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丹参均一化酵母双杂交文库的构建及与SmJAZ8互作蛋白的筛选
为构建高质量的丹参cDNA文库以及通过酵母双杂交获得丹参SrnJAZ8互作蛋白基因.研究以丹参的根、茎、叶、花、毛状根为材料,利用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)方式合成全长cDNA,并结合基于双链的特异性核酸酶(duplex-specific nuclease,DSN)均一化技术,构建丹参的均一化全长cDNA文库.通过文库鉴定,检测到cDNA文库库容为1.45 × 106,重组率为100％,插入片段平均大小为500 ～2 000 bp.构建pDEST-pGADT7-SmJAZ8重组载体,将该载体转化Y2HGold菌种,通过酵母双杂交进行互作蛋白的筛选,终筛选到了丹参DnaJ蛋白和UBQ蛋白.该研究既成功构建了丹参均一化全长cDNA文库,又为后续丹参功能基因筛选和基因功能的研究奠定了基础.
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铁皮石斛均一化全长cDNA文库的构建与序列分析
目的:为了获得药用植物铁皮石斛功能基因的信息和筛选功能基因.方法:以SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)方式合成伞长cDNA,结合DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建铁皮石斛茎组织的均一化全长cDNA文库.结果:该文库重组[率为93.9％,文库滴度1.3×106cfu·mL-1,插入片段平均大小1.5kb左右.随机挑取163个阳性克隆进行单侧测序,通过生物信息学分析,获得150个单一序列,其中147个序列与相应的同源蛋白匹配,GO(gene ontology)分类表明这些序列参与各种生化途径.8个序列包含了完整编码框,可判断为全长基因.结论:成功构建了铁皮石斛茎组织均一化全长cDNA文库,为满足铁皮石斛代谢途径等功能基因筛选和基因信息研究奠定了基础.
