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三氧化二砷对人乳腺癌SKBR-3细胞增殖及Notch1表达的影响
目的 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人乳腺癌SKBR-3细胞增殖和迁移力及Notch1 表达的影响.方法 以SKBR-3细胞为研究对象,以不同浓度As2O3培养24h和终浓度8μmol/L培养24、48、72 h后,MTT比色法检测As2O3对SKBR-3细胞增殖的影响；Transwell检测As2 O3对SKBR-3细胞迁移力的影响；RT-PCR检测Notch1 mRNA表达；Western blot检测Notch1蛋白表达.结果 As2O3能显著抑制人乳腺癌SKBR-3细胞增殖,且呈现浓度、时间依赖关系(P＜0.05)；并能抑制SKBR-3细胞的迁移力(P＜0.05)；RT-PCR及Western blot 结果显示As2O3作用SKBR-3细胞后,可使Notch1 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05).结论 As2O3能够抑制SKBR-3细胞Notch1的表达及抑制细胞增殖和迁移力,初步揭示As2O3可能是通过Notch1信号通路影响人乳腺癌细胞生物学行为,从而为临床砷剂治疗乳腺癌提供理论和实验依据.
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舒林酸硫化物对人乳腺癌细胞 SKBR－3增殖与凋亡的影响
目的：研究舒林酸硫化物对人乳腺癌细胞SKBR－3增殖与凋亡的影响及其可能机制。方法用20，40，80μmol? L－1舒林酸硫化物分别处理SKBR－3细胞24，48，72 h，正常组和对照组分别用培养基和0．1％二甲基亚砜处理相同的时间。用噻唑蓝（ MTT）法和流式细胞术来观察舒林酸硫化物对SKBR－3细胞增殖和凋亡的影响，用Western blot 检测细胞中 Bcl －2、Bax、细胞色素 C、Caspase－3、Cleaved Caspase－3蛋白水平。结果舒林酸硫化物可明显抑制SKBR－3细胞的增殖，同时促进细胞的凋亡。舒林酸硫化物在作用SKBR－3细胞24 h后，与正常组比较 Bcl －2和线粒体细胞色素 C 蛋白水平显著下降（P＜0．05），Bax、Cleaved Caspase －3和胞质细胞色素 C 蛋白水平显著升高（P＜0．05），而Caspase－3蛋白水平差异无统计学意义（P＞0．05）。结论舒林酸硫化物能够抑制细胞的增殖，促进细胞的凋亡，其促进细胞凋亡的机制可能是通过下调Bcl－2蛋白的表达与上调Bax蛋白的表达，诱导细胞色素C从线粒体中释放，终激活Caspase－3蛋白，进而促进SKBR－3细胞的凋亡。
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RNA干扰survivin基因增强SKBr-3细胞对多柔吡星敏感性的体外研究
目的 探讨抑制survivin基因的表达对人乳腺癌SKBr-3细胞化疗敏感性的影响.方法 构建针对survivin基因序列特异性shRNA的表达载体,脂质体转染SKBr-3,G418筛选阳性克隆.实验分为RNA干扰组(S1&P),脂质体对照组(H1&P)和空白对照组.光镜观察转染后细胞的形态变化;0.5 μg/ml 多柔吡星作用于转染后的细胞,电镜观察细胞形态学变化;TUNEL染色、Annexin V荧光标记检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖的抑制率.结果 成功构建具有新霉素抗性的靶向survivin的序列特异性shRNA表达载体,基因测序完全正确;转染后干扰组细胞均发生细胞凋亡的形态学改变;低剂量多柔吡星诱导后,TUNEL染色结果,S1&P组凋亡细胞比例(23.6±4.8)%明显高于H1&P组(4.1±1.1) %和空白对照组(3.2±1.4) %(P<0.05),表明转染了RNA干涉载体的SKBr-3细胞对低剂量多柔吡星的敏感性显著增加;Annexin-V染色结果:空白对照组凋亡比例为(17.43±3.12)%,H1&P组为(20.51±4.67)%,S1&P组为(68.76±8.49)%,后者与前两者比较均有统计学差异(P<0.05).干扰组细胞凋亡率、细胞增殖的抑制率均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 体外实验证实抑制survivin基因的表达可提高乳腺癌SKBr-3细胞对多柔吡星的敏感性.
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Cαs在乳腺癌SKBR-3细胞中的作用
目的：RNA干涉技术沉默乳腺癌SKBR-3细胞中Cαs的表达，观察Cαs表达改变对乳腺癌SKBR-3细胞增殖、侵袭的影响，并检测其对细胞中 Her-2表达的影响。方法：根据Cαs基因序列设计并合成siRNA片段（ Cαs-siRNA）转染SKBR-3细胞，利用荧光实时定量qRT-PCR检测细胞中Cαs基因mRNA水平的变化。Westerm blot检测Cαs及Her-2蛋白水平的变化。MTT法检测SKBR-3细胞增殖。Tramswell小室侵袭实验检测SKBR-3细胞侵袭能力变化。结果：Cαs-siRNA下调了SKBR-3细胞中Cαs mRNA水平与蛋白水平的表达，Her-2的表达增加，转染细胞的增殖和迁移侵袭能力增强。结论：Cαs-siRNA能够下调Cαs的表达，并明显促进SKBR-3细胞的增殖及迁移侵袭能力，Cαs失活或缺失可能通过延迟Her-2的降解促进乳腺癌的增殖和侵袭。
