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菠萝叶提取物黏附漂浮微丸的制备及评价
采用挤出滚圆法,以壳聚糖为骨架黏附材料,十八醇为漂浮材料,制备菠萝叶提取物(Bolo leaf phenols,BLP)黏附漂浮微丸,评价其体外黏附性、漂浮性及体内滞留情况,并考察药物的体外释放特性.通过体外组织留存量法和直接观察法分别评价微丸的体外黏附性和漂浮性;采用体内组织留存量法和小动物活体成像法考察微丸在大鼠体内的滞留情况;对微丸中指标成分对香豆酸和咖啡酸的体外释放情况进行评价.结果显示,制备的黏附漂浮微丸体外黏附性达(73.2±3.4)％,在人工胃液中可立即起漂,持续漂浮时间在12 h以上;黏附漂浮微丸在大鼠胃内6h时滞留率达40％以上,而普通参比微丸胃滞留率低于15％,两者相比,滞留效果具有显著性差异(P＜0.01);药物体外释放时间可达6h以上,体外释药机制符合Higuchi方程.体内、外研究表明,制备的BLP黏附漂浮微丸具有良好的胃滞留效果和缓释特性.
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利用小动物活体成像技术检测心肌梗死后炎症的进程
目的:利用小动物活体成像技术连续动态评估,同一只鼠心肌梗死后心脏炎症进程的方法.方法:40只成年雄性用荧光素酶标记转录因子NF-κB (NFκB-RE-luc)小鼠,按随机数字表分为对照组和心肌梗死组,每组各20只;心肌梗死组开胸结扎小鼠冠状动脉前降支,对照组只给予开胸处理.分别于术前及术后1天、3天、5天、7天、14天及28天检测NF-κB的转录活性.于3天时,收10只对照组小鼠,CBA检测外周血清中炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的表达,荧光定量PCR检测心肌梗死后心脏组织中的炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的表达.手术后28天,超声心动检测小鼠心功能;心脏组织病理切片,Masson三原色法检测心肌梗死后28天心脏胶原沉积.结果:28天心肌梗死组的病理切片染色和超声心动结果均证明心肌梗死模型造模成功.利用小动物活体成像检测到NF-κB转录活性的动态变化:心肌梗死后1天、3天、5天及7天后NF-κB表达水平与心肌梗死前相比明显升高[(255 400 000±31 280 000),(459 300 000±64 210 000),(461 000 000 ±73 830 000),(380 000 000±41 000 000) vs.(77 280 000±10 750 000) p/s,P＜0.005).心肌梗死术后3天心脏组织炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的mRNA表达和血浆中的炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的水平均明显升高.结论:利用小动物活体成像技术可以活体检测小鼠心肌梗死后心脏炎症过程.
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当归有效组分多元释药系统的构建与初步评价
中药组分多元释药系统是由多组分、多单元构成的体系,根据各组分的性质特点,设计不同释药单元并进行组合,以达到提高生物利用度、增强药效的目的.本研究以当归中超临界提取物、酚酸类和多糖类有效组分为研究对象,以微丸为载体,构建适用于结肠炎及结直肠癌化学预防的多元释药系统.采用挤出-滚圆法制备当归多糖胃部释放微丸,以18～24目收率和平面临界角为指标,采用Box-Behnken试验设计和正交试验设计,分别优化微丸处方与工艺参数.参照课题组前期优化工艺制备超临界提取物与酚酸提取物结肠靶向微丸,并将其与多糖微丸组成当归有效组分多元释药系统,进行质量评价与体外释放研究,采用小动物活体成像法动态考察微丸在小鼠体内过程.确定的当归多糖胃部释放微丸的处方为:微晶纤维素6.5 g、多糖3.3 g、二氧化硅0.2 g和润湿剂(60％乙醇)7 mL;工艺参数为:挤出速率75 r·min-1、滚圆速率1 800 r·min-1和滚圆时间3 min.体内外研究表明,制备的当归有效组分多元释药系统具有良好的释放性能,多糖微丸在人工胃液及胃部快速释放;结肠靶向微丸的靶向性良好,在人工胃液中2h内几乎不释放,在人工小肠液中4h释放小于20％,在人工结肠液中6h释放大于90％.
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阴道用壬苯醇醚即型凝胶的制备与评价
目的 制备以泊洛沙姆为基质的温度敏感型阴道用壬苯醇醚即型凝胶,并评价其流变学性能与体内滞留能力.方法 利用倒置试管法测定胶凝温度,通过单因素实验考察泊洛沙姆与药物浓度对胶凝温度的影响.以相位角变化表征凝胶的相变过程,分别测试在模拟的储存、运输和使用状态下凝胶的流变学性质,并考察阴道模拟液稀释对凝胶相转变过程的影响.使用近红外荧光探针标记凝胶,小动物活体成像评价凝胶在小鼠体内的滞留能力.结果 通过处方优化制得的凝胶其胶凝温度为(31.5±2)℃,相转变过程在3～4 ℃内完成,使用黏度(6.50 Pa·s)＞储存黏度(1.023 Pa·s)＞运输黏度(0.291Pa·s),且经阴道模拟液稀释后在体温条件下能形成凝胶.该凝胶在小鼠阴道内滞留时间长达4h.结论 该凝胶的胶凝温度适宜,流变学性质良好,在阴道内滞留时间较长,满足阴道用药的要求.
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裸小鼠胃癌原位移植模型的建立
目的 建立一种新的裸小鼠胃癌原位移植模型.方法 采用Matrx VIP 3000型气体麻醉系统对实验动物进行麻醉.分别用"包埋法"、"挂线法"、和"胃囊法"建立BALB/c裸小鼠胃癌原位移植瘤模型.术后用Caliper IVIS Kinetic小动物活体成像系统对实体瘤的生长情况进行检测和分析.术后28 d对肿瘤组织进行组织病理学检查.结果 采用包埋法建立胃癌原位移植裸小鼠模型,除了与其它常用方法一样具有高移植成功率以外,还具有操作简便、时间短、难度低、肿瘤组织不易与其它组织直接接触等特点.结论 包埋法能快速制备大批量小鼠胃癌原位移植模型,为胃癌原位移植模型相关研究提供便利.
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利用小动物成像技术在体非创评估小鼠胰岛B细胞容量
目的 利用在小鼠胰岛素2启动子(MIP)后携带有串联三联报告基因(TF,其中包含荧光素酶报告基因)的转基因(MIP-TF)小鼠,通过活体成像系统对其生理和病理状态下的胰岛B细胞容量进行在体评估,从而建立基于该小鼠的对胰岛B细胞进行在体追踪的小动物活体成像平台.方法 MIP-TF小鼠购自美国Jackson实验室.葡萄糖耐量实验(GTT)和葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验分别采用小鼠腹腔内注射1.5和3.0 g/kg葡萄糖进行.45％高脂饮食(HFD)喂养MIP-TF小鼠制备饮食诱导的肥胖小鼠,200 mg/kg链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射制备小鼠糖尿病模型.胰腺胰岛素免疫荧光染色用于胰岛B细胞组织学检测,小动物活体成像检测MIP-TF小鼠胰岛B细胞容量.结果 普食或HFD喂养的MIP-TF小鼠与同窝野生型小鼠(WT小鼠)间体重和空腹血糖水平的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).GTT和葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验结果显示,HFD喂养12周的MIP-TF小鼠与WT小鼠间各时间点的血糖和胰岛素水平的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).MIP-TF小鼠在葡萄糖刺激后,反映胰岛B细胞容量的腹部荧光强度较刺激前增加约1倍,差异有统计学意义(刺激前为74 378.80±23 370.9,刺激后为143 617.50±20 968.65,P＜0.05).HFD喂养MIP-TF小鼠10周后,荧光强度显著增强至普食喂养的MIP-TF小鼠的4倍,差异有统计学意义(普食喂养为479 846.60±103 619.63,HFD喂养为2 014 852.80±345 009.72,P＜0.01);胰岛素免疫荧光染色显示,HFD喂养的MIP-TF小鼠的胰岛素阳性面积显著大于普食喂养的MIP-TF小鼠.普食喂养的MIP-TF小鼠注射大剂量STZ(200 mg/kg)后,荧光强度明显减弱,甚至完全消失,与注射前的差异有统计学意义(注射前为490 482.20±215 546.18,注射后为0.00±0.00,P＜0.01);胰岛素免疫荧光染色也显示,STZ给药的小鼠胰岛素阳性区域几乎完全消失.结论 MIP-TF小鼠胰岛B细胞中特异性表达荧光素酶不影响小鼠的发育和葡萄糖代谢.利用该小鼠进行活体胰岛B细胞容量检测特异性高、敏感性强.该小鼠可作为一种工具动物平台,应用于糖尿病模型中胰岛B细胞容量的动态检测,为国内连续、动态地研究胰岛B细胞容量提供了新途径.
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活体成像技术观察胶质瘤荷瘤鼠中过表达SASH1基因的作用
目的:采用小动物活体成像技术,观察过表达SASH1对荷胶质瘤裸鼠的抗肿瘤生长作用.方法:将稳定表达GFP绿色荧光蛋白及荧光素酶报告基因(luciferase)的胶质瘤SHG-44细胞接种于裸鼠皮下,待成瘤后,将ADV4-SASH1慢病毒注射入裸鼠肿瘤组织中,对照组注射相同剂量的ADV4-NC空载体对照病毒;1周后,腹腔注射底物荧光素(luciferin),用小动物活体成像仪采集荧光值,分析肿瘤生长情况.结果:过表达SASH1的裸鼠中有70％(7/10)肿瘤减小;对照组中有71.4％(5/7)裸鼠肿瘤增加,且有30％(3/10)裸鼠死亡.过表达SASH11周后肿瘤大小减小至90％,对照组肿瘤增大至166％.结论:本实验表明活体成像技术可以实时观察荷瘤鼠异位接种的胶质瘤体的生长情况,初步结果表明在胶质瘤体中过表达SASH1基因可以抑制肿瘤的生长.
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利用小动物活体成像技术快速评价药物的抗肿瘤作用研究
目的 通过小动物活体成像系统观察带有荧光标记的肿瘤细胞在裸鼠体内的生长变化,以快速评价药物的抗肿瘤效果.方法 裸鼠皮下接种HepG2-Luc+肿瘤细胞,设为模型对照组,吉非替尼组(100mg/kg)、环磷酰胺组(30mg/kg)、Copen酸组(100 mg/kg).观察HepG2-Luc+肿瘤细胞在不同组别中的生长情况.结果 与模型对照组的荧光值相比吉非替尼组和研磷酰胺组均有明显的减少,与Copen酸组相比未见明显差异.结论 小动物活体成像技术可能成为抗肿瘤药物快速、有效的筛选和评价方法.
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利用小动物活体成像技术快速评价呼吸道给药效果
目的:通过小动物活体成像观察荧光物质在动物呼吸道的分布,以快速评价呼吸道给药效果.方法:昆明种小鼠鼻腔吸入给予Cy5.5荧光标记的脂质基因复合物气雾剂设为实验组,同时设立阳性对照组,采用气道插管方式注入与实验组等量复合物无水乙醚溶液,阴性对照组吸入给予等量不含Cy5.5标记的气雾剂,观察气雾颗粒在各组小鼠呼吸道的荧光分布.结果:与阴性对照组比较,实验组和阳性对照组小鼠的呼吸道内均有强烈的荧光显示.结论:小动物活体成像技术可能成为呼吸道给药效果的快速、有效的评价方法.
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活体成像观察Ascl2-RNAi对结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响
目的 小动物活体成像直观观察转录因子Ascl2对结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 构建Ascl2的shRNA干扰质粒,对人结肠癌HT-29细胞进行瞬时转染48 h,G418筛选、克隆挑取、扩增培养建立稳定转染的细胞系,采用小动物活体成像仪直观观察Ascl2-RNAi对裸鼠移植瘤生长的影响.结果 成功构建Ascl2的shRNA干扰质粒,并进行测序验证;质粒转染HT-29细胞,经G418筛选后挑选稳定转染的克隆,进行扩增培养,成功建立稳定转染的细胞系,命名为shRNA-Ascl2/HT-29和shRNA-control/HT-29细胞,并采用Western-blot证实干扰效果(P＜0.01);采用小动物活体成像仪直观观察发现Ascl2-RNAi抑制HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长.结论 Ascl2-RNAi导致结肠癌HT-29细胞体外致瘤能力下降,小动物活体成像技术直观、灵敏度高、实验成本低,值得进一步推广应用.
