝癌H22细胞化疗期间再增殖实验研究
目的:观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)对H22肝癌荷瘤小鼠化疗期间再增殖的抑制作用并探讨可能的机制.方法:96只Balh/c小鼠皮下接种小鼠肝癌H22细胞,随机分为模型组、PESV高、低剂量组和荷瘤对照组.以5-Fu对荷瘤小鼠进行化疗建立再增殖模型.按不同的用药方法对4组小鼠进行干预,每周测量肿瘤体积2次.各组每7 d处死6只小鼠,实验共进行35 d.以免疫组织化学方法检测各组肿瘤组织CD105,PCNA,VEGF,PDGF蛋白水平表达.以CD105标记微血管,计算微血管密度(MVD).结果:荷瘤对照组肿瘤体积在13～24 d增加迅速,荷瘤对照组小鼠在第27天全部死亡,模型组肿瘤体积在17 d前增长较快,在第17～22天增加较慢,之后体积增加又较快,在第31天全部死亡.PESV高、低剂量组肿瘤体积全程缓慢增加,体积在17 d以后显著低于模型组,PESV高低剂量组之间仅在第17天存在差异(P<0.05).免疫组织化学检测显示,模型组肿瘤组织第31天PCNA表达水平高于第21,28天(JP<0.01),PESV高、低剂量组表达水平显著低于模型组(P<0.01),PESV高、低剂量组仪在第17天存在显著差异(P<0.05).免疫组织化学检测显示,与PESV高、低剂量组相比,模型组CD105-MVD在第21,28天(P<0.05),第35天(P<0.01)存在显著差异,PESV高低剂量组之间无差别.模型组VEGF表达第35天高于第21,28天(P<0.05),PESV高、低剂量VEGF表达在第21,28,35天表达水平均显著低于模型组(P<0.01),PESV高低剂量组无差别.模型组肿瘤PDGF表达水平逐渐下降,PESV高,低组在第21天表达水平低,之后逐渐增高,PESV高低剂量组之间在第35天存在显著差异(P<0.01).相关性分析显示,肿瘤组织VEGF表达水平与肿瘤组织CD105-MVD呈正相关(r=0.669).结论:PESV可抑制H22肿瘤在化疗期间再增殖作用,其机制可能是抑制血管生成和使肿瘤血管正常化.
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蝎毒多肽提取物对化疗期间再增殖H22肿瘤组织HIF-1α和SDF-1/CXCR4表达的影响
目的:研究化疗期间再增殖中H22肿瘤组织HIF-1α和SDF-1/CXCR4表达的变化及蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)对其表达的影响,以探讨肿瘤组织再增殖期间新生血管生成发生的机制.方法:以免疫组织化学方法检测化疗期间不同时间点肿瘤组织HIF-1α,SDF-1及CXCR4的表达,以ELISA方法检测肿瘤组织SDF-1的含量,以Qwin V3图像分析软件对肿瘤组织HIF-1α,SDF-1及CXCR4表达进行分析,并进行相关性分析.结果:模型组肿瘤组织HIF-1α表达在第14天和第21天无差异性,在第28天表达水平显著升高；PESV低剂量组在3个时间点表达无差异性,而PESV高剂量组表达在第21天低,在第14天高,ELSA检测结果显示,荷瘤对照组表达逐渐增多,尤其是在第14～21天,增加迅速.模型组,SDF-1表达在14～21 d表达增加缓慢,但在21～28d增加迅速；PESV高、低剂量组SDF-1表达水平增加缓慢,尤其是高剂量组,3个时间点肿瘤组织表达水平差异无显著性.免疫组织化学检测SDF-1结果和ELISA一致.对HIF-1α和SDF-1灰度值分析结果显示,r=0.805,两者存在相关性.PESV低、高剂量组肿瘤组织CXCR4下调,但PESV低、高剂量组之间无差异性.结论:在化疗期间肿瘤组织产生HIF-1α,HIF-1α诱导间质组织分泌SDF-1,HIF-1α和SDF-1促进VEGF的表达上调,从而诱发肿瘤内新生血管的生成.PESV有效抑制HIF-1α和SDF-1的表达.
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塞来昔布对FaDu人咽鳞癌裸鼠移植瘤放疗过程中肿瘤再增殖抑制效应
目的 前期基础实验研究通过病理证实,FaDu人咽鳞癌裸鼠移植瘤在放疗过程中会出现肿瘤的加速再增殖.国内外许多基础及临床研究发现选择性环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂有提高放疗疗效的作用.本研究以前期证实的肿瘤再增殖模型为基础,探索选择性COX-2抑制剂塞来昔布(celecoxib,CCX)对放疗过程中肿瘤细胞再增殖的抑制作用及其潜在机制.方法 建立FaDu人咽鳞癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、单用CCX组、单纯放疗组及CCX联合放疗组.CCX 0.2 mL/只,100 mg/kg,灌胃给药.放疗方式采用常规分割放射治疗,6 MeV电子线,2.0 Gy/次,每日或隔日照射,共给予12～18次照射.治疗期间每3d测量1次肿瘤体积.在各组实验结束后处死裸鼠,获取肿瘤行免疫组化检测增殖指标Ki-67和和溴化脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdUrd)、表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)及凋亡相关蛋白(Caspase-3)表达的变化.结果 肿瘤生长曲线表明,与对照组比较,3组实验组均能抑制肿瘤体积的增长,但联合治疗组的肿瘤体积增长更缓慢.与单纯放疗组比较,Ki-67标记指数在CCX联合放疗组出现明显降低(12 f/24 d+ CCX组,t＝5.666,P＝0.004;18 f/36 d+CCX组,t＝2.572,P＝0.042).BrdUrd标记指数在CCX联合放疗组出现明显降低(12 f/24 d+CCX组,t＝5.930,P＝0.001;18 f/36 d+CCX组,t＝5.430,P＝0.006).EGFR表达在CCX联合放疗组出现明显降低(12 f/24 d+CCX组,Z＝-0.281,P＝0.037;18 f/36 d+CCX组,Z＝-2.048,P＝0.031).与单纯放疗组相比,联合治疗组的Caspase-3表达出现明显增高(12 f／24 d+CCX组,Z＝-2.92,P＝0.05;18 f/36 d+CCX组,Z＝-2.739,P＝0.006).结论 通过组织病理证实了FaDu人咽鳞癌荷瘤裸鼠在放疗过程中出现了加速再增殖.CCX联合放疗能够显著抑制肿瘤体积增长,说明CCX能够增强放疗的放射敏感性,值得临床进一步研究.
