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姜黄素对缺血再灌注H9c2心肌细胞凋亡和GSK-3表达及其磷酸化的影响
目的 观察姜黄素对缺血再灌注(ischem ia-reperfusion,I/R) H9 c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响.方法 利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90 min,再灌注30 min)、姜黄素组(再灌注同时加入7.5 μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120 min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达.结果 与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006；t=5.854,P=0.004).与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001；t=-3.607,P=0.023),存活率及pSer-GSK-3表达水平显著升高(t=9.165,P=0.001；t=3.747,P=0.02).结论 GSK-3的酪氨酸和丝氨酸磷酸化可能参与心肌细胞I/R损伤,姜黄素减少I/R心肌细胞凋亡可能与其通过减少酪氨酸磷酸化、增加丝氨酸磷酸化抑制GSK-3活性有关.
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肺炎链球菌粘附肺Ⅱ型上皮细胞触发宿主细胞酪氨酸蛋白磷酸化
目的探讨细胞内信号传导与肺炎链球菌侵袭、致病的关系，在体外研究Ⅲ型肺炎链球菌粘附肺Ⅱ型上皮细胞(A549)是否能触发细胞内酪氨酸蛋白激酶(TPK)信号传导途径，以及触发该信号传导可能的细菌亚组分。方法用FITC荧光标记肺炎链球菌，在体外观察肺炎链球菌粘附肺Ⅱ型上皮细胞的粘附动力学特征；用免疫组织化学和ELISA方法观察完整细菌触发的细胞内酪氨酸蛋白磷酸化，用各种因素预处理肺炎链球菌后，观察触发细胞内酪氨酸蛋白磷酸化可能的细菌亚组分。结果证实了上述粘附过程存在剂量依赖和时间依赖关系，而且是特异的过程；细菌粘附使细胞内酪氨酸蛋白磷酸化，且磷酸化蛋白的产生与粘附具有时间和剂量依赖性。进一步实验证实：细胞内蛋白酪氨酸磷酸化由细菌表面蛋白质介导。结论肺炎链球菌粘附肺Ⅱ型上皮细胞能触发细胞内信号传导，且细菌表面蛋白质在触发胞内酪氨酸蛋白磷酸化信号传导中起着重要作用。
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槲皮素对血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素(quercetin)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(SMC)酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响.方法:采用噻唑蓝比色法,流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响,应用免疫印迹法分析观察槲皮素对PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制PDGF诱导的SMC增殖及酪氨酸磷酸化蛋白的表达,尤以酪氨酸磷酸化蛋白分子量为85～180 kD明显.结论:槲皮素可显著地抑制PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达.
