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谷胱甘肽硫基转移酶μ-3在前列腺癌中的表达及意义
目的：探讨谷胱甘肽硫基转移酶μ-3（ glutathione S-transferase mu 3，GSTM3）在前列腺癌中的表达及意义。方法2012年9月至2013年9月应用二维荧光差异凝胶电泳技术筛选前列腺癌标本中的差异蛋白，并利用质谱分析验证前期表达谱基因芯片结果获得的GSTM3。选取28例行根治性前列腺切除术患者的病理标本。患者年龄＜60岁22例，≥60岁6例；PSA 水平＜4μg/L 5例，≥4μg/L 23例；Gleason评分＜7分26例，≥7分2例；TNM分期＜T2a期18例，≥T2a期10例。采用实时荧光定量PCR法检测前列腺癌组织及其癌旁组织中GSTM3的表达情况，分析GSTM3与患者临床病理参数的相关性。结果二维荧光差异凝胶电泳获得前列腺癌与癌旁组织的双向凝胶电泳图谱，结果显示GSTM3为差异表达的蛋白，GSTM3蛋白在前列腺癌组织中表达下调，与癌旁组织比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。实时荧光定量PCR法检测结果显示，GSTM3在癌旁组织中的表达（8．12±0．51）显著高于癌组织（7．18±0．54），差异有统计学意义（P＜0．05）。 GSTM3的表达与患者的年龄、PSA水平、Gleason评分、TNM分期均无显著相关性（P＞0．05），在不同PSA水平分组中GSTM3表达差异无统计学意义（P＞0．05）。结论与癌旁组织比较，GSTM3在前列腺癌组织中表达下调，但GSTM3的表达与前列腺癌的恶性程度无关。
关键词： 谷胱甘肽硫基转移酶μ-3 前列腺癌 二维荧光差异凝胶电泳 -
正常官颈宫颈上皮内瘤变与宫颈鳞癌组织的差异表达蛋白分析
目的 探讨采用比较蛋白质组学方法筛查正常宫颈、官颈上皮内瘤变(CIN)和官颈鳞癌(SCC)组织中的差异表达蛋白,为研究CIN发展为SCC的分子机制及临床诊治工作提供依据.方法 收集正常宫颈组织(因子宫肌瘤行全子宫切除术)9例、CIN组织23例(其中CIN Ⅰ级7例、CINⅡ级8例、CINⅢ级8例)和SCC组织7例.应用二维荧光差异凝胶电泳和DeCyder软件寻找差异表达蛋白质点,基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱仪鉴定差异蛋白质点,数据库搜索差异表达蛋白.收集正常官颈组织20例、CIN组织60例和SCC组织20例,应用免疫组化法和Western blot法验证差异显著的S100蛋白A9(S100A9)、真核翻译延长因子1α1(eEF1 A1)和丙酮酸激酶M2(PKM2)在不同官颈组织中的表达差异.结果 建立了分辨率高、重复性好的正常宫颈、CIN与SCC的双向凝胶电泳图谱.选取显著表达差异蛋白质点46个(其中上调27个,下调19个)进行鉴定,成功鉴定出26个蛋白质.免疫组化法检测结果显示,S100A9蛋白主要表达于细胞质,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为20.0％、70.0％和100.0％,差异有统计学意义(P=0.006).eEF1A1蛋白主要表达于细胞质,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为70.0％、73.3％和60.0％,差异无统计学意义(P =0.758).PKM2蛋白主要表达于细胞核,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为100.0％、93.3％和75.0％,差异接近有统计学意义(P =0.059).Western blot法检测的结果与免疫组化法检测的结果基本一致.结论 正常官颈、CIN和SCC组织间存在蛋白质表达的差异.S100A9、eEF1 A1和PKM2可能成为官颈癌早期诊断的标志物和治疗的新靶点,并为研究CIN发展为官颈癌的发病机制提供基础.
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宫颈上皮内瘤变与正常宫颈组织差异表达蛋白分析
目的 探讨蛋白质组学方法筛查正常宫颈与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的差异表达蛋白质标志物,为研究CIN发生的分子机制及临床诊治工作提供依据.方法 收集2008年8月至2009年9月间首都医科大学附属北京妇产医院妇瘤科收治的正常子宫颈组织因子宫肌瘤手术行全子宫切除术患者9例为对照组、CIN组织23例(其中CINⅠ 7例、CINⅡ8例、CINⅢ8例).应用二维荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2-DDIGE)及DeCyder软件寻找差异表达蛋白质点,基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分析差异蛋白质点,数据库搜索鉴定差异表达明显的S100蛋白家族A9 (S100 calcium-binding protein A9,S100A9),真核延长因子1α1(eukaryotic elongation factor 1-alpha-1,eEF1A1)及丙酮酸激酶M2 (pyruvate kinase M2,PKM2)3种蛋白质；应用免疫组织化学法( immunohistochemistry,IHC)(其中正常宫颈组织10例、CIN Ⅰ 10例、CINⅡ10例、CINⅢ10例)及蛋白印记法(Western blotting)(其中正常宫颈组织12例,CIN Ⅰ～Ⅱ12例,CINⅢ12例)进一步验证上述3种蛋白在CIN组织和正常宫颈组织的表达差异.结果 获得CIN组织与正常宫颈组织2-D DIGE图,成功鉴定25个蛋白；免疫组化及蛋白印迹验证结果提示:S100A9蛋白表达于细胞质中,在CIN中表达水平高于正常组,差异有统计学意义(P=0.010)；eEF1A1蛋白表达于细胞质中、PKM2蛋白表达于细胞核中,2者在CIN中表达水平均低于正常组,差异有统计学意义(P分别为0.352,0.000).结论 在正常宫颈组织与CIN组织之间存在差异蛋白质表达,S100A9蛋白可能成为辅助诊断CIN的相关标志物,PKM2蛋白可能成为抑制CIN发生的蛋白质,并可根据2种差异蛋白表达预测CIN的发生发展.
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体外模拟脑缺血再灌注OGD/R模型的差异凝胶电泳分析
目的:通过体外模拟缺血-再灌注损伤(I/R)诱导细胞凋亡的氧糖剥离再灌注(OGD/R)模型的建立,应用蛋白质组学技术观察凋亡细胞蛋白质组的差异表达,进一步揭示神经元凋亡的发生机制.方法:选用人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞分为对照组和实验组,实验组给予OGD10h/R24h处理建立OGD/R诱导SH-SY5Y细胞凋亡模型,提取对照组和实验组细胞总蛋白,利用荧光染色双向差异凝胶电泳技术(2D-DIGE)检测细胞蛋白质组的差异表达变化.结果:DeCyder软件分析2D-DIGE凝胶图像显示平均分离了(1 800±156)个蛋白质点；与对照组比较,实验组共有30个蛋白点的表达水平有显著变化(蛋白表达量上调或下调30％以上),其中22个升高,8个降低,与同时间对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:应用双向差异凝胶电泳的蛋白质组学技术在OGD/R模型中发现有差异蛋白的表达.
关键词： 氧糖剥离/再灌注 蛋白质组学 二维荧光差异凝胶电泳 -
钙结合蛋白在前列腺癌中的下调表达及其临床意义
目的 探讨钙结合蛋白(CAB39)在前列腺癌中的作用及其临床意义.方法 应用蛋白组学二维荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)技术筛选出在局限性前列腺癌与癌旁组织差异性表达的CAB39蛋白,质谱分析(MS)鉴定、免疫组织化学技术检测CAB39蛋白在24例前列腺癌与癌旁组织中的表达,结合CAB39免疫组织化学评分和前列腺癌患者的临床病理参数进行分析.结果 CAB39蛋白在癌旁组织中的免疫组织化学染色阳性率高于前列腺癌组织(70.8％比33.3％,P＜0.01),CAB39蛋白表达在前列腺癌患者年龄、血清前列腺特异抗原(PSA)水平、Gleason评分和肿瘤TNM分期各不同分组中的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CAB39蛋白在前列腺癌患者中下调表达,它可能是前列腺癌抑制因子.
关键词： 钙结合蛋白 前列腺癌 二维荧光差异凝胶电泳
