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人参皂苷Rg2及其立体异构体对氧糖剥离/再灌注细胞模型的影响
目的 观察不同浓度的人参皂苷Rg2(ginsenoside-Rg2)及其立体异构体[20(R)-Rg2和20(S)-Rg2]对氧糖剥离/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)细胞模型的保护作用,探讨其作用机制并比较天然型Rg2、20(R)-Rg2和20 (S)-Rg2作用效果的差异性.方法 将培养7天的皮层神经元分成5组:对照组、模型组、Rg2组、20(R)-Rg2组及20 (S)-Rg2组,Rg2组、20 (R)-Rg2组及20 (S)-Rg2组分别加入浓度为20、40、80μmol/L的Rg2、20 (R)-Rg2和20 (S)-Rg2预先处理24 h,然后制备OGD/R模型;24 h后检测细胞存活率、凋亡因子Caspase-3的活性、胞内Ca2+浓度以及超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量.结果 与对照组比较,模型组细胞的存活率、SOD活力明显降低,Caspase-3的活性、Ca2+荧光灰度值及MDA含量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,20、40、80 μm ol/L浓度时Rg2、20(R)-Rg2和20(S)-Rg2组细胞存活率、SOD活力均显著升高,Caspase-3活性、Ca2+荧光灰度值及MDA含量均显著降低(P＜0.05);与20(S)-Rg2组比较,20、40、80 μmol/L浓度时Rg2和20(R)-Rg2组的细胞存活率升高、MDA含量降低(P＜0.05),80 μmol/L浓度时20(R)-Rg2组及40、80 μmol/L浓度时Rg2组的Caspase-3活性降低、SOD活力升高(P＜0.05),40、80 μm ol/L浓度时Rg2和20(R)-Rg2组的Ca2+荧光灰度值降低(P＜0.05);与20(R)-Rg2组比较,80μmol/L浓度时Rg2组的Ca2+荧光灰度值降低(P＜0.05),40、80μmol/L浓度时Rg2组的SOD活力升高(P＜0.05),20、40、80 μmol/L浓度时Rg2组的MDA含量降低(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg2及其立体异构体预处理可以提高OGD/R条件下的细胞活力,其机制可能与提高细胞抗凋亡、抗氧化能力及减少Ca2+内流有关,并且20(R)-Rg2的作用效果优于20 (S)-Rg2却低于天然型Rg2.
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体外诱导SH-SY5Y细胞凋亡的氧糖剥离再灌注模型的建立及评价
目的:通过体外模拟缺血-再灌注损伤(I/R)诱导细胞凋亡的氧糖剥离再灌注(OGD/R)模型的建立与评价,探讨成功诱导神经元凋亡发生的可靠时间窗,为进一步阐明神经元凋亡机制奠定基础.方法:选用人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞分为对照组和实验组,实验组给予不同的OGD/R时间,通过MTT法计算细胞存活率,选定再灌注24h存活率接近50％的OGD10h/R组和对照组细胞,通过光镜、荧光显微镜及电镜观察细胞形态学改变,采用试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平、胞浆内丙二醛(MDA)含量及细胞中超氧化物歧化酶( SOD)活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率.结果:MTT法结果显示,细胞存活率随OGD时间延长显著降低,OGD10h/R24h组为对照组的(44.91±1.21)％,不同OGD/R时间组间细胞存活率比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).倒置显微镜及HE染色显示,OGD10h/R组细胞密度减低,形态多样性,核固缩；AO/EB荧光染色可见凋亡小体形成,电镜显示核内异染色质凝集、趋边等凋亡的改变.实验组培养液内LDH水平及胞浆内MDA含量随再灌注时间延长而增加,LDH水平于再灌注24 h达峰值,MDA含量于再灌注24 h接近平台期,胞浆内SOD活性随再灌注时间延长呈现先降低后回升的趋势,与相同时间对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术检测细胞周期显示,随再灌注时间延长,OGD10h/R组G0/G1期细胞比例逐渐增加,24 h达峰值(74.09±2.62)％,其后有所降低,G2/M期细胞比例再灌注0 h时高达(26.85±1.35)％,此后逐渐降低,24 h前均显著高于同时间对照组细胞,S期细胞比例逐渐降低,24 h低达(19.2±1.58)％,此后逐渐升高,与同时间对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:体外模拟I/R模型的OGD10h/R组能够成功诱导SH-SY5Y细胞凋亡的发生,可进一步应用于凋亡机制的研究.
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体外模拟脑缺血再灌注OGD/R模型的差异凝胶电泳分析
目的:通过体外模拟缺血-再灌注损伤(I/R)诱导细胞凋亡的氧糖剥离再灌注(OGD/R)模型的建立,应用蛋白质组学技术观察凋亡细胞蛋白质组的差异表达,进一步揭示神经元凋亡的发生机制.方法:选用人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞分为对照组和实验组,实验组给予OGD10h/R24h处理建立OGD/R诱导SH-SY5Y细胞凋亡模型,提取对照组和实验组细胞总蛋白,利用荧光染色双向差异凝胶电泳技术(2D-DIGE)检测细胞蛋白质组的差异表达变化.结果:DeCyder软件分析2D-DIGE凝胶图像显示平均分离了(1 800±156)个蛋白质点；与对照组比较,实验组共有30个蛋白点的表达水平有显著变化(蛋白表达量上调或下调30％以上),其中22个升高,8个降低,与同时间对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:应用双向差异凝胶电泳的蛋白质组学技术在OGD/R模型中发现有差异蛋白的表达.
关键词： 氧糖剥离/再灌注 蛋白质组学 二维荧光差异凝胶电泳
