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葛根素对氧自由基培养的脐静脉内皮细胞ADMA-DDAH系统的影响
目的 观察葛根素对氧自由基(oxidized free radical,OFR)培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)二甲基精氨酸-二甲基赖氨酸水解酶(dimethylarginine dimethylaminohydrolase,DDAH)活性及表达的影响,以探讨葛根素对不对称二甲精氨酸(ADMA)代谢机制的影响.方法 采用改良的Jaffe法培养原代HUVECs,取生长良好的3～6代HUVECs用于实验,分为(1)空白对照组:加DMEM培养液;(2)OFR组:加入OFR 0.1 mmol/L;(3)葛根素Ⅰ组:加0.1 mmol/L OFR及0.5 mg/ml葛根素;(4)葛根素Ⅱ组:加0.1 mmol/L OFR和1.0 mg/ml葛根素.共孵24 h后,检测上清液中NO、NOS活性、ET、ADMA含量、L-胍氨酸(L-cit)浓度,采用Western blotting测定细胞裂解液中DDAH的蛋白表达.结果 OFR条件培养下,内皮细胞的代谢产物ADMA、ET含量均较空白对照组高,而NO及NOS的活性减少;反应DDAH酶活性的L-cit浓度显著降低,而DDAH的表达无明显变化.葛根素干预后,ADMA、ET含量较OFR组降低,NOS活性及NO增加,L-cit浓度明显升高.结论 OFR培养下,内皮损伤ADMA的增加与DDAH的活性减弱有关,而与DDAH的表达无关.葛根素通过增加DDAH活性促进ADMA代谢,使NOS活性增加,抑制OFR对内皮功能的损伤.
关键词： 氧自由基 内皮细胞 不对称二甲精氨酸 二甲基精氨酸-二甲基赖氨酸水解酶 葛根素 -
冠状微血管痉挛性心绞痛患者血内源性一氧化氮合酶抑制物的变化
目的:探讨冠状微血管痉挛性心绞痛(X综合征)发病机制.方法:收集我院2002年6月～2005年6月住院患者中诊断为X综合征患者20例,排除高血压病、糖尿病、肥厚型心肌病等疾病.以年龄、性别相匹配的20例健康人作为正常对照组.检测所有受试者静脉血内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物-不对称二甲精氨酸(ADMA)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)和超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)、血脂、血糖和纤维蛋白原等指标.结果:①与正常对照组相比,X综合征组ADMA、内皮素水平明显升高,一氧化氮水平明显降低,有显著性差异(P均＜0.05),ADMA与内皮素/一氧化氮呈明显的正相关,r=0.709.②X综合征组丙二醛明显高于正常对照组,超氧化物歧化酶则明显低于正常对照组(P均＜0.05).③两组胆固醇、甘油三脂及低密度脂蛋白、血糖和纤维蛋白原水平无明显差异.结论:X综合征患者存在明显的冠状动脉血管内皮功能不良,且这种内皮功能异常与内源性一氧化氮合酶抑制剂ADMA有关.同时氧化应激在X综合征的发病中也起着重要的作用.
关键词： 冠状微血管痉挛性心绞痛 内皮功能 不对称二甲精氨酸 -
高静水压对内皮细胞产生不对称二甲精氨酸的影响及葛根素对其作用
目的观察高静水压培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)产生不对称二甲精氨酸(ADMA)的情况及中药葛根素干预后的变化.方法采用改良的Jaffe法培养原代HUVECs,取生长良好的3～6代HUVECs用于实验,分为大气压组(加等量DMEM培养液)、高静水压组(23.9 kPa)和高静水压+葛根素组.测定上清液中ADMA、左旋精氨酸(L-arg)、一氧化氮(NO)和内皮素(ET)的浓度及血管紧张素转换酶(ACE)的活性.结果高静水压组ADMA及ET含量、细胞内钙(Ca2+)浓度及ACE活性增加,而NO含量减少.葛根素干预后,ADMA及ET含量减少,ACE活性降低,NO含量增加,而L-arg水平无明显变化.结论高静水压通过增加ADMA导致内皮功能紊乱,葛根素则能通过减少ADMA减轻高压导致的内皮细胞代谢功能障碍.
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葛根素对ox-LDL培养血管内皮细胞内源性一氧化氮合酶抑制物代谢的研究
目的:采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察中药葛根素(Puerarin)对内皮细胞产生内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物-不对称二甲精氨酸(ADMA)的影响.方法:采用改良的Jaffe法培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs),取3～6代内皮细胞用于实验,分为ox-LDL(150 mg/L)和无ox-LDL(no-ox-LDL)两组;每组又分为对照组、葛根素Ⅰ(0.5 mg/ml)和葛根素Ⅱ(1.0 mg/ml)3组.检测上清液中ADMA、L-arg、ET、NO、ACE活性及细胞内[Ca2+]i的含量.结果:与no-ox-LDL的对照组相比, ox-LDL组VECs分泌的ADMA、ET、[Ca2+]i浓度增加(P<0.01),ACE活性升高,而NO减少;ox-LDL组中的葛根素Ⅰ和Ⅱ组与该组中的对照组相比,其VECs产生NO的量明显增加,分泌ADMA及ET含量则减少,且呈浓度依赖性,而L-arg的浓度没有明显改变.结论:ox-LDL使VECs分泌ADMA的量增加,产生NO减少,[Ca2+]i水平增加.葛根素能减轻ox-LDL对VECs功能的损害作用,使NO产生增加,其机制可能与ADMA的分泌和细胞内[Ca2+] i水平减少有关.
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冠心病患者血内源性一氧化氮合酶抑制物变化的意义
目的 测定冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)患者血中的内源性一氧化氮合酶抑制物--不对称二甲精氨酸(ADMA)等指标,以进一步探讨冠心病患者冠脉血管内皮功能损伤的机制.方法 收集本院2002年6月～2005年6月冠状动脉造影结果有冠脉单支或多支狭窄70%以上20例,作为冠心病组.并以年龄、性别相匹配的20例健康人作为对照组.所有应试者取静脉血测定ADMA、一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)、和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血脂、血糖和纤维蛋白原等指标,并进行比较.结果 (1)与正常对照组比较,冠心病组ADMA、ET-1和MDA水平明显升高,NO和SOD水平明显降低,有显著性差异(P均<0.05),ADMA与NO呈明显的负相关(r=-0.53,P<0.01).(2)冠心病组血胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、脂蛋白α(TC、TG、LDL、HDL-C、Lpa)水平多数有异常,而血糖和纤维蛋白原水平,2组无差异.结论 冠心病患者存在明显的内皮功能异常,与内源性一氧化氮合酶抑制剂ADMA有关;同时氧化应激在冠状动脉粥样硬化性心脏病的发病中也起重要作用.
关键词： 冠状动脉粥样硬化性心脏病 内皮功能 不对称二甲精氨酸 -
卡维地洛对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞ADMA-DDAH系统的影响
目的 观察卡维地洛对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)二甲基精氨酸-二甲基赖氨酸水解酶(DDAH)活性及表达的影响,以探讨卡维地洛对内源性一氧化氮合酶抑制物不对称二甲精氨酸(ADMA)代谢机制的影响.方法 采用改良的Jaffe法培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs),取生长良好的3～6代HUVECs用于实验,分为(1)空白对照组:加DMEM培养液;(2)ox-LDL组:加入ox-LDL(100 mg/L,150 mg/L);(3)ox-LDL+卡维地洛组:同时加入150 mg/L ox-LDL及卡维地洛(10 μmol/L)共孵24h后,检测上清液中NO、NOS活性、ADMA含量、L-胍氨酸(L-cit)浓度,采用Western blotting测定细胞裂解液中二甲基精氨酸-二甲基赖氨酸水解酶(DDAH)的蛋白表达.结果 ox-LDL条件培养下,内皮细胞的代谢产物ADMA、ET的量均较空白对照组高,而NO的量及NOS的活性减少;反应DDAH酶活性的L-cit浓度显著降低,且有浓度依赖性,而DDAH的表达无明显变化.卡维地洛干预后,ADMA、ET的量较ox-LDL组降低,NOS活性及NO增加,L-cit浓度明显升高.结论 ox-LDL诱导下,内皮损伤ADMA的增加与DDAH的活性减弱有关,而与DDAH的表达无关.卡维地洛通过增加DDAH活性促进ADMA代谢,使NOS活性增高,抑制ox-LDL对内皮功能的损伤.
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尼莫地平对氧化型低密度脂蛋白培养的内皮细胞不对称二甲精氨酸的影响
目的探讨氧化型一低密度脂蛋白ox-LDU对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养液中内源性一氧化氮合酶抑制剂一不对称二甲精氨酸(ADMA)的影响及尼莫地平的干预作用.方法采用改良的Jaffe法原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),取3-6代HUVECs用于实验.用Cu++引发脂质过氧化过程,制备氧化型低密度脂蛋白.按实验要求加入不同浓度的ox-LDL和尼莫地平,与内皮细胞共同孵育(37℃,5％C02)24h后,收集细胞及培养液.高效液相色谱法(HPLC)测定ADMA、L-arg的浓度.流式细胞仪测定细胞内Ca“含量,同时测定培养液NO、ET含量.结果与空白对照组比较,ox-LDL使HUVECs产生ADMA的量呈浓度依赖性增加,ET及细胞内Ca"含量显著升高;而合成NO的量减少.尼莫地平能显著减少ox-LDL诱导的ADMA增加,增加NO的合成,同时细胞内C矿含量及ET降低,而合成NO的底物L-arg无明显变化.结论ox-LDL增加内源性NOS抑制剂-ADMA的产生,导致内皮细胞的功能障碍.尼莫地平能减少ox-LDL诱导的ADMA增加,从而减轻ox-LDL诱导的内皮细胞代谢功能障碍.
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高静水压对内皮细胞一氧化氮合酶抑制物的影响及卡托普利的干预作用
目的:观察高静水压培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内源性一氧化氮(NO)合酶抑制物--不对称二甲精氨酸(ADMA)的影响及卡托普利的保护作用.方法:采用改良的Jaffe法培养原代HUVECs,取生长良好的3～6代HUVECs用于实验,分为①大气压组:加等量DMEM培养液;②高静水压组;③高压加卡托普利组.测定上清液中ADMA、左旋精氨酸(L-arg)、NO和内皮素(ET)的浓度,并测定血管紧张素转化酶(ACE)的活性.结果:高静水压组ADMA、ET的量、细胞内钙[Ca2+]i及ACE活性增加,而NO的量减少.卡托普利干预后,上清液中ADMA、ET的浓度减少,ACE活性降低,NO的量增加,而L arg水平无明显变化.结论:高静水压通过增加ADMA导致内皮功能紊乱,卡托普利则能通过减少ADMA减轻高压导致的内皮细胞代谢功能障碍.
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2型糖尿病患者不对称二甲精氨酸浓度变化及临床意义
目的 观察2型糖尿病(non-insulin dependent diabetes mellitus,NIDDM)患者血浆中不对称二甲精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)浓度变化以及对一氧化氮(nitric oxide,NO)和内皮素(endothelin,ET)的影响,并探讨其临床意义.方法 采用高效液相色谱法(highperforance liquid chromatography,HPLC)、硝酸盐还原酶比色法及放射免疫法,分别对98例NIDDM患者(其中并发血管病变者54例)血浆中ADMA、NO、ET浓度进行测定,并与30例健康人进行对比分析.结果 NIDDM患者与健康人相比,患者血浆中ADMA、ET浓度明显增高,NO浓度明显降低,差异均有显著性意义(P＜0.05),并发血管病变者较无并发症者这种变化更显著(P＜0.01).结论 ADMA是内皮功能障碍的一个新的危险因子.血浆ADMA浓度变化在NIDDM血管并发症的发生发展过程中起重要作用.
